Λάδι λακτόζης, προετοιμασία και χρήσεις

Το ζωμό λακτόζης Είναι ένα μέσο καλλιέργειας υγρό, μη-εκλεκτικούς, χρησιμοποιούνται κυρίως ως μέσο προ-εμπλουτισμού στην απομόνωση των στελεχών Salmonella από την μικροβιολογική ανάλυση για επεξεργασμένα τρόφιμα, τα γαλακτοκομικά προϊόντα ή νερό. Αυτό συνιστάται από τη Διεθνή Επιτροπή για τις Μικροβιολογικές Προδιαγραφές για τα Τρόφιμα (ICMPF).

Το μέσο περιέχει ενζυματική πέψη ζελατίνης, εκχυλίσματος κρέατος και λακτόζης, ουσίες απαραίτητες για ανάπτυξη βακτηρίων. Επιπλέον, η λακτόζη είναι ζυμώσιμος υδατάνθρακας, έτσι ώστε μερικά κολοβακτηρίδια να είναι ικανά να τα χωρίσουν με παραγωγή αερίου.

Ως εκ τούτου, ο ζωμός λακτόζης συνιστάται από την Αμερικανική Ένωση Δημόσιας Υγείας (ΑΡΗΑ) για τεκμαρτή μελέτη της συνολικής και κοπράνων κολοβακτηριδίων, καλώντας το μια εξαιρετική εναλλακτική λύση για να αντικαταστήσει θειικό λαυρυλ ζωμό τρυπτόζη η τυπική τεχνική του πλέον πιθανού αριθμού (ΝΜΡ ) που χρησιμοποιούνται για την μικροβιολογική ανάλυση των δειγμάτων τροφίμων, γάλα και επιφανειακών υδάτων, των υπόγειων υδάτων, αναψυχής νερό, οικιακών λυμάτων και βιομηχανικών.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
• 2 Προετοιμασία
• 3 Χρήσεις
  • 3.1 Προ-εμπλουτισμός
  • 3.2 Ανάλυση των κολοβακτηριοειδών και των κολοβακτηριοειδών
• 4 Έλεγχος ποιότητας του μέσου
• 5 Αναφορές

Ίδρυμα

Για τη μικροβιολογική ανάλυση ορισμένων δειγμάτων, το στάδιο προ-εμπλουτισμού είναι απαραίτητο για να είναι δυνατή η ανάκτηση ενός συγκεκριμένου μικροοργανισμού που μπορεί να είναι σε πολύ χαμηλή ποσότητα ή υπό δυσμενείς συνθήκες που παραβιάζουν ή ελαχιστοποιούν τη βιωσιμότητά του.

Αυτή είναι η περίπτωση των ξηρών και μεταποιημένων τροφίμων, ενδεχομένως μολυσμένων με Salmonellas sp. Σε αυτές τις περιπτώσεις, εάν υπάρχουν τα βακτηρίδια, έχουν υποστεί σωματική και χημική κακομεταχείριση κατά τη διάρκεια της παραγωγικής διαδικασίας του προϊόντος..

Τέτοιος ώστε οι μικροοργανισμοί εκτίθενται σε δυσμενείς παράγοντες όπως η αφυδάτωση, η έκθεση σε ανασταλτική ή τοξικών προϊόντων, και η επικάλυψη που παράγεται από την παρουσία άλλων βακτηριδίων σε μεγαλύτερη ποσότητα, μεταξύ άλλων.

Υπό αυτή την έννοια, ο ζωμός λακτόζης έχει ένα αποτέλεσμα επιδιόρθωσης στις κατεστραμμένες δομές του μικροοργανισμού, προκαλώντας την ανάκτηση και την αναπαραγωγή, κατά τέτοιο τρόπο ώστε να μπορεί να ανιχνευθεί.

Ομοίως, ο ζωμός λακτόζης έχει την ικανότητα να αραιώνει τις ανασταλτικές ουσίες που μπορεί να επηρεάσουν τη βιωσιμότητά του, επιτρέποντας την ανάπτυξή του. Επιπλέον, η θρεπτική σύνθεση του ζωμού λακτόζης είναι στρατηγική για να ευνοήσει την ανάπτυξη του Salmonella sp πάνω από άλλους μικροοργανισμούς.

Για την τελική ταυτοποίηση πρέπει να υποβληθεί σε καλλιέργεια προς άλλα μέσα οριστικών καλλιεργειών.

Από την άλλη πλευρά, η σύνθεση του μέσου επιτρέπει επίσης την ανίχνευση μικροοργανισμών που παράγουν λακτόζη που παράγουν αέριο.

Προετοιμασία

Για την παρασκευή ενός λίτρου ζωμού λακτόζης ζυγίζονται 13 γραμμάρια του αφυδατωμένου μέσου και διαλύονται σε 1000 ml απεσταγμένου νερού.

Για να βοηθήσετε στη διάλυση του μέσου στο νερό, μπορείτε να θερμαίνετε τη λύση λίγο, αλλά όχι πάρα πολύ..

Μόλις ομογενοποιηθεί, το διάλυμα παρασκευάζεται ως εξής: αν ο ζωμός χρησιμοποιείται για την αναζήτηση κολοβακτηρίδια, ένα ράφι με δοκιμαστικούς σωλήνες, το οποίο εισάγεται σε ένα σωλήνα ζυμώσεως Durham προετοιμάζει στόμα κάτω.

Ο σωλήνας Durham είναι μια πολύ σημαντική λεπτομέρεια, διότι θα επιτρέψει την ανίχνευση του σχηματισμού αερίου, πολύτιμα δεδομένα στην αναζήτηση κολοβακτηριδίων.

Όταν οι σωλήνες είναι έτοιμοι, διανέμονται 10 ml του ζωμού λακτόζης, το οποίο πρέπει να είναι αρκετό για να καλύψει ολόκληρο το σωλήνα Durham..

Εάν ο ζωμός λακτόζης πρόκειται να χρησιμοποιηθεί ως ζωμός προ-εμπλουτισμού, δεν είναι απαραίτητο να τοποθετηθεί ένας σωλήνας ζύμωσης Durham. Σε αυτή την περίπτωση, απαιτείται μεγαλύτερη ποσότητα μέσου (225 ml), η οποία θα σερβιριστεί σε φιάλες των 500 ml, με φαρδύ στόμιο και με θερμοανθεκτικό βιδωτό πώμα.

Ακολούθως, οι σωλήνες ή οι φιάλες μεταφέρονται στο αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά.

Το μέσο θα πρέπει να παραμείνει σε τελικό ρΗ 6,9 ± 0,2 στους 25 ° C.

Τα κρασιά αποθηκεύονται σε ψυγείο μέχρι να χρησιμοποιηθούν.

Πριν από τη χρήση, οι ζωμοί πρέπει να ζεσταίνονται σε θερμοκρασία δωματίου.

Από την άλλη πλευρά, ο ζωμός λακτόζης μπορεί επίσης να παρασκευαστεί σε διπλή συγκέντρωση.

Ορισμένα εργαστήρια προσθέτουν μωβ βρωμοκρεσόλη στον ζωμό λακτόζης ως δείκτη ρΗ, για να δείξουν τους σωλήνες όπου υπήρξε ζύμωση λακτόζης από την αλλαγή χρώματος. Σε αυτή την περίπτωση ο ζωμός παίρνει μοβ χρώμα και αν η ζύμωση γίνει κίτρινη.

Χρησιμοποιεί

Στα εργαστήρια μικροβιολογίας, ο γαλακτοκομικός ζωμός χρησιμοποιείται ευρέως ως ένα σχετικά φθηνό μέσο που προσφέρει αξιόπιστα και γρήγορα αποτελέσματα (24-48 ώρες).

Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανάλυση των ολικών και κολοβακτηρίων κοπράνων σε νερό και τρόφιμα ή ως ζωμός προ-εμπλουτισμού για σαλμονέλα.

Προ-εμπλουτισμός

Ο προ-εμπλουτισμός είναι ένα βήμα πριν από τον εμπλουτισμό του δείγματος, πράγμα που βελτιώνει σημαντικά την ανάκτηση βακτηρίων του γένους Salmonella σε επεξεργασμένα τρόφιμα.

Για να γίνει αυτό, το δείγμα της στερεάς τροφής (25 γραμμάρια) ή υγρού (25 κ.εκ.) εμβολιάζεται σε 225 κ.εκ. ζωμού λακτόζης και επωάζεται για 24 έως 48 ώρες. Στη συνέχεια, ο σπόρος της σεληνικής κυστίνης ή ο τετραθειονικός ζωμός θα υποκαλλιεργηθεί σε ένα εμπλουτισμένο μέσο. Στη συνέχεια περνά σε επιλεγμένα μέσα XLD και SS.

Ανάλυση συνολικών και κολοβακτηρίων κοπράνων

Είναι ένα εξαιρετικό μέσο ως δείκτης μόλυνσης κοπράνων.

Ως εκ τούτου, ο ζωμός λακτόζης είναι ιδανικός για την υποθετική φάση της κολποειδούς μελέτης με τη μέθοδο του πιό πιθανολογούμενου αριθμού.

Για δείγματα στα οποία μεγάλοι αριθμοί κολοβακτηριδίων είναι ύποπτο μικρότερη ποσότητα αυτής (1 ml) εμβολιάστηκε, ενώ για δείγματα στην οποία λιγότερα κολοβακτηρίδια περισσότερο ύποπτο όγκο του δείγματος (10 ml) εμβολιάζεται.

Για την ανάλυση γίνονται 10 αραιώσεις^-1, 10^-2, 10^-3, σχηματίζοντας μια μπαταρία 3-5 σωλήνων για κάθε συγκέντρωση που χρησιμοποιείται.

Από κάθε αραίωση ο ίδιος όγκος σπέρνεται στους ζωμούς λακτόζης.

Οι σωλήνες επωάζονται για 24 ώρες. Οι ζωμοί που είναι αρνητικοί επωάζονται για 24 ώρες περισσότερο.

Η ερμηνεία των αποτελεσμάτων γίνεται με την παρατήρηση δύο χαρακτηριστικών: η πρώτη είναι η παρουσία ή απουσία θολότητας και δεδομένου ότι αυτό το μέσο δεν περιέχει δείκτη ρΗ, δεν θα υπάρξει αλλαγή στο χρώμα.

Το δεύτερο είναι η παραγωγή ή όχι του φυσικού αερίου. Το αέριο παρουσιάζεται εύκολα στο σωλήνα Durham, από την εμφάνιση μίας ή περισσοτέρων φυσαλίδων αέρα μέσα.

Θεωρείται θετικό εάν και τα δύο χαρακτηριστικά παρατηρούνται, δηλαδή, η θολερότητα με την παραγωγή αερίου. Οι θετικοί σωλήνες θα πρέπει να επανασπείρονται σε επιβεβαιωτικά μέσα (ζωμός Brilliant Green 2% Χολή και ζωμός EC).

Έλεγχος ποιότητας του μέσου

- Κατά την προετοιμασία του μέσου είναι σημαντικό να μην ξεχνάμε να τοποθετούμε τους σωλήνες Durhams εάν ο σκοπός του ίδιου είναι η μελέτη των κολοβακτηριδίων.

- Μην υπερθερμαίνετε το μέσο πριν αποστειρώσετε.

- Διανείμετε σε δοκιμαστικούς σωλήνες πριν αποστειρώσετε, ποτέ μετά.

- Μην χρησιμοποιείτε εάν το μέσο έχει προετοιμασία μεγαλύτερη των 3 μηνών.

- Μην χρησιμοποιείτε αν παρατηρήσετε οποιαδήποτε αλλαγή στα συνήθη χαρακτηριστικά του μέσου.

- Κατά την παρασκευή μιας παρτίδας ζωμού λακτόζης, δοκιμάστε την ποιότητα του με φύτευση στελεχών γνωστών ως Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii και Klebsiella pneumoniae. Αναπτύσσονται πολύ καλά, με παραγωγή αερίου (θετικός έλεγχος).

- Μπορεί επίσης να περιλαμβάνει Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis, που αναπτύσσονται καλά, αλλά χωρίς παραγωγή αερίου (Αρνητικός έλεγχος).

- Πρέπει να σημειωθεί ότι το αρχικό χρώμα του αφυδατωμένου μέσου είναι μπεζ και αυτό του μέσου παρασκευάζεται πολύ καθαρό και διαφανές κίτρινο. Αν υπάρχει αλλαγή στο χρώμα ή στην εμφάνιση, ενδέχεται να υπάρξει αλλοίωση του ίδιου χρώματος.

Αναφορές

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo Μ. Βιολογία και περιβαλλοντική μικροβιολογία. (2013) 1η έκδοση. Πανεπιστήμιο του Cartagenas, Κολομβία.
2. Camacho Α, Giles Μ, Ortegón Α, Palao Μ, Serrano Β και Velázquez Ο. (2009). Τεχνικές για τη μικροβιολογική ανάλυση των τροφίμων. 2η έκδοση. Τμήμα Χημείας, UNAM. Μεξικό.
3. Εργαστήρια Conda Pronadisa. 2017. Διπλή συγκέντρωση ζωμού λακτόζης (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Σύγκριση τεχνικών για την εκχύλιση κολοβακτηριδίων από το ίζημα της λίμνης του Xochimilco, Μεξικό. Rev. argent. microbiol.  2013 · 45 (3): 180-184. Διατίθεται στο: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Προσδιορισμός της μικροβιολογικής ποιότητας των αρτεσιανών φρεατίων των περιοχών των τμημάτων της κεντρικής, της Cordillera και της πρωτεύουσας. Mem. Inst Investig. Cienc. Υγεία 2013 · 11 (1): 5-14. Διατίθεται από: scielo.iics.