Αρνητική θεμελίωση χρώσης, τεχνική, πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα

Το αρνητική χρώση Είναι μια ειδική μέθοδος χρωματισμού για να επισημάνει την παρουσία της κάψουλας σε ορισμένους μικροοργανισμούς - κυρίως Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae και Cryptococcus neoformans-, από κλινικά δείγματα ή από καθαρές καλλιέργειες.

Το άμεσο δείγμα που χρησιμοποιείται συνήθως για την εφαρμογή αρνητικής χρώσης είναι το εγκεφαλονωτιαίο υγρό. Αυτή η τεχνική αντιπροσωπεύει μια γρήγορη εναλλακτική λύση για την τεκμαιρόμενη διάγνωση της μηνιγγίτιδας, ιδιαίτερα Cryptococcus neoformans.

Ομοίως, αυτός ο λεκές μπορεί να εφαρμοστεί σε πτύελα και αποστειρωμένα υγρά εν γένει, καθώς και σε στελέχη που λαμβάνονται από μικρές καθαρές καλλιέργειες. Αυτή η τεχνική χρησιμοποιεί nigrosine ή κινεζική μελάνη για την εκτέλεσή της. Ως εκ τούτου, είναι μια πολύ απλή και οικονομική μεθοδολογία που εφαρμόζεται που παρέχει πληροφορίες εξαιρετικής διαγνωστικής αξίας σε σύντομο χρονικό διάστημα.

Με αυτή την έννοια, κάθε εργαστήριο είναι σε θέση να εκτελέσει αυτόν τον χρωματισμό. Φυσικά, το εργαστήριο πρέπει να διαθέτει ικανό προσωπικό ικανό να αναγνωρίζει τις ζύμες του Cryptococcus neoformans απομονωμένο ή εκκολαπτόμενο και να τα διαφοροποιήσει από τα λευκοκύτταρα και τα τεχνουργήματα που μπορεί να παρουσιάσει το δείγμα.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
• 2 Τεχνική
  • 2.1 Υλικά
  • 2.2 Προδιαγραφές δειγματοληψίας
  • 2.3 Εκτέλεση της τεχνικής με απευθείας δείγματα
  • 2.4 Εκτέλεση της τεχνικής με στελέχη από τον πολιτισμό
  • 2.5 Παρατήρηση σε μικροσκόπιο
• 3 Πλεονεκτήματα
• 4 Μειονέκτημα
• 5 Κηλίδωση ιστού με ινδική μελάνη
• 6 Αναφορές

Ίδρυμα

Το Nigrosine και το ινδικό μελάνι δρουν με παρόμοιο τρόπο. Συνεπώς, οποιαδήποτε από τις δύο ουσίες μπορεί να χρησιμοποιηθεί εναλλακτικά.

Αυτή η τεχνική ονομάζεται αρνητική χρώση επειδή αντιδρά με τις υπόλοιπες τεχνικές χρωματισμού. Σε αυτό που παραμένει άσχημο είναι η δομή που αναζητάτε ή που θέλετε να δείτε. δηλαδή, οι μικροοργανισμοί.

Επομένως, ο χρωματισμός βασίζεται στη βαφή του πυθμένα του επιχρίσματος σε σκούρο χρώμα. Σε αυτό το σενάριο οι κεκλιμένες κατασκευές θα επισημανθούν με ανοιχτό ή άχρωμο χρώμα.

Γενικά, οι ζυμομύκητες παρατηρούνται με τρύπες, περιβαλλόμενες από ένα καθαρό φωτοστέφανο που αντιστοιχεί στην κάψουλα. Αυτό συμβαίνει επειδή το μελάνι και νιγκροζίνη δεν είναι σε θέση να διεισδύσουν στην πολυσακχαρίτη ουσίες που σχηματίζουν την κάψουλα ζωντανούς μικροοργανισμούς.

Αξίζει να σημειωθεί ότι άλλες δομές που μπορεί να υπάρχουν στο άμεσο δείγμα, όπως τα λευκοκύτταρα ή τα ερυθρά αιμοσφαίρια, δεν διεισδύουν.

Τώρα, αν οι μικροοργανισμοί σκοτώνονται, η χρωστική ουσία μπορεί να διεισδύσει σε αυτά, έτσι ώστε αυτή η χρώση είναι επίσης χρήσιμη για την αξιολόγηση της βιωσιμότητας των μικροοργανισμών.

Τεχνική

Υλικά

Νιτροζίνη

Το nigrosine οφείλει το όνομά του στο μαύρο χρώμα που έχει. Είναι μια συνθετική ουσία που λαμβάνεται με θέρμανση του μίγματος της-όπως οργανικές ενώσεις όπως νιτροβενζόλιο, ανιλίνη και ανιλίνη hydrochlorite της χρήση ενός καταλύτη στην εν λόγω αντίδραση (σίδηρος ή χαλκός).

Κινεζική μελάνη

Το κινέζικο μελάνι είναι μια ουσία που χρησιμοποιείται κυρίως από τους Ασιάτες για γραφή, κάνοντας έργα τέχνης και μονόχρωμη ζωγραφική. Είναι πολύ δημοφιλές στην κινεζική κουλτούρα.

Λαμβάνεται από καλαμάρια που αναμιγνύεται με κονιοποιημένο άνθρακα, προϊόν καύσης μικρών ρητινών δέντρων.

Είναι επίσης δυνατή η παρασκευή αιθάλης από την αποτέφρωση των υδρογονανθράκων (φυτικά έλαια), μαζί με μια πρωτεΐνη που δίνει τη ζελατίνη κατάλληλη συνοχή ώστε να αποφεύγεται η καταβύθιση των σωματιδίων άνθρακα.

Προδιαγραφές για τη δειγματοληψία

- Δεν απαιτεί νηστεία.

- Το δείγμα CSF, πτύελου ή αποστειρωμένου υγρού πρέπει να περιέχει τουλάχιστον 1 ml όγκου και πρέπει να μεταφερθεί αμέσως στο εργαστήριο σε θερμοκρασία δωματίου.

- Το CSF και τα αποστειρωμένα δείγματα υγρών πρέπει να λαμβάνονται από ειδικευμένο γιατρό.

- Μπορεί επίσης να είναι μια καθαρή καλλιέργεια ενός ύποπτου στελέχους συνδεδεμένου με τα προαναφερθέντα παθογόνα.

Εκτέλεση της τεχνικής με απευθείας δείγματα

- Τα δείγματα πρέπει να φυγοκεντρηθούν, κατόπιν το υπερκείμενο απορρίπτεται και λαμβάνεται το ίζημα.

- Μια σταγόνα φυγοκεντρισμένου υλικού (ίζημα) και μια σταγόνα κινεζικής μελάνης ή nigrosine τοποθετούνται σε μια καθαρή ολίσθηση..

- Θα πρέπει να αναμιγνύεται καλά και να καλύπτεται με ένα κάλυμμα ολίσθησης, επιτρέποντας τη σταγόνα να απλώνεται σαν μια λεπτή μεμβράνη χωρίς να υπερβαίνει τις άκρες.

- Στη συνέχεια το παρασκεύασμα τοποθετείται στο μικροσκόπιο.

- Εάν το παρασκεύασμα είναι πολύ σκούρο, μπορεί να αραιωθεί με νερό.

Εκτέλεση της τεχνικής με στελέχη από τον πολιτισμό

- Ένα πολύ μικρό μέρος μιας νέας σοδειάς λαμβάνεται με μια βελόνα σποράς και διαλύεται σε μια σταγόνα κινεζικής μελάνης που προηγουμένως τοποθετήθηκε σε ένα καθαρό πλακίδιο.

- Μια καλύπτρα τοποθετείται στην κορυφή.

- Παρατηρείται στο μικροσκόπιο στα 10Χ και στη συνέχεια στα 40Χ.

Μπορείτε επίσης να διαλύσετε ένα μέρος της αποικίας σε απεσταγμένο νερό, και από εκεί πάρετε μια σταγόνα και ανακατέψτε με το μελάνι. Με αυτόν τον τρόπο το παρασκεύασμα δεν θα είναι τόσο παχύ, καθιστώντας δυνατή την παρατήρηση των δομών μεμονωμένα. Εάν υπάρχουν οικισμοί, δεν θα παρατηρηθούν καλά.

Μια άλλη μεθοδολογία είναι η ακόλουθη:

- Τοποθετήστε μια σταγόνα της καλλιέργειας σε εναιώρηση στο ένα άκρο της ολίσθησης.

- Τοποθετήστε μια σταγόνα nigrosine στο ίδιο άκρο και αναμίξτε.

- Με τη βοήθεια μιας άλλης διαφάνειας, επεκτείνετε το δείγμα σαν να κάνατε ένα αιματολογικό επίχρισμα.

- Αφήστε το να στεγνώσει και προσέξτε κάτω από το μικροσκόπιο.

Παρατήρηση σε μικροσκόπιο

Πρώτα πρέπει να εστιάσετε με στόχο 10X για να έχετε μια ευρεία προβολή του πεδίου. Στη συνέχεια θα πρέπει να αναζητήσετε αν υπάρχουν σαφείς χώροι. εάν υπάρχουν, εστιάστε με 40Χ για να δείτε τις λεπτομέρειες.

Πλεονεκτήματα

- Είναι εύκολο να εκτελεστεί.

- Είναι μια οικονομική τεχνική.

- Αυτή η μέθοδος δεν απαιτεί την τοποθέτηση του επιχρίσματος σε θερμότητα ή σε χημικές ουσίες. Επομένως, παρατηρούνται μικροοργανισμοί χωρίς στρεβλώσεις.

- Το φρέσκο ​​παρασκεύασμα δεν χρειάζεται να στεγνώσει, επομένως μπορεί να παρατηρηθεί αμέσως, δημιουργώντας γρήγορα αποτελέσματα.

Μειονέκτημα

Μόλις συναρμολογηθούν, τα νωπά παρασκευάσματα πρέπει να παρατηρηθούν αμέσως. Εάν τους επιτραπεί να στεγνώσουν, δεν είναι πλέον δυνατόν να τις παρατηρήσετε και ένα νέο.

Κηλίδωση ιστού με ινδική μελάνη

Μια άλλη λειτουργία που μπορεί να εκπληρώσει η κινεζική μελάνη είναι στα εργαστήρια παθολογίας. Αυτό εφαρμόζεται στα δείγματα ιστών που έχουν αφαιρεθεί χειρουργικά για να επισημανθούν τα περιθώρια της εκτομής του όγκου.

Ο σημασμένος ιστός ψεκάζεται με οξικό οξύ. Αυτό δρα ως ιγμορίτης και εμποδίζει την εκροή του μελανιού όταν ο ιστός υποβάλλεται σε επεξεργασία ρουτίνας για την παρασκευή βιοψίας.

Η διαδικασία συνίσταται στην κολύμβηση του ιστού σε αλκοόλη και ξυλόλιο, και στη συνέχεια απορρόφηση σε παραφινικό κερί. Αυτή η σήμανση καθοδηγεί τον παθολόγο όταν παρατηρεί τον ιστό, υποδεικνύοντας πού είναι το περιθώριο χειρουργικής εκτομής ή άλλο σημείο ενδιαφέροντος.

Αναφορές

1. "Nigrosina". Wikipedia, Η ελεύθερη εγκυκλοπαίδεια. 11 Ιουλίου 2017, 22:46 UTC. 6 Ιαν. 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Κινεζική μελάνη". Wikipedia, Η ελεύθερη εγκυκλοπαίδεια. Οκτ 1 2018, 03:08 UTC. 6 Ιαν. 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macias J και συνεργάτες. (2006). Προσωπικό Εργασίας της Αυτόνομης Κοινότητας της Extremadura. Ειδική ατζέντα τόμος IV. Συντάκτης MAD. Σεβίλλη-Ισπανία, σελ. 211-212.
4. Silva Μ, Garcia M, Corrales J, Ponce Ε (2006) ειδικός .Técnico εργαστήριο, η Υπηρεσία της Γαλικίας Υγείας (SERGAS). Ειδικός τόμος του αντικειμένου 2. Εκδότης MAD. Σεβίλλη-Ισπανία, σελ. 79-80.
5. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. 2009. Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Αργεντινή Πανamericana S.A Σύνταξη