Θεμελίωση του τετραθειονικού ζωμού, προετοιμασία και χρήσεις

Το τετρανατικό ζωμό ή ο ζωμός ΤΤ είναι ένα εκλεκτικό υγρό μέσο καλλιέργειας για τον εμπλουτισμό και την ανάκτηση των στελεχών Salmonella. Δημιουργήθηκε από τον Müeller και αργότερα τροποποιήθηκε από τον Kauffmann, γι 'αυτό υπάρχουν εκείνοι που το ονομάζουν ζωμό Müeller-Kauffmann.

Το αρχικό μέσο περιείχε πεπτόνες πρωτεΐνης, ανθρακικό ασβέστιο και θειοθειικό νάτριο. Ο Kauffmann πρόσθεσε χολικά άλατα και δημιούργησε μια άλλη τροφή με φωτεινό πράσινο χρώμα. Αυτές οι ουσίες αναστέλλουν την ανάπτυξη κολοβακτηριδίων, αφήνοντας το ελεύθερο μέσο για την ανάπτυξη παθογόνων βακτηριδίων, στην περίπτωση αυτή Salmonella.

Η τροποποίηση ήταν πολύ επιτυχής επειδή αύξησε σημαντικά την ευαισθησία του μέσου. Ως εκ τούτου, είναι προς το παρόν χρήσιμο για την αναζήτηση σαλμονέλας σε οποιοδήποτε τύπο δείγματος, αλλά ειδικά για στερεά ή υγρά περιττώματα και τρόφιμα..

Η προετοιμασία του αποτελείται από δύο φάσεις. το εμπορικό μέσο είναι μια βάση για την παρασκευή του τετραθειονικού ζωμού και στη συνέχεια για το τετραθειονικό που πρόκειται να σχηματιστεί, προστίθεται ένα ιωδιωμένο διάλυμα ιωδίου για να συμπληρωθεί το μέσο.

Η Αμερικανική Ένωση Δημόσιας Υγείας (ΑΡΗΑ) συνιστά τη χρήση του ζωμού tetrathionate συμπληρωθεί με λαμπρό για τον εμπλουτισμό δείγματα Salmonella για το πράσινο καθώς είναι περισσότερο επιλεκτικές από το tetrationate και σεληνιώδες.

Σε γενικές γραμμές, η tetrationate είναι ιδανικό όταν η παρουσία Salmonella βακτηρίων σε μικρές ποσότητες υπάρχει υποψία ή είναι χτυπημένους από έκθεση σε αναστολείς ή βιομηχανικές διεργασίες που ελαχιστοποιούν τη βιωσιμότητά τους.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
• 2 Προετοιμασία
  • 2.1 - Τετραθειονικό
  • 2,2-Τριαθειονικό ζωμό ποικιλίας με φωτεινό πράσινο
• 3 Χρήση
• 4 Έλεγχος ποιότητας
• 5 Συστάσεις
• 6 Αναφορές

Ίδρυμα

Οι παρούσες πεπτόνες αντιστοιχούν σε προϊόντα πέψεως καζεΐνης και πεπτική πέψη ζωικού ιστού. Αυτά παρέχουν την πηγή άνθρακα, αζώτου και θρεπτικών συστατικών γενικά για την ανάπτυξη βακτηριδίων.

Από την πλευρά του, το θειοθειικό νάτριο αντιδρά με το ιωδιωμένο διάλυμα για να σχηματίσει τετραθειονικό. Αυτό αναστέλλει την ανάπτυξη των κολοβακτηριδίων και ευνοεί την ανάπτυξη των βακτηριδίων που περιέχουν το ένζυμο αναγωγάση τετραθειονικό, συμπεριλαμβανομένου του γένους Salmonella είναι, αλλά και Proteus.

Τα χολικά άλατα δρουν επίσης ως ανασταλτική ουσία των περισσότερων θετικών κατά Gram βακτηριδίων και μερικά Gram-αρνητικά βακτηρίδια (coliforms).

Το ανθρακικό ασβέστιο απορροφά τις τοξικές ουσίες που παράγονται από την αποσύνθεση του τετραθειονικού, το οποίο σχηματίζει θειικό οξύ. Με αυτή την έννοια, το ανθρακικό ασβέστιο εξουδετερώνει την οξύτητα διατηρώντας το ρΗ του σταθερού μέσου.

Στην περίπτωση του φωτεινού πράσινου τρόπου, η ουσία αυτή αυξάνει την εκλεκτική ισχύ του ζωμού τετραθειονικού οξέος αναστέλλοντας άλλους μικροοργανισμούς εκτός από το γένος Salmonella..

Προετοιμασία

-Διηθητικό ζωμό

Ιώδιο διάλυμα ιωδίου

Ζυγίστε:

• 6 gr ιωδίου.
• 5 γρ. Ιωδιούχου καλίου.

Το ιωδιούχο κάλιο διαλύεται σε περίπου 5 ml αποστειρωμένου απεσταγμένου νερού και στη συνέχεια το ιώδιο προστίθεται λίγο λίγο ενώ το μείγμα θερμαίνεται. Αφού διαλυθεί πλήρως, γεμίζεται με αποστειρωμένο απεσταγμένο νερό μέχρις ότου φθάσει σε τελικό όγκο 20 ml.

Μισή βάση για τον τετραθειονικό ζωμό

Ζυγίζονται 46 γραμμάρια του αφυδατωμένου μέσου και αναστέλλεται σε 1 λίτρο αποστειρωμένου απεσταγμένου νερού. Αναμίξτε και θερμαίνετε μέχρι να διαλυθεί πλήρως, μπορεί να βράσει για λίγα λεπτά. Μην αποστειρώνετε σε αυτόκλειστο. Η βάση του μέσου αφήνεται να ψυχθεί στους περίπου 45 ° C και εκείνη τη στιγμή προστίθενται 20 ml του ιωδιωμένου διαλύματος..

Μετά την προσθήκη του διαλύματος το iodurada στο μέσο θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί αμέσως. Εάν δεν θέλετε να χρησιμοποιήσετε ολόκληρο το μείγμα, ακολουθήστε τα παρακάτω βήματα:

10 ml του μέσου βάσης κατανέμονται σε σωλήνες και προστίθενται μόνο 0,2 ml του ιωδιωμένου διαλύματος σε αυτά που πρόκειται να εμβολιαστούν με δείγματα..

Αυτά που δεν πρόκειται να χρησιμοποιηθούν μπορούν ακόμα να αποθηκευτούν σε ψυγείο, ωστόσο, καθώς το μέσο δεν αποστειρώνεται, το ιδανικό είναι να προετοιμαστεί το ακριβές ποσό που χρειάζεται..

Το χρώμα του μέσου πριν από την προσθήκη του ιωδιούχου διαλύματος ιωδίου είναι γαλακτώδες λευκό με λευκό ίζημα και μετά την προσθήκη του είναι καφέ με πυκνό ίζημα. Το παρατηρούμενο ίζημα είναι φυσιολογικό και αντιστοιχεί σε ανθρακικό ασβέστιο που δεν διαλύεται. Το τελικό ρΗ του μέσου είναι 8,4 ± 0,2.

-Παραλλαγή ζωμού τετραθειονικού με ανοιχτό πράσινο χρώμα

Για την παρασκευή του tetrationate με φωτεινά πράσινα όλα τα βήματα που περιγράφονται παραπάνω εκτελούνται, αλλά επιπλέον να προστεθεί στο μίγμα 10 ml του φωτεινό πράσινο διάλυμα που παρασκευάστηκε 0,1%.

Φωτεινό πράσινο

Το διάλυμα αυτό παρασκευάζεται ως εξής:

Ζυγίζονται 0,1 g φωτεινό πράσινο και εναιωρούνται σε 100 ml απεσταγμένου νερού. Θερμάνετε μέχρι βρασμού για να επιτευχθεί η ολική διάλυση του. Αποθηκεύστε σε πορτοκαλί φιάλη.

Χρήση

Για δείγματα κοπράνων (καλλιέργεια κοπράνων) το πρωτόκολλο έχει ως εξής:

Ενοφθαλμίστε 1 g στερεών κοπράνων ή 1 ml υγρού κόπρανα σε σωλήνα με 10 ml έτοιμου προς χρήση τετραθειονικού ζωμού. Ανακινήστε έντονα και επωάστε σε αερόβιοση στους 43 ° C για 6-24 ώρες.

Στη συνέχεια, ένα κλάσμα από 10 έως 20 μλίτρα του ζωμού και υποκαλλιεργήθηκαν σε ένα επιλεκτικό μέσο για Salmonella, όπως SS άγαρ, άγαρ XLD, λαμπρό πράσινο άγαρ, Hektoen εντερικό άγαρ, κλπ.

Παράλληλα, τα εκλεκτικά μέσα για τη σαλμονέλα θα πρέπει να εμβολιάζονται με το άμεσο δείγμα (κόπρανα) χωρίς εμπλουτισμό. Για δείγματα ορθοκολικών επιχρισμάτων, κατεβάστε το υλικό που συλλέγεται στο σωλήνα και συνεχίστε όπως περιγράφεται παραπάνω.

Για δείγματα τροφίμων ζυγίστε 10 g στερεάς τροφής ή 10 ml υγρής τροφής και εμβολιάστε μια φιάλη με 100 ml έτοιμου προς χρήση τετραθειονικού ζωμού. Προχωρήστε με τον ίδιο τρόπο όπως περιγράφηκε παραπάνω, αλλά επωάστε στους 37 ° C.

Όπως μπορεί να φανεί, η σχέση μεταξύ του δείγματος και του ζωμού θα είναι πάντα 1:10.

Έλεγχος ποιότητας

Για να ελεγχθεί το μέσο καλλιέργειας, μπορούν να χρησιμοποιηθούν γνωστά στελέχη ελέγχου. Τα συνηθέστερα χρησιμοποιούμενα στελέχη είναι πιστοποιημένα με ATCC.

Τα στελέχη που πρέπει να χρησιμοποιηθούν είναι Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 και Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Για τα στελέχη Salmonella αναμένεται εξαιρετική ανάπτυξη, ενώ Escherichia coli μπορεί να έχει αδύναμη ή τακτική ανάπτυξη και τα Gram θετικά στελέχη (Enterococcus και Staphylococcus) παρεμποδίζονται εν μέρει ή πλήρως.

Συστάσεις

-Δεδομένου ότι αυτό το μέσο δεν αναστέλλει την ανάπτυξη των Proteus, ορισμένα εργαστήρια τοποθετούνται συνήθως 40 mg / L νοβοβιοκίνη να αποτρέψει την ανάπτυξη αυτού του μικροβιακού στελέχους. Το αντιβιοτικό πρέπει να προστεθεί πριν από το ιωδιούχο διάλυμα ιωδίου.

-Μετά την παρασκευή του μέσου, συμπεριλαμβανομένου του διαλύματος ιωδιούχου ιωδίου, δεν θα πρέπει να υπερβαίνει τις 2 ώρες μετά τον εμβολιασμό.

-Την στιγμή της διανομής του μέσου στους σωλήνες, το μίγμα πρέπει να ομογενοποιηθεί συνεχώς για να επανα-εναιωρήσει το σχηματισθέν ίζημα.

-Σε λιγότερο μολυσμένα δείγματα ο τετραθειονικός ζωμός επωάζεται στους 35-37 ° C, και σε δείγματα με υψηλό βαθμό μόλυνσης, συνιστάται επώαση στους 43 ° C..

Αναφορές

1. Εργαστήριο Conda Pronadisa. 2010. Η βάση τετραθειονικού ζωμού σύμφωνα με την Müeller-Kauffmann. Διατίθεται σε:
2. BD Laboratories 2003. Βάση τετραθειονικού ζωμού. Διατίθεται σε:
3. Εργαστήρια Βρετανίας. 2015. Βάση βάσης τεθειονικού. Διατίθεται σε:
4. Media BBL. 2005. Παρασκευάσματα σωληναρίων για την καλλιέργεια ειδών σαλμονέλας.
5. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. (2009). Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Αργεντινή.
6. Flores-Abuxapqui J, pUC-Franco M, Heredia-Navarrete M, Living-Rosel M, Franco-Monsreal J. Σύγκριση σεληνικό νάτριο μέσα καλλιέργειας και τετραθειονικό νάτριο, επωάζονται τόσο στους 37 ° C και 42 ° C για την απομόνωση του Salmonella spp των σκαμνιών μεταφοράς. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220