Τόπος καλλιέργειας σπόρου σόγιας tripticaseína, προετοιμασία και χρήσεις

Το ζωμό σόγιας tripticaseína Είναι ένα υγρό μέσο καλλιέργειας, πολύ θρεπτικό και μη επιλεκτικό. Λόγω της μεγάλης ευελιξίας του, είναι ένα από τα πιο ευρέως χρησιμοποιούμενα μέσα υγρής καλλιέργειας στο εργαστήριο μικροβιολογίας.

Είναι επίσης γνωστή ως σόγια tripticasa ζωμού ή αφομοιωμένη καζεΐνη-σόγια, της οποίας η συντομογραφία είναι TSB για το ακρωνύμιό της στα αγγλικά Τρύπτης είμαι Ζωμό ή CST για το ακρωνύμιό της στα ισπανικά. Οι χρήσεις του ποικίλλουν λόγω της σύνθεσής του. Αποτελείται από τριπτένη, πεπτόνη σόγιας, χλωριούχο νάτριο, φωσφορικό δικάλιο και γλυκόζη.

Είναι ικανό να αναπαράγει κλινικά σημαντικά παθογόνα βακτήρια, συμπεριλαμβανομένων εκείνων που είναι διατροφικά απαιτητικά και αναερόβια βακτηρίδια. Ορισμένοι ευκαιριακοί μύκητες και μολυσματικοί παράγοντες μπορούν επίσης να αναπτυχθούν σε αυτό το περιβάλλον.

Λόγω της υψηλής διατροφικής αξίας του έχει υψηλή ευαισθησία για την ανίχνευση μικροβιακής μόλυνσης, γι 'αυτό το λόγο επιλέχθηκε από την Υπηρεσία Επιθεώρησης ζώων και των φυτών USDA Υγείας για τη διενέργεια μικροβιολογικών ελέγχων των εμβολίων.

Ομοίως, η σόγια τριπτικού τύπου πληροί τις απαιτήσεις των διαφόρων φαρμακοποιών (Ευρωπαϊκό Κοινοβούλιο, Ιαπωνικό JP και North American USP) για τη μικροβιολογική μελέτη προϊόντων σε βιομηχανικό επίπεδο, όπως τα καλλυντικά και τα τρόφιμα.

Από την άλλη πλευρά, αξίζει να σημειωθεί ότι παρά τη μεγάλη χρησιμότητα του, αυτό το μέσο είναι σχετικά φθηνό, επομένως είναι προσιτό για τα περισσότερα εργαστήρια μικροβιολογίας. Είναι επίσης πολύ εύκολο να προετοιμαστείτε.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
• 2 Προετοιμασία
  • 2.1 Σόγια trypticamine
  • 2.2 - Μεταβλητές του τρυπατικού οξέος σε ζωμό σόγιας
• 3 Χρήση
• 4 Τοποθέτηση
• 5 Έλεγχος ποιότητας
• 6 Περιορισμοί
• 7 Αναφορές

Ίδρυμα

Η τριπετίνη, η πεπτόνη και η γλυκόζη της παρέχουν τις βασικές θρεπτικές ιδιότητες για να την μετατρέψουν σε ιδανικό μέσο για μια γρήγορη ανάπτυξη μικροβίων.

Περίπου 6 έως 8 ώρες επώασης μπορεί να παρατηρηθεί ήδη ανάπτυξη στους περισσότερους μικροοργανισμούς. Ωστόσο, υπάρχουν βραδέως αναπτυσσόμενα στελέχη που μπορούν να διαρκέσουν για μέρες να αναπτυχθούν.

Το χλωριούχο νάτριο και το φωσφορικό κάλιο δρουν ως οσμωτική ισορροπία και ρυθμιστής ρΗ, αντίστοιχα. Η παρουσία αύξησης αποδεικνύεται από την εμφάνιση θολότητας στο μέσο. εάν δεν υπάρχει ανάπτυξη, το μέσο παραμένει ημιδιαφανές.

Λόγω του ελαφρού χρώματος του, είναι δυνατόν να παρατηρηθεί η παραγωγή χρωστικών ουσιών, όπως αυτή που παρουσιάζεται στην εικόνα που βρίσκεται στην αρχή του αντικειμένου, η οποία αντιστοιχεί στη χρωστική ουσία που παράγεται από Pseudomonas aeruginosa. 

Προετοιμασία

-Τρυπτικό ζωμό σόγιας

Για την παρασκευή του ζωμού σόγιας τριπτάσης, ζυγίστε 30 γραμμάρια του αφυδατωμένου εμπορικού μέσου σε ψηφιακή κλίμακα. Στη συνέχεια διαλύεται σε ένα λίτρο απεσταγμένου νερού που περιέχεται σε φιάλη.

Το μείγμα αφήνεται να παραμείνει για 5 λεπτά και έπειτα φέρεται σε μια πηγή θερμότητας για να βοηθήσει στην διάλυση του μέσου. Θα πρέπει να ανακινείται συχνά ενώ βράζει για 1 λεπτό.

Αφού διαλυθεί, κατανέμεται σε σωληνάρια κατάλληλου μεγέθους ανάλογα με τις ανάγκες. Μπορούν να χρησιμοποιηθούν σωλήνες με βύσμα από βαμβάκι ή καπάκια βακελίτη. Ακολούθως, οι σωλήνες αποστειρώνονται με το μέσο στο αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά.

Το ρΗ του μέσου θα πρέπει να είναι 7,3 ± 0,2

Θα πρέπει να σημειωθεί ότι το χρώμα του αφυδατωμένου μέσου καλλιέργειας είναι ελαφρύ μπεζ και να αποθηκεύεται μεταξύ 10 έως 35 ° C, ξηρό. Ενώ ο προπαρασκευασμένος ζωμός είναι ανοιχτόχρωμος και πρέπει να φυλάσσεται σε ψυγείο (2 έως 8 ° C).

-Παραλλαγές τριποτικού οξέος σε ζωμό σόγιας

Ο τροποποιημένος με τρυπτικαμίνη ζωμός σόγιας μπορεί να παρασκευαστεί με την προσθήκη χολικών αλάτων και νεοβιοκίνης προκειμένου να γίνει επιλεκτικός για την απομόνωση Ε. Coli. Μια άλλη εναλλακτική λύση για τον ίδιο σκοπό είναι η παρασκευή ζωμού σόγιας τριπτάσης συμπληρωμένου με βανκομυκίνη, κεφίξιμη και τελουρίτη (2,5 μg / ml).

Από την άλλη πλευρά, μπορεί να προστεθεί περισσότερη γλυκόζη (0,25%) σε ζωμό σόγιας τρυπτικασίνης, όταν ο στόχος είναι η διέγερση του σχηματισμού βιοφίλμ.

Χρήση

Είναι αρκετά θρεπτικό για να επιτρέψει την ανάπτυξη απαιτητικών ή ενοχλητικών βακτηρίων όπως Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp και Brucella sp, δεν χρειάζεται να συμπληρώνεται με αίμα ή ορό.

Ομοίως, κάποιοι μύκητες μπορούν να αναπτυχθούν σε αυτό το ζωμό, όπως Συγκρότημα Candida albicans, Aspergillus sp ε Histoplasma capsulatum.

Επιπλέον, αυτό το μέσο υπό αναερόβιες συνθήκες είναι ιδανικές για την ανάκτηση βακτήρια που ανήκουν στο γένος Clostridium, καθώς και αναερόβιων βακτηριδίων σπορίων δεν παρουσίασε κλινικά σημαντικές.

Εάν προστεθεί χλωριούχο νάτριο 6,5%, μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανάπτυξη Enterococcus και άλλων Streptococcus Group D.

Στο ερευνητικό επίπεδο, ήταν πολύ χρήσιμο σε διάφορα πρωτόκολλα, ειδικά στη μελέτη των βακτηρίων που σχηματίζουν βιοφίλμ ή βιοφίλμ. Χρησιμοποιείται επίσης για την παρασκευή του βακτηριακού εναιωρήματος στο 0,5% του Mac Farland που απαιτείται για την εκτέλεση του αντιβιογράμματος με τη μέθοδο των Kirby και Bauer.

Στην περίπτωση αυτή, λαμβάνονται 3 έως 5 αποικίες παρόμοιας εμφάνισης και γαλακτωματοποιούνται σε 4-5 ml ζωμού σόγιας τρυπτικασίνης. Στη συνέχεια επωάζεται για 2 έως 6 ώρες στους 35-37 ° C και στη συνέχεια ρυθμίζεται στην επιθυμητή συγκέντρωση χρησιμοποιώντας στείρο αλατόνερο. Οι ζωμοί σόγιας Trypticase δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται για 18 έως 24 ώρες επώασης.

Σπαρμένο

Το δείγμα μπορεί να σπαρεί απευθείας ή υποκαλλιεργημένες καθαρές αποικίες που λαμβάνονται από εκλεκτικά μέσα. Το ενοφθάλμισμα πρέπει να είναι μικρό ώστε να μην θολώνει το μέσο πριν από την επώαση.

Κανονικά επωάζεται στους 37 ° C σε αερόβιοση για 24 ώρες, αλλά αυτές οι συνθήκες μπορεί να ποικίλουν ανάλογα με τον μικροοργανισμό που αναζητείται. Μπορεί επίσης να επωαστεί σε αναερόβιες συνθήκες στους 37 ° C για αρκετές ημέρες εάν είναι απαραίτητο. Για παράδειγμα, σε απαιτητικούς ή βραδέως αναπτυσσόμενους μικροοργανισμούς μπορεί να επωαστεί μέχρι 7 ημέρες.

Στη μικροβιολογική ανάλυση των φαρμακευτικών ουσιών - όπως τα εμβόλια - τα πρωτόκολλα είναι αυστηρότερα. Σε αυτές τις περιπτώσεις, ο ζωμός χωρίς ανάπτυξη δεν απορρίπτεται έως ότου φθάσει σε 14 ημέρες συνεχούς επώασης.

Έλεγχος ποιότητας

Για κάθε παρασκευασμένη παρτίδα, 1 ή 2 σωλήνες πρέπει να επωάζονται χωρίς ενοφθαλμισμό για να αποδειχθεί η στειρότητα. Πρέπει να παραμείνει αμετάβλητη.

Μπορείτε επίσης να φυτέψετε γνωστά στελέχη για να αξιολογήσετε τη συμπεριφορά τους. Μεταξύ των στελεχών που μπορούν να χρησιμοποιηθούν είναι:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 ή 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Σε όλες τις περιπτώσεις η ανάπτυξη πρέπει να είναι ικανοποιητική υπό τις συνθήκες της ατμόσφαιρας και της θερμοκρασίας που είναι κατάλληλες για κάθε μικροοργανισμό.

Περιορισμοί

-Η ζύμωση της γλυκόζης προκαλεί τη μείωση του ρΗ του μέσου με την παραγωγή οξέων. Αυτό μπορεί να είναι δυσμενές για την επιβίωση ορισμένων μικροοργανισμών ευαίσθητων στην οξύτητα.

-Δεν συνιστάται για τη συντήρηση των στελεχών, καθώς και την οξύτητα, τα βακτήρια μετά από μερικές ημέρες καταστρέφουν τα θρεπτικά συστατικά με αποτέλεσμα την συσσώρευση τοξικών ουσιών που κάνουν το αφιλόξενο.

-Πρέπει να λαμβάνεται μέριμνα για τη φροντίδα όλων των πρωτοκόλλων στειρότητας, καθώς οι ζωμοί είναι εύκολα μολυσμένοι.

-Μετά την παρασκευάζεται ζωμό σόγιας δεν θα πρέπει να προσπαθήσουμε τρυπτόνη ζωμό για να μεταφέρει ένα άλλο αποστειρωμένο σωλήνα, επειδή αυτός ο τύπος ελιγμών είναι πολύ ευάλωτα στην μόλυνση υποφέρουν.

Αναφορές

1. Cona Ε. Συνθήκες για μια καλή μελέτη ευαισθησίας με δοκιμή διάχυσης άγαρ. Rev. chil. infectol 2002; 19 (2): 77-81. Διατίθεται στο: scielo.org
2. Βρετανικό Εργαστήριο Θρετίνη ζωμό σόγιας. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com
3. Εργαστήριο MCD. Θρεπτικό ζωμό σόγιας. Διατίθεται στη διεύθυνση: electronic-systems.com
4. Neogen εργαστήριο. Τρίπτυχο ζωμό σόγιας. Διατίθεται στη διεύθυνση: foodsafety.neogen.com
5. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. (2009). Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Αργεντινή.
6. Rojas T, Vasquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Αξιολόγηση της τεχνικής της μαγνητικής ανοσοπαραγωγής για την ανάκτηση Escherichia coli O157: H7 σε κρέμες γάλακτος. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Διατίθεται στο: scielo.org.ve
7. Gil Μ, Κ Merchan, Quevedo G, Sanchez Α, nicita G, Rojas G, Sanchez J, σχηματισμός Μ τελική τιμή βιομεμβρανών σε απομονωμένες Staphylococcus aureus σύμφωνα με την αντιμικροβιακή ευαισθησία και την κλινική προέλευση. Vitae 2015; 62 (1): 1-8. Διατίθεται στη διεύθυνση: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Nunez G, Moreno Μ, Rodas-González Α, Hoet Α, Wittum Τ. Απομόνωση Escherichia coli O157: H7 σε δείγματα κοπράνων βοοειδών διπλού σκοπού από το δήμο Miranda, Zulia State, Βενεζουέλα. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007. 17 (3): 239-245. Διατίθεται στο: scielo.org