Kinyoun βάψιμο θεμέλια και τεχνικές

Το Kinyoun χρώση Είναι μια τεχνική χρωματισμού που χρησιμοποιείται για τη βαφή όξινων βακτηρίων και οξέων παρασίτων. Γεννήθηκε από την τροποποίηση του χρωματισμού του Ziehl-Neelsen. Και οι δύο τεχνικές ερμηνεύονται με τον ίδιο τρόπο αλλά διαφέρουν σε δύο στοιχεία: στην παρασκευή του κύριου αντιδραστηρίου και στο ότι η τεχνική Kinyoun δεν χρησιμοποιεί θερμότητα.

Για το λόγο αυτό είναι επίσης γνωστό ως κρύο-τροποποιημένο Ziehl-Neelsen ή Kinyoun κρύο χρώση. Ενδείκνυται για τον χρωματισμό του Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, άτυπα μυκοβακτηρίδια, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris και Cyclosporas cayetanensis.

Αξίζει να αναφερθεί ότι ο Νocardias λεκιάζει με αυτή την τεχνική, καθώς είναι εν μέρει ανθεκτικό στο οξύ αλκοόλ, γι 'αυτό το είδος υπάρχει μια τροποποίηση της μεθοδολογίας.

Με τη σειρά του, η τεχνική του Kinyoun συνδυάστηκε με την τεχνική τριχρωμίας που τροποποιήθηκε από τον Didier για την ανίχνευση κοκκιδίων (Cryptosporidium parvum ε Isospora belli) και σπόρια μικροσποριδίων (Enterocytozoon bieneusi και Encephalitozoon intestinalis).

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
• 2 Τεχνική
  • 2.1 Υλικά
  • 2.2 Προετοιμασία της φινικισμένης φουκσινης του Kinyoun
  • 2.3 Παρασκευή αλκοολικού οξέος
  • 2.4 Παρασκευή χρώματος αντίθεσης με κυανό μεθυλενίου
  • 2.5 Τεχνική βαφής Kinyoun
  • 2.6 Ειδική τεχνική Kinyoun για τον Nocardias
  • 2.7 Συνδυασμένη τεχνική φαινολικής και τριχρωματικής φουξίνης που τροποποιήθηκε από τον Didier
  • 2.8 Έλεγχος ποιότητας
• 3 τεχνική Kinyoun σε σύγκριση με την τεχνική Ziehl -Neelsen
• 4 Αναφορά

Ίδρυμα

Το πρωτεύον αντιδραστήριο είναι η χρώση carbolfuchsin ή φουξίνη, η οποία έχει την ιδιότητα δέσμευσης σε υπάρχουσες καρβολικό οξέα μέσα στο κηρώδες λιπιδικό κυτταρικού τοιχώματος πλούσια (μυκολικών οξέων) των Mycobacteria και ορισμένα παράσιτα.

Αυτή η ένωση δεν αντισταθμίζεται από την αποχρωματισμό του οξέος. Ως εκ τούτου, οι μικροοργανισμοί ορίζονται ως αλκοόλη ανθεκτική στο οξύ.

Σε αντίθεση με την τεχνική Ziehl-Neelsen που καθορίζει το χρωστικής μέσω του θερμική, στην τεχνική Kinyoun αυτό το βήμα δεν είναι απαραίτητο, δεδομένου ότι η λύση φουξίνης προετοιμασία για την τεχνική αυτή περιέχει υψηλή συγκέντρωση της φαινόλης.

Η φαινόλη διαλύει το λιπιδικό υλικό του κυτταρικού τοιχώματος, το οποίο επιτρέπει την είσοδο της βαφής carbol fuchsin. Αφού διεισδύσει η βαφή, παραμένει σταθερή παρά το πλύσιμο με αλκοολικό οξύ.

Με αυτόν τον τρόπο, οι ανθεκτικοί σε οξύ μικροοργανισμοί παίρνουν το χαρακτηριστικό κόκκινο χρώμα, ενώ ό, τι δεν είναι ανθεκτικό στο οξύ αλκοόλ γίνεται αποχρωματισμένο και βαμμένο με μπλε χρώμα..

Τεχνική

Υλικά

- Τροποποιημένη φαινολική φουξίνη.

- Αλκοόλ-οξύ.

- Μπλέ μεθυλενίου.

Προετοιμασία της φινικισμένης φουκυσίνης του Kinyoun

- Βασική φούξιν: 4 γρ.

- Φαινόλη: 8 ml.

- Αλκοόλη (95%): 20 ml.

- Αποσταγμένο νερό: 100 ml.

Η βασική φουξίνη στο αλκοόλ πρέπει να διαλύεται αργά, αναμειγνύοντας συνεχώς. Στη συνέχεια, η κρυσταλλωμένη φαινόλη τήκεται σε υδατόλουτρο στους 56 ° C. Μόλις διαλυθεί, προσθέστε 8 ml στο διάλυμα φουξίνης που παρασκευάστηκε παραπάνω.

Παρασκευή αλκοολικού οξέος

- Συμπυκνωμένο υδροχλωρικό οξύ: 3 ml.

- Αιθανόλη (95%): 97 ml.

Πρέπει να μετράται, να ενώνεται και να αναμιγνύεται.

Παρασκευή χρωστικής ουσίας αντίθεσης με κυανό μεθυλενίου

- Μπλέ μεθυλενίου: 0,3 g.

- Αποσταγμένο νερό: 100 ml.

Ζυγίζεται και διαλύεται.

Τεχνική κηλίδωσης Kinyoun

1- Προετοιμάστε ένα επίχρισμα απευθείας από το δείγμα, το οποίο μπορεί να είναι πτύελα, πνευμονικό υγρό, ιζήματα ούρων, εγκεφαλονωτιαίο υγρό ή κόπρανα, μεταξύ άλλων. ή από ένα εναιώρημα μικροοργανισμών που λαμβάνονται από καθαρές αποικίες που αναπτύσσονται σε μέσα πρωτογενούς καλλιέργειας.

2- Τοποθετήστε το επίχρισμα με θερμότητα.

3. Τοποθετήστε το επίχρισμα στη γέφυρα χρωματισμού και καλύψτε με το αντιδραστήριο φαινολικής φουκίνης Kinyoun που έχει παρασκευαστεί. Αφήστε το να καθίσει για 3 ή 5 λεπτά.

4 - Πλύνετε με αποσταγμένο νερό.

5- Διηθήστε με όξινη αλκοόλη για 3 λεπτά και πλύνετε και πάλι με απεσταγμένο νερό.

6- Επαναφέρετε ξανά με όξινη αλκοόλη για 1 ή 2 λεπτά έως ότου δεν βυθιστεί πλέον βαφή.

7- Ξεπλύνετε με απεσταγμένο νερό και αφήστε να αποστραγγιστεί, τοποθετώντας το ολισθητήρα σε όρθια θέση.

8- Καλύψτε το παρασκεύασμα με κυανό του μεθυλενίου και αφήστε το για 4 λεπτά.

9- Πλύνετε με αποσταγμένο νερό και αφήστε τον αέρα να στεγνώσει.

10- Εξετάζεται σε 40Χ και στη συνέχεια σε 100Χ.

Αν θέλετε βελτιωμένη και επιτάχυνε ανθεκτικά οξύ αλκοόλη χρώση μικροοργανισμών, μία σταγόνα ενός παράγοντα διαβροχής προστίθεται (όπως Tergitol Νο 7) ένα 30 ή 40 ml φουξίνη Kinyoun.

Ορισμένα εργαστήρια αλλάζουν βαφή χρώματος κυανιού του μεθυλενίου για φωτεινό πράσινο ή πικρικό οξύ. το πρώτο δίνει ένα πράσινο χρώμα στο φόντο και το δεύτερο δημιουργεί ένα κίτρινο χρώμα.

Ειδική τεχνική Kinyoun για τον Νοκαρδία

Για να βελτιωθεί η χρώση βακτηρίων Nocardia, χρησιμοποιείται μια τροποποίηση της κηλίδωσης Kinyoun. Η τεχνική έχει ως εξής:

1 - Καλύψτε το επίχρισμα με Kinyoun φιστικοποιημένη φούξιν για 3 λεπτά.

2 - Πλύνετε με αποσταγμένο νερό.

3- Για λίγο λεύκανση με 3% παρασκευασμένη όξινη αλκοόλη μέχρι να παρασυρθεί η χρωστική ουσία.

4 - Πλύνετε και πάλι με απεσταγμένο νερό.

5- Καλύψτε το παρασκεύασμα με μπλε του μεθυλενίου και αφήστε το για 30 δευτερόλεπτα.

6. Πλύνετε με αποσταγμένο νερό και αφήστε τον αέρα να στεγνώσει.

Συνδυασμένη τεχνική φαινολικής και τριχρωμικής φουξίνης που τροποποιήθηκε από τον Didier

Αυτή η τεχνική συνιστάται για την ανάλυση των δειγμάτων κοπράνων σε αναζήτηση κοκκιδίων και σπορίων Microsporidium sp ταυτόχρονα Η διαδικασία που ακολουθείται είναι η εξής:

1 - Καλύψτε το επίχρισμα με Kinyoun φαινολική φουξίνη για 10 λεπτά.

2- Αφαιρέστε τη βαφή και πλύνετε με αποσταγμένο νερό.

3- Διηθήστε για 30 δευτερόλεπτα με αλκοόλ με υδροχλωρικό οξύ.

4 - Πλύνετε και πάλι με απεσταγμένο νερό.

5. Καλύψτε το επίχρισμα με τριχρωματικό διάλυμα για 30 λεπτά στους 37 ° C.

6. Πλύνετε με αποσταγμένο νερό.

Αποχρωματίστε για 10 δευτερόλεπτα με οξικό οξύ αλκοόλης.

8- Πλύνετε το επίχρισμα για 30 δευτερόλεπτα χρησιμοποιώντας αιθανόλη 95%.

Έλεγχος ποιότητας

Ως θετικός έλεγχος, παρασκευάζονται επιχρίσματα με στελέχη του Mycobacterium tuberculosis και χρωματίζεται με τα παρασκευασμένα αντιδραστήρια για να εξακριβωθεί ότι τα βακτήρια παίρνουν το σωστό χρώμα (κόκκινη φούξια).

Οι αρνητικοί έλεγχοι μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν με την παρασκευή επιχρισμάτων με οποιοδήποτε στέλεχος που δεν είναι ανθεκτικό στο οξύ αλκοόλ, επαληθεύοντας έτσι ότι ολόκληρο το δείγμα παίρνει το χρώμα της αντίθεσης.

Kinyoun τεχνική σε σύγκριση με την τεχνική Ziehl -Neelsen

τεχνική Kinyoun είναι απλούστερη, δεδομένου ότι εξαλείφει το βήμα της θέρμανσης, αλλά το κύριο πλεονέκτημα του είναι ότι αποφεύγει την εκπομπή ατμών, ιδιαίτερα τοξικά και προκαλούν μακροπρόθεσμες καρκίνου. Επομένως, η χρώση με το Kinyoun είναι ασφαλέστερη για τη χρώση του προσωπικού.

Είναι σημαντικό να ληφθεί υπόψη ότι είναι απαραίτητο να ληφθεί μέριμνα ώστε τα αντιδραστήρια να μην έρχονται σε άμεση επαφή με το δέρμα, επειδή είναι διαβρωτικά και το λευκαντικό είναι εύφλεκτο.

Όσον αφορά τα μειονεκτήματα, ένα αρνητικό επίχρισμα δεν σημαίνει απαραίτητα ότι ο μικροοργανισμός δεν υπάρχει. Επιπλέον, η παρουσία κηλιδωμένου κυττάρου μπορεί να προκαλέσει ψευδώς θετικά αποτελέσματα, γεγονός που δημιουργεί σύγχυση στη διάγνωση.

Αναφορά

1. Εφαρμοσμένη Κλινική Χημεία (2016). Το κιτ BK Kinyoun είναι διαθέσιμο στη διεύθυνση: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun λεκές και δύο Coccidia στον ιό HIV. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α (2009). Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Αργεντινή Πανamericana S.A Σύνταξη.
4. Koneman Ε, Allen S, Janda W, Schreckenberger Ρ, Winn W. (2004). Μικροβιολογική διάγνωση. (5η έκδοση). Αργεντινή, Εκδοτική Panamericana S.A..
5. Συμμετέχοντες στη Wikipedia. "Χρώμα Kinyoun." Wikipedia, Η ελεύθερη εγκυκλοπαίδεια. Wikipedia, Η ελεύθερη εγκυκλοπαίδεια, 8 Φεβρουαρίου 2018. Web. 5 Ιανουαρίου 2019.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo Ε, Acuña A, Zanetta Ε. Εφαρμογή τεχνικής χρωματισμού για την ταυτόχρονη διάγνωση των Coccidia και Microsporidia. Ινστιτούτο Υγιεινής του Πανεπιστημίου της Δημοκρατίας. Μοντεβιδέο. Ουρουγουάη Διατίθεται στη διεύθυνση: higiene.edu.uy