ΕΚ θεμέλια, προετοιμασία και χρήσεις

Το ΕΚ ζωμό ή ζωμό Escherichia coli Είναι ένα εκλεκτικό υγρό μέσο καλλιέργειας. Αυτό το μέσο συνιστάται με πρότυπες μεθόδους για την καταμέτρηση συνολικά και κολοβακτηριδίων, η πιο πιθανή τεχνική αριθμός (ΜΡΝ) σε δείγματα νερού και τροφίμων, όπου η κύρια εμπλεκόμενος παράγοντας είναι η Escherichia coli.

Ο ζωμός ΕΚ αποτελείται από τριτεΐνη, λακτόζη, χολικά άλατα, φωσφορικό κάλιο, φωσφορικό μονοκάλιο, χλωριούχο νάτριο και νερό. Η φόρμουλα της είναι στρατηγικά σχεδιασμένη για να ευνοεί την ανάπτυξη ολικών και κολοβακτηριδίων κοπράνων και να εμποδίζει την ανάπτυξη άλλων συνοδευτικών μικροοργανισμών.

Το βακτήριο Escherichia coli είναι το κύριο κολοβακτηρίδιο κοπράνων που υπάρχει ως μολυσματικό υλικό σε νερό και πηγές τροφίμων, προκαλώντας σημαντικές γαστρεντερικές επιπλοκές.

Πρέπει να σημειωθεί ότι υπάρχουν πολλοί ορότυποι Escherchia coli; συμπεριλαμβανομένων μπορούν να αναφερθούν (EHEC), εντεροαιμορραγικό (EIEC), enteopatógena (EPEC), εντεροτοξιγονικό (ETEC) και enteroaggregative (ΕΚΑΕ).

Αυτό σημαίνει ότι έχει την ικανότητα να επιτρέπει την ανάπτυξη όλων αυτών, χωρίς όμως να μπορεί να κάνει διάκριση μεταξύ τους. Για να γίνει αυτό, πρέπει να εκτελεστούν πρόσθετες δοκιμές.

Η μικροβιολογική μελέτη του ύδατος και των τροφίμων από τον πιό πιθανό αριθμό (NMP) για την αναζήτηση ολικών και κολοβακτηριδίων κοπράνων είναι ένα πρωτόκολλο που συμμορφώνεται με διάφορες φάσεις. υποθετική φάση, επιβεβαιωτική φάση και φάση ολοκλήρωσης. Ο ζωμός ΕΚ χρησιμοποιείται στη φάση επιβεβαίωσης.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
  • 1,1 ΕΚ ζωμό
  • 1.2 ζωμός ΕΚ τροποποιημένο με νενοβιοκίνη
• 2 Προετοιμασία
  • 2.1 ζωμό EC
  • 2.2 ζωμός ΕΚ τροποποιημένο με νενοβιοκίνη
• 3 Χρήση
  • 3.1 Ανάλυση συνολικών και κολοβακτηριοειδών
• 4 Έλεγχος ποιότητας
• 5 Συστάσεις
• 6 Αναφορές

Ίδρυμα

ΕΚ ζωμό

Το μέσο της EC βασίζεται στην παροχή των απαραίτητων θρεπτικών στοιχείων για τη βέλτιστη ανάπτυξη των ολικών και κολοβακτηριοειδών, όπου περιλαμβάνεται το βακτήριο Escherichia coli.

Αυτά τα θρεπτικά στοιχεία παρέχονται από το triptein, που είναι μια εξαιρετική πηγή πεπτιδίων και αμινοξέων. Επιπλέον, περιέχει επίσης λακτόζη, έναν ζυμώσιμο υδατάνθρακα που παρέχει ενέργεια και επιτρέπει να δείξει εάν τα βακτήρια παράγουν φυσικό αέριο.

Από την άλλη πλευρά, το μέσο περιέχει χολικά άλατα που παρέχουν τον εκλεκτικό χαρακτήρα, καθώς αναστέλλει την ανάπτυξη θετικών κατά Gram μικροοργανισμών που μπορεί να υπάρχουν στο δείγμα..

Ομοίως, το φωσφορικό κάλιο και το φωσφορικό μονοκάλιο δρουν ως ένα σύστημα εξισορρόπησης του ρΗ. Αυτό το σύστημα είναι απαραίτητη, επειδή η λακτόζη στο ζωμό τείνει να την οξίνιση του μέσου, όταν ζυμώνεται από μικροοργανισμούς, αλλά αυτό αντισταθμίζεται από τα φωσφορικά άλατα.

Επομένως, αυτά τα στοιχεία είναι απαραίτητα, διότι η ανεξέλεγκτη οξύτητα μπορεί να επηρεάσει την ορθή ανάπτυξη των ζητούμενων μικροοργανισμών.

Από την πλευρά του, το χλωριούχο νάτριο σταθεροποιεί το μέσο ωσμωτικά, ενώ το νερό είναι ο διαλύτης των διαλυμένων ουσιών και παρέχει την υγρή σύσταση στο μέσο.

ΕΚ ζωμός τροποποιημένο με νενοβιοκίνη

Οι Okrend και Rose δημιούργησαν μια ποικιλία από ζωμό EC, που ονομάζεται ζωμός EC τροποποιημένο με novobiocin. Η τροποποίηση συνίσταται στη μείωση της συγκέντρωσης των χολικών αλάτων και στην προσθήκη 20 mg / dl νεονοβιοκίνης.

Η τροποποίηση αυτή ευνοεί την ανάκτηση των στελεχών του Escherichia coli εντεροαιμορραγικό (Ο157: Η7).

Αυτός ο βακτηριακός ορότυπος προκαλεί σοβαρή αιμορραγική κολίτιδα που μπορεί να προκαλέσει αιμολυτικό ουραιμικό σύνδρομο (HUS). η οποία με τη σειρά της μπορεί να προκαλέσει οξεία νεφρική ανεπάρκεια, με υψηλό ποσοστό θνησιμότητας που μπορεί να φτάσει έως και 50% στους ηλικιωμένους.

Λόγω της νοσηρότητας και της θνησιμότητας που προκαλούνται ετησίως από αυτό το βακτήριο λόγω της κατανάλωσης μολυσμένων τροφίμων, το Υπουργείο Γεωργίας των ΗΠΑ (USDA) συνιστά ευρέως τη χρήση αυτού του μέσου.

Προετοιμασία

ΕΚ ζωμό

Ζυγίζονται 37,4 γρ. Του αφυδατωμένου μέσου και διαλύονται σε 1 λίτρο απεσταγμένου νερού. Το μείγμα πρέπει να αφεθεί να ξεκουραστεί για 5 λεπτά. Στη συνέχεια, σε μια πηγή θερμότητας, η διάλυση διαλύεται συχνά.

Αφού διαλυθεί, διανέμεται σε δοκιμαστικούς σωλήνες προηγουμένως ρυθμισμένους με εσωτερικό σωλήνα Durham. Αποστειρώστε σε αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά.

Το ρΗ του μέσου θα πρέπει να είναι 6,9 ± 0,2. Το χρώμα του αφυδατωμένου μέσου είναι μπεζ και παρασκευάζεται είναι ελαφρώς κεχριμπαρένιο.

Τα κρασιά αποθηκεύονται σε ψυγείο μέχρι να χρησιμοποιηθούν. Κατά τη στιγμή της χρήσης οι ζωμοί πρέπει να είναι σε θερμοκρασία δωματίου.

Από την άλλη πλευρά, ο ζωμός ΕΚ μπορεί επίσης να παρασκευαστεί σε διπλή συγκέντρωση.

ΕΚ ζωμός τροποποιημένο με νενοβιοκίνη

Ζυγίζονται 36,7 gr του αφυδατωμένου μέσου και διαλύονται σε 1 λίτρο νερού. Το υπόλοιπο του παρασκευάσματος είναι το ίδιο με αυτό που περιγράφηκε παραπάνω.

Χρήση

Ανάλυση συνολικών και κολοβακτηρίων κοπράνων

Ο ζωμός ΕΚ είναι ιδανικός για την επιβεβαιωτική φάση της μελέτης των κολοβακτηριδίων με τη μέθοδο NMP, τόσο σε δείγματα νερού, όσο και σε φαρμακευτικά προϊόντα και τρόφιμα.

Οι τεμπέληδες θολό και οι μύλοι παραγωγής αερίου που λαμβάνονται στην τεκμαιρόμενη φάση θα πρέπει να επανατοποθετηθούν σε 2% φωτεινό πράσινο χολικό και ζωμό EC.

Για συνολικά κολοβακτηρίδια ζωμοί επωάστηκαν αεροβίως ΕΚ για 24 έως 48 ώρες στους 37 ° C, και για περιττωματικών κολοβακτηριδίων επωάζονται αεροβίως για 24 έως 48 ώρες στους 44 ° C.

Και στις δύο περιπτώσεις ερμηνεύεται με τον ακόλουθο τρόπο: οι θολωτοί σωλήνες με παραγωγή αερίου θεωρούνται θετικοί. Εάν δεν υπάρχει παραγωγή αερίου σε 24 ώρες, η επώαση συνεχίζεται για 48 ώρες.

Οι θετικοί ζωμοί EC περνούν στην πλήρη επιβεβαιωτική φάση, η οποία συνίσταται σε επανασχηματισμό σε επιλεκτικά μέσα όπως το άγαρ Mac Conkey, το EMB άγαρ ή το Endo άγαρ..

Εάν ο ζωμός που χρησιμοποιείται είναι τροποποιημένος με νεονοβιοκίνη, οι θετικοί σωλήνες συνιστώνται να τοποθετηθούν ξανά σε άγαρ Mac Conkey με σορβιτόλη.

Έλεγχος ποιότητας

Ο έλεγχος ποιότητας πρέπει να διενεργείται σε κάθε παρτίδα παρασκευασμένου μέσου. Πρώτον, πρέπει να αξιολογηθεί η στειρότητα του μέσου. Με αυτή την έννοια, ένας ή δύο ζωμοί επωάζονται χωρίς εμβολιασμό σε αερόβιο για 24 ώρες στους 37 ° C. Το αναμενόμενο αποτέλεσμα είναι ένας διαφανής ζωμός, χωρίς θολότητα ή αλλαγή χρώματος.

Δεύτερον, θα πρέπει να αξιολογηθεί η ανάπτυξη γνωστών στελεχών, για τα οποία μπορούν να χρησιμοποιηθούν τα ακόλουθα βακτηρίδια: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Σε όλες τις περιπτώσεις αναμένεται ικανοποιητική ανάπτυξη μικροβίων, παρατηρώντας ένα θολό ζωμό με παραγωγή αερίου για Ε. Coli και χωρίς φυσικό αέριο για τη σαλμονέλα.

Άλλα στελέχη που μπορούν να συμπεριληφθούν στον έλεγχο είναι: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Αυτά τα στελέχη πρέπει να αναστέλλονται πλήρως.

Συστάσεις

-Η τοποθέτηση των σωλήνων Durham είναι απαραίτητη για τη μελέτη των κολοβακτηριδίων.

-Διανείμετε το μέσο στους δοκιμαστικούς σωλήνες πριν αποστειρώσετε, ποτέ μετά.

-Μην χρησιμοποιείτε εάν το μέσο έχει προετοιμασία μεγαλύτερη των 3 μηνών.

-Μην χρησιμοποιείτε αν υπάρχει κάποια αλλαγή στα συνήθη χαρακτηριστικά του μέσου.

Αναφορές

1. Εργαστήρια Βρετανίας. Μέσο ΕΚ. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com
2. Ε. Coli εντεροαιμορραγικό. Το Κέντρο για την επισιτιστική ασφάλεια και τη δημόσια υγεία. 2010. Διαθέσιμο στη διεύθυνση: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. Μεσαίο EC. Διατίθεται στη διεύθυνση: foodsafety.neogen.com
4. Neogen Μέσο EC τροποποιημένο με novobiocin. Διατίθεται στη διεύθυνση: foodsafety.neogen.com
5. Jure Μ, Condori S, Leotta G, Chinen Ι, Miliwebsky Ε, Allori C, Aulet O, Castillo Μ Ανίχνευση, απομόνωση και ο χαρακτηρισμός των Escherichia coli παραγωγός τοξίνης Shiga από φρέσκο ​​βοδινό κρέας από τα κρεοπωλεία του Concepción της επαρχίας Tucumán. Rev Microgol από Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Διατίθεται στη διεύθυνση: www.scielo.org.