Φωτεινό πράσινο θεμέλιο άγαρ, προετοιμασία και χρήσεις

Το φωτεινό πράσινο άγαρ είναι ένα στερεό μέσο καλλιέργειας, με υψηλό βαθμό εκλεκτικότητας. Χρησιμοποιείται αποκλειστικά για την απομόνωση στελεχών του γένους Salmonella, ωστόσο υπάρχουν μερικές εξαιρέσεις, όπως τα είδη typhi και paratyphi που δεν αναπτύσσονται σε αυτό το μέσο.

Η αναζήτηση για το γένος Salmonella είναι συχνή σε δείγματα περιττωμάτων, νερού ή τροφής. Με αυτή την έννοια, αυτό το μέσο μπορεί να είναι πολύ χρήσιμο. Αυτό το άγαρ δημιουργήθηκε το 1925 από τους Kristensen, Lester και Jurgens, που αργότερα τροποποιήθηκε από τον Kauffmann.

Αποτελείται από pluripeptonas από πεπτικό προϊόν πέψης του ζωικού ιστού και παγκρεατικών χωνέψει καζεΐνης περιέχει επίσης εκχύλισμα ζύμης, χλωριούχο νάτριο, λακτόζη, σακχαρόζη, ερυθρό φαινόλης, λαμπρό πράσινο άγαρ.

Χαρακτηρίζεται από την ύπαρξη ένα αρκετά σκληρό περιβάλλον για τα περισσότερα βακτήρια, την προώθηση της ανάπτυξης της σαλμονέλας, κολοβακτηρίδια, ωστόσο μερικά είναι σε θέση να επιβιώσουν σε αυτό, να αναπτύξει ασθενώς.

Είναι σημαντικό να τονιστεί ότι σε αυτό το μέσο το γένος Shigella δεν αναπτύσσεται και ούτε Salmonella typhimurium, ni Salmonella paratyphi. Συνεπώς, εάν είναι επιθυμητό να απομονωθούν αυτοί οι μικροοργανισμοί, θα πρέπει να χρησιμοποιηθούν άλλα μέσα, όπως XLD άγαρ, μεταξύ άλλων..

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
  • 1.1 Φωτεινό πράσινο άγαρ
  • 1.2 Παραλλαγές φωτεινού πράσινου άγαρ (BGA)
• 2 Προετοιμασία
• 3 Χρήσεις / εφαρμογές
• 4 Έλεγχος ποιότητας
• 5 Αναφορές

Ίδρυμα

Φωτεινό πράσινο άγαρ

Κάθε ένα από τα συστατικά που αποτελούν το μέσο έχει μια συγκεκριμένη λειτουργία που καθορίζει τα χαρακτηριστικά και τις ιδιότητες του άγαρ.

Τα πολυπεπτένια και το εκχύλισμα ζύμης είναι η πηγή των θρεπτικών ουσιών από τις οποίες οι μικροοργανισμοί παίρνουν το άζωτο και τα μέταλλα που είναι απαραίτητα για την ανάπτυξή τους. Η λακτόζη και η σακχαρόζη είναι πηγές ενέργειας για μικροοργανισμούς που είναι ικανοί να τις ζυμωθούν.

Το φωτεινό πράσινο είναι η ανασταλτική ουσία που εμποδίζει την ανάπτυξη θετικών κατά Gram βακτηρίων και μεγάλου αριθμού αρνητικών κατά Gram μικροοργανισμών.

Το χλωριούχο νάτριο παρέχει οσμωτική σταθερότητα στο μέσο. Ενώ η φαινόλη είναι ο δείκτης του pH, γίνεται χρώμα όταν ανιχνεύεται η παραγωγή οξέων από τη ζύμωση των υδατανθράκων.

Οι μη ζυμώμενες αποικίες της λακτόζης και της σακχαρόζης αναπτύσσονται σε αυτό το μέσο λευκού χρώματος, ροζ ή διαφανούς, σε κόκκινο φόντο. Για παράδειγμα, βακτήρια του γένους Salmonella.

Ενώ οι αντιδραστήρες ζύμωσης της λακτόζης ή σακχαρόζης σε θέση να αναπτυχθούν σε αυτό το μέσο, ​​αποικίες ανάπτυξη πρασινωπό ή κιτρινωπό πράσινο κίτρινο, σε κίτρινο-πράσινο φόντο. Για παράδειγμα, Escherichia coli και Klebsiella pneumoniae.

Παραλλαγές φωτεινό πράσινο άγαρ (BGA)

Υπάρχουν και άλλες παραλλαγές φωτεινού πράσινου άγαρ. (NBG) και άγαρ νοβοπινοκίνης άγαρ φωτεινό πράσινο λακτόζη γλυκερόλης (NBGL).

Novobiocin agar φωτεινό πράσινο γλυκόζη (Εθνική Τράπεζα)

Άγαρ τρυπτικάσης σόγιας που περιέχει κιτρικού σιδηροαμμωνίου, πενταένυδρο θειοθειικό νάτριο, ερυθρό φαινόλης, γλυκόζη, λαμπρό πράσινο, νοβοβιοκίνη και αποσταγμένο νερό.

Εξυπηρετεί την απομόνωση αποικιών Salmonella από δείγματα κοπράνων.

Σε αυτή την περίπτωση το φωτεινό πράσινο και η νενοβιοκίνη είναι οι ανασταλτικές ουσίες που εμποδίζουν την ανάπτυξη θετικών κατά Gram βακτηρίων και ορισμένων αρνητικών κατά Gram μικροοργανισμών.

θειοθειικό νάτριο είναι η πηγή του θείου και κιτρικός σίδηρος είναι η πηγή σιδήρου, τόσο αναγκαία για να αποκαλύψει την παραγωγή υδρόθειου μέσω του σχηματισμού ενός μαύρου ιζήματος του τρισθενούς σιδήρου σουλφιδίου.

Η γλυκόζη είναι ο ζυμώσιμος υδατάνθρακας και το ερυθρό φαινόλης είναι ο δείκτης του pH.

Σε αυτό το μέσο οι αποικίες Salmonella αναπτύσσονται μεγάλες με ένα μαύρο κέντρο που περιβάλλεται από ένα κοκκινωπό φωτοστέφανο και ακολουθείται από μια σαφή ορατή περιοχή. Μερικά στελέχη του Citrobacter freundii παράγουν αποικίες ταυτόσημες με τις σαλμονέλες.

Λαμπρόζη γλυκερίνης πράσινης νεομποιοκίνης (NBGL)

Αυτό το μέσο περιέχει άγαρ τρυπτικάσης σόγιας, κιτρικού σιδηροαμμωνίου, θειοθειικό νάτριο, λακτόζη, γλυκερόλη, λαμπρό πράσινο, νοβοβιοκίνη και αποσταγμένο νερό.

Η διαφορά αυτού του μέσου με το προηγούμενο είναι ότι η γλυκόζη αντικαθίσταται από λακτόζη και γλυκερόλη και δεν χρησιμοποιείται φαινόλη κόκκινο.

Το μέσο χρησιμοποιείται επίσης για την απομόνωση των ειδών Salmonella, οι αποικίες αναπτύσσονται μαύρες, με την παραγωγή υδρόθειου.

Μόνο αποικίες που δεν παράγουν οξύ από γλυκερόλη ή λακτόζη επιτυγχάνουν παραγωγή Η₂Αρκεί, επειδή το χαμηλό ρΗ παρεμβαίνει στο σχηματισμό του Η₂S. Αυτό οδηγεί σε άχρωμες αποικίες για τα περισσότερα είδη Proteus και Citrobacter.

Προετοιμασία

-Ζυγίζονται 58 γραμμάρια του εμπορικώς παραχθέντος αφυδατωμένου μέσου. Προσθέστε το σε ένα λίτρο διπλά αποσταγμένου νερού. Αναμίξτε, αφήστε το να παραμείνει λίγα λεπτά και αφήστε το παρασκεύασμα σε μια πηγή θερμότητας μέχρι να διαλυθεί πλήρως.

-Autoclave στους 121 ° C για 15 λεπτά, μην υπερβαίνετε το χρόνο αποστείρωσης.

-Αφήστε να σταθείτε και σερβίρετε ακόμη και ζεστό σε αποστειρωμένα πιάτα petri. Το τελικό ρΗ θα πρέπει να είναι 6,9 ± 0,2.

-Αφήστε να στερεοποιηθεί και να αποθηκευτεί σε ψυγείο μέχρι τη χρήση. Πριν από τη φύτευση οι πλάκες πρέπει να πάρουν θερμοκρασία δωματίου.

-Το μέσο σκόνης είναι πράσινο και είναι έτοιμο να πάρει ένα πορτοκαλί-καφέ ή κόκκινο-πράσινο χρώμα, ανάλογα με το pH και το εμπορικό σπίτι. Ένα πολύ καστανό χρώμα είναι ενδεικτικό ότι το άγαρ ήταν υπερθερμανθέν.

-Μόλις το άγαρ στερεοποιηθεί, δεν συνιστάται η αναδιατύπωση, καθώς το μέσο επιδεινώνεται.

Χρήσεις / εφαρμογές

Αυτό το μέσο χρησιμοποιείται για την αναζήτηση στελεχών του γένους Salmonella από δείγματα κοπράνων και γαλακτοκομικών προϊόντων, μεταξύ άλλων..

Επειδή είναι ένα μάλλον αφιλόξενο περιβάλλον, συνιστάται να φυτέψετε ένα άφθονο ενοφθάλμισμα εάν χρησιμοποιηθεί το άμεσο δείγμα. Διαφορετικά, ο προ-εμπλουτισμός και ο εμπλουτισμός των δειγμάτων θα πρέπει να γίνει πριν από τη φύτευση σε αυτό το μέσο.

Καθώς ορισμένα στελέχη της σαλμονέλας αναστέλλονται ή αναπτύσσονται με δυσκολία, συνιστάται να συνοδεύσετε αυτό το μέσο με άλλα εκλεκτικά άγαρ για σαλμονέλα.

Όλες οι αποικίες με χαρακτηριστική σαλμονέλα πρέπει να υποβάλλονται σε βιοχημικές δοκιμές για οριστική αναγνώριση.

Έλεγχος ποιότητας

Για να δοκιμαστεί η καλή λειτουργία του φωτεινού πράσινου μέσου αγάρ, τα στελέχη της ATCC μπορούν να χρησιμοποιηθούν για να παρατηρήσουν την ανάπτυξη του ίδιου αυτού σε αυτό..

Τα πιο συχνά χρησιμοποιούμενα στελέχη για τον ποιοτικό έλεγχο είναι: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Τα πρώτα 3 πρέπει να δώσουν ροζ ή διαφανή λευκές αποικίες σε κόκκινο φόντο. Salmonella με καλή ανάπτυξη και Proteus με αραιή ή τακτική ανάπτυξη.

Klebsiella και Escherichia αναμένονται κιτρινοκίτρινες αποικίες με κίτρινο φόντο και στην περίπτωση των Shigella και Staphylococcus θα πρέπει να αναστέλλονται.

Το αφυδατωμένο μέσο πρέπει να φυλάσσεται σε θερμοκρασία δωματίου, σε ξηρό μέρος, επειδή το μέσο είναι πολύ υγροσκοπικό.

Αναφορές

1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratory S.A. Λαμπρό πράσινο άγαρ. 2009
2. Βρετανικό Εργαστήριο Φωτεινό πράσινο άγαρ. 2015.
3. BD Laboratory. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman Ε, Allen S, Janda W, Schreckenberger Ρ, Winn W. (2004). Μικροβιολογική διάγνωση. (5η έκδοση). Αργεντινή, Εκδοτική Panamericana S.A..
5. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. 2009. Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Αργεντινή Πανamericana S.A Σύνταξη