Vogel-Johnson Agar ίδρυμα, προετοιμασία και χρήσεις

Το Vagel-Johnson άγαρ είναι ένα στερεό, εκλεκτικό και διαφορικό μέσο καλλιέργειας, ειδικά σχεδιασμένο για την απομόνωση του Staphylococcus aureus. Αυτό το μέσο δημιουργήθηκε από τους Vogel και Johnson το 1960 από την τροποποίηση του άγαρ τελλουρίτη γλυκίνης που διαμορφώθηκε το 1955 από τους Zebovitz, Evans και Niven.

Η τροποποίηση συνίσταται στην αύξηση της συγκέντρωσης μαννιτόλης που υπάρχει στο μέσο και στην ενσωμάτωση ενός δείκτη ρΗ. Η τρέχουσα φόρμουλα αποτελείται από τρυπτικάσης εκχύλισμα ζύμης, μαννιτόλη, φωσφορικό δικάλιο, χλωριούχο λίθιο, γλυκίνη, ερυθρό φαινόλης, άγαρ, διάλυμα τελλουρικού καλίου 1% και νερό.

Θα πρέπει να σημειωθεί ότι υπάρχουν και άλλα μέσα που, όπως το αγάρ Vogel-Johnson, είναι επιλεκτικά για την απομόνωση του S. aureus, όπως αλατισμένο άγαρ μαννιτόλης και άγαρ Baird Parker. Με αυτή την έννοια, θα μπορούσε να ειπωθεί ότι το θεμέλιο του αγάρ Vogel-Johnson είναι ένα μίγμα μεταξύ άλατος αλμυρού μαννιτόλης και άγαρ Baird Parker..

Στο πρώτο οι αποικίες του S. aureus Διακρίνονται από τη ζύμωση μαννιτόλης και την αλλαγή του δείκτη pH σε κίτρινο. Από την άλλη πλευρά, στο δεύτερο το S. aureus χαρακτηρίζεται από τη μείωση του τελλουρίου στο τελλούριο και τη δημιουργία γκρίζων έως μαύρων αποικιών. Και οι δύο ιδιότητες παρατηρούνται σε άγαρ Vogel-Johnson.

Αυτό το μέσο, ​​όπως και οι αντίστοιχοί του, είναι χρήσιμο για την ανίχνευση του Staphylococcus aureus σε δείγματα τροφίμων, σε υγειονομικούς ελέγχους βιομηχανικών προϊόντων και σε κλινικά δείγματα.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
  • 1.1 Συμβολή των θρεπτικών ουσιών
  • 1.2 Επιλεκτική ισχύς
  • 1.3 Διαφορική ισχύς
  • 1.4 Οσμωτική ισορροπία και παράγοντας στερεοποίησης
• 2 Προετοιμασία
  • 2.1 1% β / ο διάλυμα τελλουρικού καλίου
  • 2.2 μέσο βάσης Vogel-Johnson agar
• 3 Χρήση
• 4 Έλεγχος ποιότητας
• 5 Αναφορές

Ίδρυμα

Συμβολή των θρεπτικών ουσιών

Το μέσο Vogel-Johnson περιέχει εκχύλισμα triptein και ζύμης. και οι δύο ουσίες παρέχουν αμινοξέα μακριάς αλυσίδας που χρησιμεύουν ως πηγές άνθρακα και αζώτου απαραίτητες για βακτηριακή ανάπτυξη. Τα βακτήρια που μπορούν να αναπτυχθούν σε αυτό το μέσο θα πάρουν τα θρεπτικά συστατικά από αυτές τις ουσίες.

Επιλεκτική ισχύς

Αγάρ Vogel - Johnson είναι σε θέση να αναστέλλουν την ανάπτυξη των Gram-αρνητικών βακτηρίων, ακόμα και κάποια Gram θετικά, ενθαρρύνοντας την ανάπτυξη των κοαγκουλάση θετικών σταφυλόκοκκων. Οι ανασταλτικές ουσίες είναι το τελλουρικό κάλιο, το χλωριούχο λίθιο και η γλυκίνη.

Διαφορική ισχύς

Οι ουσίες που κάνουν αυτό το διαφορικό μέσο είναι η μαννιτόλη και το τελλουρικό κάλιο. Η μαννιτόλη είναι ένας υδατάνθρακας και, όταν ζυμώνεται, παράγονται οξέα που μετατρέπουν το μέσο από το κόκκινο σε κίτρινο, πράγμα που συμβαίνει χάρη στην παρουσία του φαινολικού ερυθρού δείκτη pH.

Ενώ ο άχρωμος τελλουρίτης, όταν αναχθεί σε μεταλλικό ελεύθερο τελλουρίδιο, παίρνει ένα σκούρο γκρι έως μαύρο χρώμα.

Το Staphylococcus aureus ζυμώνει μαννιτόλη και μειώνει τον τελλουρίτη στο τελλούριο. Γι 'αυτό οι τυπικές αποικίες του S. aureus σε αυτό το μέσο είναι γκρι ή μαύρο που περιβάλλεται από ένα κίτρινο μέσο.

Τα βακτήρια αναπτύσσονται σε αυτό το μέσο και δεν μειώνουν το τελλουρικού ή ζύμωση μαννιτόλη, μορφή ακόμη πιο έντονη από ό, τι το αρχικό χρώμα διαφανές αποικίες που περιβάλλονται από ένα μέσο κόκκινο λόγω της αλκαλοποίηση του μέσου με τη χρήση πεπτονών.

Από την άλλη πλευρά, τα βακτήρια που μειώνουν την τελλουρίτη αλλά δεν ζυμώνουν τη μαννιτόλη θα αναπτυχθούν ως γκρίζες ή μαύρες αποικίες που περιβάλλονται από βαθύ κόκκινο χρώμα.

Εάν το μέσο παρασκευάστηκε χωρίς την προσθήκη τερρυρίτη καλίου, οι αποικίες του S. aureus θα αναπτύσσονταν ως κίτρινες αποικίες, περιβαλλόμενες από ένα κίτρινο μέσο, ​​όπως σε άλας με αλμυρή μαννιτόλη.

Οσμωτική ισορροπία και παράγοντας στερεοποίησης

Το φωσφορικό δι-κάλιο διατηρεί την ωσμωτική ισορροπία του μέσου και ρυθμίζει το pH σε ουδετερότητα 7.2. Ενώ το άγαρ δίνει σταθερή σύσταση στο μέσο καλλιέργειας.

Προετοιμασία

1% διάλυμα τελλουρικού καλίου w / v

Αυτή η λύση δεν περιλαμβάνεται στο αφυδατωμένο μέσο, ​​επειδή δεν μπορεί να αποστειρωθεί σε αυτόκλειστο. Για το λόγο αυτό παρασκευάζεται χωριστά και προστίθεται στο αποστειρωμένο μέσο.

Ορισμένες εμπορικές κατοικίες πωλούν έτοιμο προς χρήση διάλυμα 1% κελλουριτικού καλίου. Εάν θέλετε να προετοιμαστείτε στο εργαστήριο, ακολουθήστε τα παρακάτω βήματα:

Ζυγίζονται 1,0 g τελλουρικού καλίου και μετράται 100 ml αποσταγμένου νερού. Διαλύστε τον τελλουρίτη του καλίου σε ένα μέρος του νερού και στη συνέχεια συμπληρώστε την ποσότητα του νερού μέχρι να φτάσετε στα 100 ml. Αποστειρώστε το διάλυμα με τη μέθοδο φιλτραρίσματος.

Vogel-Johnson μέσο βάσης άγαρ

Ζυγίζονται 60 g του αφυδατωμένου μέσου και διαλύονται σε 1 λίτρο απεσταγμένου νερού. Το μίγμα θερμαίνεται μέχρι βρασμού για να βοηθήσει στην πλήρη διάλυση. Κατά τη διαδικασία διάλυσης το μέσο αναταράσσεται συχνά.

Αποστειρώστε σε αυτόκλειστο στα 15 λίβρες πίεσης και στους 121 ° C για 15 λεπτά. Απομακρύνεται από το αυτόκλειστο και αφήνεται να σταθεί μέχρις ότου το μέσο φθάσει σε θερμοκρασία περίπου 45 έως 50 ° C. Προστίθενται 20 ml από το προηγουμένως παρασκευασμένο διάλυμα τελονουριούχου καλίου σε 1%.

Αναμίξτε και ρίξτε σε στείρα πιάτα petri. Αφήστε να στερεοποιηθούν και να παραγγελθούν ανεστραμμένα σε πλάκες για μεταγενέστερη αποθήκευση στο ψυγείο μέχρι τη χρήση.

Το τελικό ρΗ του παρασκευασθέντος μέσου θα πρέπει να είναι 7,2 ± 0,2.

Πριν φτιάξετε ένα δείγμα, περιμένετε έως ότου η πλάκα λάβει τη θερμοκρασία περιβάλλοντος.

Το χρώμα του έτοιμου μέσου είναι κόκκινο.

Χρήση

Αν και μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την απομόνωση του S. aureus σε οποιοδήποτε τύπο δειγμάτων, χρησιμοποιείται κυρίως για τη μικροβιολογική ανάλυση φαρμακευτικών προϊόντων, καλλυντικών και τροφίμων.

Συνιστάται το ενοφθάλμισμα να είναι πυκνό. Η σπορά μπορεί να γίνει με συρραφή με λαβή πλατίνας ή με επιφάνεια με σπάτουλα Drigalski.

Οι πλάκες επωάζονται στους 35-37 ° C για 24 έως 48 ώρες σε αερόβιο.

Έλεγχος ποιότητας

Για να πραγματοποιηθεί ο ποιοτικός έλεγχος του μέσου Vogel-Johnson, μπορούν να χρησιμοποιηθούν τα ακόλουθα στελέχη ελέγχου:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ή Proteus mirabilis ATCC 43071.

Το αναμενόμενο αποτέλεσμα είναι το ακόλουθο: για τα στελέχη του S. aureus Ικανοποιητική ανάπτυξη με μαύρες αποικίες που περιβάλλεται από κίτρινο μέσο. Για να S. epidermidis κανονική ανάπτυξη με ημιδιαφανείς ή μαύρες αποικίες που περιβάλλεται από κόκκινο μέσο.

Ομοίως, για Ε. Coli αναμένεται ότι θα υπάρξει ολική αναστολή, και για Proteus mirabilis μερική ή ολική αναστολή. αν μεγαλώσει, θα το κάνει τόσο φειδωλά και οι αποικίες θα είναι μαύρες που περιβάλλονται από μεσαίο κόκκινο χρώμα.

Αναφορές

1. BD Laboratories. VJ (Agar Vogel and Johnson). 2006. Διαθέσιμο στη διεύθυνση: bd.com
2. Εργαστήρια Βρετανίας. Vogel-Johnson Agar. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com
3. Εργαστήρια Βρετανίας. Τελουρίτη καλίου. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britania.com
4. Himedia Laboratory. Μέσο Agar Vogel-Johnson Agar. 2018. Διατίθεται στη διεύθυνση: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Βάση Agar Vogel-Johnson. Εγχειρίδιο Μικροβιολογίας Merck. 12η έκδοση, σελ. 502-503. Διατίθεται σε: Χρήστες / Ομάδα / Λήψεις
6. Συντελεστές της Wikipedia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipedia σε εγκυκλοπαίδεια,   διαθέτει: wikipedia.org.
7. Βενεζουέλας Standard Covenin 1292-89. (1989). Φαγητό Απομόνωση και απαρίθμηση Staphylococcus aureus. Διατίθεται σε:sencamer.gob.ve