Τι είναι η απλή χρώση; Κορυφαία χαρακτηριστικά



Το απλή χρώση είναι μια γρήγορη και απλή διαδικασία χρώσης στην οποία χρησιμοποιείται μία μόνο βαφή, γι 'αυτό και ονομάζεται απλή. Χρησιμοποιείται κυρίως για τον προσδιορισμό της μορφολογίας και της οργάνωσης των κυττάρων που υπάρχουν σε ένα δείγμα.

Φυσικά τα κύτταρα δεν έχουν χρώμα, επομένως είναι απαραίτητο να τα κάνουν ορατά με κάποιο τρόπο όταν παρατηρούνται στο μικροσκόπιο.

Είναι σημαντικό να τονιστεί ότι οι βαφές που χρησιμοποιούνται σε απλή χρώση πρέπει να είναι βασικές με θετικό φορτίο (κατιονικό), έτσι ώστε να μπορούν να δεσμευτούν αυθόρμητα στο κυτταρικό τοίχωμα και στο κυτταρόπλασμα.

Αυτές οι κυτταρικές δομές είναι αρνητικά φορτισμένες. Αυτός είναι ο λόγος για τον οποίο η χρωστική, θετικά φορτισμένη, προσελκύεται από τα κύτταρα και δεσμεύεται σε αυτά αυθόρμητα. Έτσι, όλα τα κύτταρα που υπάρχουν σε ένα δείγμα είναι γρήγορα χρωματισμένα.

Βαφές που χρησιμοποιούνται σε απλή χρώση

Υπάρχουν αρκετές βασικές βαφές που μπορούν να χρησιμοποιηθούν στο εργαστήριο μικροβιολογίας. Τα πιο χρησιμοποιημένα είναι:

- Μπλέ μεθυλενίου.

- Κρύσταλλο ιώδες.

- Μαλαχίτης πράσινο.

- Βασική φούξιν.

Όλες αυτές οι βαφές δουλεύουν καλά σε βακτήρια επειδή έχουν θετικά φορτισμένα (κατιονικά) χρωματιστά ιόντα (χρωμοφόρα).

Οι χρόνοι χρώσης για τις περισσότερες από αυτές τις βαφές είναι σχετικά βραχείες. Συνήθως κυμαίνονται από 30 δευτερόλεπτα έως 2 λεπτά, ανάλογα με τη συγγένεια της βαφής.

Είναι σημαντικό να έχουμε κατά νου ότι πριν από τη βαφή ενός δείγματος με απλή χρώση, πρέπει να επεκταθεί και να στερεωθεί στη γυάλινη ολίσθηση (slide). Το εκτεταμένο και σταθερό δείγμα ονομάζεται επίχρισμα.

Τα 6 βήματα για να εκτελέσετε μια απλή χρώση

Βήμα 1

Τοποθετήστε το συρόμενο σε μια βάση ρύθμισης χρώματος και εφαρμόστε την επιθυμητή βαφή. Αφήστε την αντίστοιχη ώρα.

Κανονικά, η απλή χρώση διαρκεί μερικά δευτερόλεπτα ή μερικά λεπτά, ανάλογα με τον χρωματισμό που χρησιμοποιείται.

Παρατήρηση

Σε αυτό το βήμα είναι σημαντικό να μην υπερβεί ο συνιστώμενος χρόνος για τη χρωστική που χρησιμοποιείται, καθώς οι κρύσταλλοι θα μπορούσαν να σχηματιστούν στο φύλλο, παράγοντας τα γνωστά ως "αντικείμενα" που διαστρεβλώνουν τη μορφολογία των κυττάρων.

Βήμα 2

Ξεπλύνετε προσεκτικά το επίχρισμα της ολίσθησης με απεσταγμένο νερό από μπουκάλι ή επίσης με νερό της βρύσης που ρέει αργά, έως ότου η απορροή γίνει διαφανής. Αυτό συνήθως διαρκεί 5 έως 10 δευτερόλεπτα.

Παρατήρηση

Μην εφαρμόζετε το ρεύμα νερού απευθείας πάνω στο επίχρισμα, για να αποτρέψετε τη βλάβη του δείγματος από τη δύναμή του.

Αν δεν έχετε αποσταγμένο νερό, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε νερό της βρύσης χωρίς κανένα πρόβλημα, καθώς δεν επηρεάζει το αποτέλεσμα της χρώσης.

Βήμα 3

Στεγνώστε το πλακίδιο με απορροφητικές χαρτοπετσέτες προς μία κατεύθυνση και χωρίς τρίψιμο. Βεβαιωθείτε ότι το κάτω μέρος της ολίσθησης είναι καθαρό.

Βήμα 4

Παρατηρήστε το λεκιασμένο επίχρισμα στο μικροσκόπιο. Ξεκινήστε με τους πιο απομακρυσμένους στόχους για να εντοπίσετε σωστά την περιοχή που θέλετε να παρατηρήσετε με περισσότερες λεπτομέρειες. Αλλάξτε τον στόχο για να προσεγγίσετε το δείγμα.

Παρατήρηση

Για τη χρήση του φακού με τη μεγαλύτερη μεγέθυνση (κανονικά 100X), θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί λάδι βύθισης, καθώς βοηθά το φως να διεισδύει καλύτερα και η εικόνα να είναι πιο έντονη. Δεν είναι απαραίτητο να χρησιμοποιήσετε κάλυμμα.

Βήμα 5

Τέλος, απορρίψτε όλα τα δείγματα σε κατάλληλο δοχείο που φέρει την κατάλληλη ετικέτα ως "βιολογικός κίνδυνος".

Αναφορές

  1. (2001). Μικροβιολογικές Εφαρμογές: Εργαστηριακό Εγχειρίδιο Γενικής Μικροβιολογίας (8 th ed.). Οι εταιρείες McGraw-Hill.
  2. Harisha, S. (2006). Εισαγωγή στην πρακτική βιοτεχνολογία (1st). Μέσα τείχους προστασίας.
  3. Moyes, R. Β., Reynolds, J., & Breakwell, D. Ρ. (2009). Προκαταρκτική χρώση βακτηρίων: Απλοί λεκέδες. Current Protocols in Microbiology, (SUPPL 15), 1-5.
  4. Pommerville, J. (2013). Τα εργαστηριακά βασικά στοιχεία της Microbiology του Alcamo (10th). Jones & Bartlett Learning.
  5. Prescott, Η. (2002). Εργαστηριακές Ασκήσεις στη Μικροβιολογία (5 th). Οι εταιρείες McGraw-Hill.
  6. Sumbali, G. & Mehrotra, R. (2009). Αρχές Μικροβιολογίας (1st). Εκπαίδευση Tata McGraw-Hill.