Stain από το ίδρυμα, τεχνική και χρήσεις της May Grünwald-Giemsa

Το Μπορεί να λεκιάσει ο Grünwald-Giemsa o Το Pappenheim είναι μια τεχνική διαφορικού χρωματισμού που αναμιγνύει τα αντιδραστήρια Giemsa και May Grünwald. Χρησιμοποιείται για τη διαφοροποίηση των φυσιολογικών και μη φυσιολογικών κυττάρων του αίματος σε επιχρίσματα περιφερικού αίματος και μυελού των οστών, καθώς και για τη χρώση ιστολογικών τμημάτων και κυτταρολογικών δειγμάτων.

Και τα δύο αντιδραστήρια - Gemsa και May Grünwald - προέρχονται από χρωματισμό τύπου Romanowsky, μια τεχνική που βασίζεται στον συνδυασμό οξικών και βασικών βαφών.

Ο Giemsa βελτίωσε την τεχνική σταθεροποιώντας το μείγμα εωσίνης, μπλε του μεθυλενίου και των παραγώγων του, με γλυκερόλη. Αντίθετα, η May Grünwald χρησιμοποιεί ηωσίνη και μπλε του μεθυλενίου, χρησιμοποιώντας μεθανόλη ως διαλύτη. Αυτός ο στρατηγικός συνδυασμός έχει δώσει εξαιρετικά αποτελέσματα.

Ενώ από την άποψη της παρατήρησης μορφολογία κυττάρων δρα παρομοίως με Giemsa και Wright, αυτή η τεχνική βελτιώνει τις παραπάνω συντονισμού χρωματισμού παράσιτα που προκαλούν την ελονοσία, Chagas, η λεϊσμανίαση και τριχομονάδες.

Επιπλέον, έχει αποδειχθεί πολύ χρήσιμη για την κυτταρολογική μελέτη του σπερματικού τεχνικής ρευστού. Έχει δεν τονίζεται μόνο με δείχνει τα μορφολογικά χαρακτηριστικά του σπέρματος, αλλά επίσης διαφοροποιεί πολύ αποτελεσματικά τα λευκοκύτταρα, επιθηλιακά κύτταρα και τη σπερματογένεση.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
  • 1.1 Ποικιλία βαφών
• 2 Τεχνική
  • 2.1 Υλικά
  • 2.2 Συμπυκνωμένο διάλυμα βαφής May Grünwald
  • 2.3 Συμπυκνωμένη χρωστική Giemsa
  • 2.4 Παρασκευή του ρυθμιστικού διαλύματος σε ρΗ 7.2
  • 2.5 Διαδικασία κηλίδωσης αίματος ή κηλίδωσης μυελού των οστών
  • 2.6 Εκτεταμένη τεχνική χρωματισμού του υγρού σπέρματος
  • 2.7 Σημαντικές προδιαγραφές
• 3 Χρήσεις
  • 3.1 Κυτταρολογική κολπική
  • 3.2 δείγμα σπέρματος
• 4 Αναφορές

Ίδρυμα

Η τεχνική είναι η βάση της Romanowsky λεκέδες, όπου βαφές οξύ έχουν επιλεκτική συγγένεια για τις κυτταρικές βασικών συστατικών και όξινων συστατικών προσελκύσει βασικές βαφές.

Εξηγεί με άλλο τρόπο, τόσο οι κυτταρικές δομές όσο και οι χρωστικές έχουν θετικά ή αρνητικά ηλεκτρικά φορτία. αποτρέπονται οι ισόποσες χρεώσεις και προσελκύονται διαφορετικές χρεώσεις.

Για παράδειγμα, βασικές χρωστικές όπως ο μπλε του μεθυλενίου είναι θετικά φορτισμένες και έλκονται από αρνητικά φορτισμένες δομές. Αυτός είναι ο λόγος για τον οποίο αυτή η βαφή κηλιδώνει πυρήνες που είναι πλούσιοι σε DNA και RNA που έχουν αρνητικά φορτισμένες φωσφορικές ομάδες.

Οι κόκκοι των τεμαχισμένων βασεόφιλων και των κυτταροπλάμων των μονοπύρηνων λευκών αιμοσφαιρίων που περιέχουν RNA χρωματίζονται επίσης.

Παρομοίως, η βαφή οξέος φέρει ένα αρνητικό φορτίο, και γι 'αυτό συνδέει θετικά φορτισμένες δομές όπως τα ερυθροκύτταρα και οι κόκκοι των τεμαχισμένων ηωσινοφίλων. Όσο για τους κόκκους των τεμαχιδίων ουδετερόφιλων, αυτά επιδιορθώνουν και τις δύο χρωστικές ουσίες.

Ποικιλία χρωστικών ουσιών

Στην τεχνική αυτή συνυπάρχει συνδυασμός αντιδράσεων μεταξύ ορθοχρωματικών βαφών και μεταχρωμικών. Τα ορθοχρωματικά (εωσίνη και κυανό του μεθυλενίου) συνδέονται με τη κυτταρική δομή με την οποία σχετίζονται και παρέχουν ένα σταθερό χρώμα που δεν ποικίλει.

Αντ 'αυτού, μεταχρωματική (παράγωγα του κυανούν του μεθυλενίου και γαλάζια Α γαλάζια Β), ποικίλλουν αρχικό τους χρώμα άπαξ και συνδεθεί με τη συγκεκριμένη δομή και μπορεί ακόμη και να έχουν ποικιλία αποχρώσεων.

Τέλος, η δίοδος φέρει το διάλυμα Μαΐου Grünwald απαιτεί την παρουσία νερού, για αυτό το χωρίς χρωστική διεισδύσει δομές αλλά δεν είναι σταθερό. Για να συμβεί αυτό η χρωστική ουσία θα πρέπει να καταστεί πολικού ή ιονίζουν, και ως εκ τούτου να είναι σε θέση να καθιζάνει και συνδέονται προς τις συγγενείς δομές.

Τεχνική

Υλικά

- Διαφάνειες για διαφάνειες.

- Γέφυρες χρωματισμού.

- Λύση του May-Grünwald.

- Giemsa λεκές.

- Αποσταγμένο νερό.

Συμπυκνωμένο διάλυμα βαφής May Grünwald

Πρέπει να ζυγίσουμε 0,25 g μπλε εωσίνης-μεθυλενίου (χρωστική σύμφωνα με την May Grünwald) και να διαλύσουμε σε 100 ml μεθανόλης. Το μείγμα στη συνέχεια αναμιγνύεται για 1 ώρα και αφήνεται για να ηρεμήσει για 24 ώρες. Τελειώνοντας την ώρα, φιλτράρει.

Για να εφαρμόσετε την τεχνική για να είναι αραιωμένο χρωστική Μαΐου Grünwald εξής: για 200 ml αραιωμένου χρωστικής μετρώνται 30 ml του πυκνού διαλύματος, προστίθενται 20 ml ρυθμιστικού διαλύματος και 150 ml απεσταγμένου ύδατος ρυθμίζεται σε pH7.2-7.3 . Στη συνέχεια αναμιγνύεται και φιλτράρεται.

Συμπυκνωμένη χρωστική Giemsa

Θα πρέπει να ζυγίζονται 0,5 g γαλάζια εοσίνης μεθυλενίου (χρωστική ουσία Giemsa), διαλύθηκε σε 50 ml μεθανόλης και τοποθέτηση του μίγματος 50 ml γλυκερίνη.

Για να εκτελέσετε την τεχνική, αραιώστε 1:10 με ρυθμιστικό διάλυμα και αφήστε το να παραμείνει για 10 λεπτά. Μπορεί να φιλτραριστεί εάν είναι απαραίτητο.

Παρασκευή του ρυθμιστικού διαλύματος σε ρΗ 7.2

Πρέπει να ζυγίζονται:

- 40 mg διαφωσφορικού καλίου (KH2PO4).

- 151 mg 12-ένυδρο όξινο φωσφορικό νάτριο (Na2HPO4).

Και οι δύο ενώσεις διαλύονται σε 100 ml νερού.

Διαδικασία κηλίδας αίματος ή κηλίδωσης μυελού των οστών

Υπάρχουν δύο τρόποι: ένα κλασικό και ένα γρήγορο.

Κλασική λειτουργία

1. Καλύψτε τα επιχρίσματα για 2 ή 3 λεπτά με αραιωμένη λύση May-Grünwald.
2. Πλύνετε με ρυθμισμένο απεσταγμένο νερό για να εξαλείψετε το προηγούμενο διάλυμα.
3. Καλύψτε με το ίδιο ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης και αφήστε το για 1 λεπτό. Η ιδέα είναι ότι η προηγούμενη βαφή είναι στερεωμένη στις δομές και ότι, ταυτόχρονα, τα κύτταρα είναι ενυδατωμένα.
4. Προσθέστε 12 σταγόνες αραιωμένου βάμματος Giemsa στο ρυθμισμένο νερό και φυσήξτε για να το αναμίξετε και να ομογενοποιήσετε. Αφήστε να σταματήσετε για 15 ή 20 λεπτά.
5. Πλύνετε τα επιχρίσματα με ρυθμισμένο αποσταγμένο νερό και τοποθετήστε το σε στεγνό αέρα.
6. Εστίαση και παρατηρήστε σε ένα οπτικό μικροσκόπιο τα κύτταρα του αίματος που χρωματίζονται χρησιμοποιώντας τον αντικειμενικό φακό 40X. Εάν είναι απαραίτητο, μπορεί να χρησιμοποιηθεί το 100Χ.

Γρήγορη λειτουργία

1. Καλύψτε το επίχρισμα με βαφή May Grünwald αραιωμένο για 1 λεπτό.
2. Πλύνετε με ρυθμισμένο απεσταγμένο νερό.
3. Καλύψτε με ρυθμισμένο νερό και αφήστε το να παραμείνει για 1 λεπτό.
4. Τοποθετήστε την αραιωμένη χρωστική Giemsa και αφήστε την για 5 λεπτά.
5. Πλύνετε με ρυθμισμένο αποσταγμένο νερό και αφήστε τον να στεγνώσει στον αέρα.

Οι τεχνικές που περιγράφονται εδώ είναι ένας καθοδηγητικός οδηγός, αλλά πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι οι διαδικασίες και οι χρόνοι χρωματισμού ποικίλλουν ανάλογα με το εμπορικό σπίτι που προμηθεύει τα αντιδραστήρια. Συνιστάται να ακολουθείτε τα μέτρα που υποδεικνύονται αυστηρά από κάθε εμπορικό κατάστημα.

Σπέρμα υγρό επεκτείνεται τεχνική χρωματισμού

1 - Καλύψτε την επάλειψη με ένα λεπτό στρώμα διαλύματος May Grünwald για 4 λεπτά.

2- Αφαιρέστε τη βαφή και πλύνετε με αποσταγμένο νερό.

3. Τοποθετήστε ένα στρώμα αραιωμένου Giemsa (1:10) σε απεσταγμένο νερό για 15 λεπτά.

4- Αφαιρέστε τη βαφή και πλύνετε με αποσταγμένο νερό.

5- Αφήστε να στεγνώσει και παρατηρήστε κάτω από το μικροσκόπιο.

Σημαντικές προδιαγραφές

Η τεχνική απαιτεί αντιδραστήρια και διαλύματα έκπλυσης έχει ρΗ ρυθμίστηκε στο 7.2 -7.3, έτσι ώστε οι συγγένειες βαφής των δομών των κυττάρων δεν νοθεύονται και δεν διαφέρει το τελικό χρώμα αναμενόμενο.

Χρησιμοποιεί

Αυτή η τεχνική χρησιμοποιείται από τα κλινικά εργαστήρια για τη χρώση επιχρισμάτων του περιφερικού αίματος και του μυελού των οστών, των τμημάτων των ιστών και των κυτταρολογιών.

Στο αιματολογικό πεδίο, αυτή η τεχνική είναι ζωτικής σημασίας στη μελέτη των ανωμαλιών των κυττάρων όσον αφορά το σχήμα, το μέγεθος και τον αριθμό. Είναι ένα πολύτιμο εργαλείο για τη διάγνωση ορισμένων ασθενειών, όπως η λευχαιμία και η αναιμία.

Επιπλέον, παρουσιάζει εξαιρετική χρησιμότητα κατά την αναζήτηση παρασίτων στα αιματολογικά πεδία (Plasmodium sp και Trypanosoma cruzi) ή ιστολογική (Leishmanias sp).

Κολπική κολπική

Όσο για την κολπική κυτταρολογία, αυτή η τεχνική είναι ιδιαίτερα επωφελής για την παρατήρηση του Trichomonas vaginalis. Αυτό είναι ένα σημαντικό εύρημα, καθώς η παρουσία του προσομοιώνει εικόνες καρκινώματος επί τόπου που στη συνέχεια εξαφανίζονται όταν εξαλείφεται το παράσιτο.

Δείγμα σπέρματος

Αποτελεί ιδανικό εργαλείο για τη μελέτη δειγμάτων σπέρματος, καθώς παρέχει πολύτιμες πληροφορίες για την ποιότητα του σπέρματος.

Τα δεδομένα που παρέχονται είναι κυρίως αριθμό και τη μορφολογία, καθώς και η ταυτόχρονη κύτταρα που μπορεί να υπάρχουν και ότι είναι ζωτικής σημασίας, όπως γεννητικά κύτταρα, λευκοκύτταρα και τα επιθηλιακά κύτταρα.

Με αυτή την ανάλυση είναι δυνατόν να περιγραφούν οι ανωμαλίες που παρατηρούνται στο σπέρμα στο κεφάλι, στον αυχένα, στο μεσαίο κομμάτι και στο κύριο κομμάτι.

Επιπλέον, μπορούν επίσης να βοηθήσουν εκπομπή περιπτώσεις haemospermia (παρουσία των ερυθρών αιμοσφαιρίων στο σπέρμα) και leucospermia ή piospermia (αύξηση του αριθμού των λευκοκυττάρων στο σπέρμα).

Αναφορές

1. Costamagna S, Prado M. Επικύρωση της νέας δοκιμής, χρώματα May Grünwald-Giemsa και Gram και μέσα καλλιέργειας για τη διάγνωση Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Διαθέσιμο σε: scielo.
2. Merck KGaA. Μάη Grünwald μπλε μεθυλενίου εωσίνης για μικροσκοπία.
3. "Χρώμα May-Grünwald-Giemsa." Wikipedia, Η ελεύθερη εγκυκλοπαίδεια. 15 Νοε 2018, 14:37 UTC. 8 Ιανουαρίου 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. Χημικά εργαστηριακά γυαλιά Panreac. Αντιδραστήρια για ιστολογικές τεχνικές, αιματολογία και μικροβιολογία. Διατίθεται στη διεύθυνση: glasschemicals.com
5. Retamales Ε, Manzo V. Σύσταση για χρώση των επιχρισμάτων αίματος για ανάγνωση του αριθμού αίματος. Εθνικό και Βιοϊατρικό Εργαστήριο Αναφοράς. Ινστιτούτο Δημόσιας Υγείας της Χιλής.
6. Sarabia L. Σπερματογράφημα σύμφωνα με τα κριτήρια της ΠΟΥ. Πρόγραμμα Ανατομίας και Βιολογίας της ανάπτυξης. Ιατρική Σχολή Πανεπιστήμιο της Χιλής Διατίθεται στη διεύθυνση: pp.centramerica.com