Agar Thayer Martin ίδρυμα, προετοιμασία και χρήσεις

Το Thayer Martin άγαρ Είναι ένα εξαιρετικά θρεπτικό και επιλεκτικό στερεό μέσο για την απομόνωση του Neisseria meningitidis και Neisseria gonorrhoeae. και τα δύο γνωστά ως παθογόνα ή κλινικά σημαντικά Neisseria.

Ένα από τα πιο σημαντικά χαρακτηριστικά του Agar Thayer Martin είναι η υψηλή περιεκτικότητα σε συμπληρώματα διατροφής. Αυτή η ιδιότητα είναι απαραίτητη, επειδή οι Νεσεσέρες είναι πολύ απαιτητικοί μικροοργανισμοί από τη θρεπτική άποψη και επομένως δεν αναπτύσσονται στα κοινά μέσα.

Επιπλέον, επειδή αυτά τα μικροοργανισμοί βρίσκονται συνήθως σε μη αποστειρωμένα περιοχές προσθήκη αναστολέων για να εμποδίσει την ανάπτυξη ενός άλλου χλωρίδας είναι απαραίτητο, χωρίς να επηρεάζεται η ανάπτυξη του γένους Neisseria.

Αυτό το άγαρ αποτελείται από άγαρ βάσης GC, αιμοσφαιρίνη, συμπληρωματικά συμπληρώματα διατροφής και ένα σύμπλεγμα ανασταλτικών ουσιών (αντιβιοτικά και αντιμυκητιασικά). Τα εμπορικά καταστήματα πωλούν ξεχωριστά κάθε ένα από τα συμπληρώματα.

Το δείγμα που πρόκειται να φυτευτεί σε αυτό το μέσο θα εξαρτηθεί από τον μικροοργανισμό που αναζητείται. Για να Neisseria gonorrhoeae Τα ιδανικά δείγματα είναι οι εκκρίσεις του κόλπου και της ουρήθρας. Ενώ για Neisseria meningitidis τα πλέον χρησιμοποιούμενα δείγματα είναι τα CSF, τα φάρυγγα και τα ρινοφαρυγγικά εξιδρώματα.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
  • 1.1 άγαρ βάσης GC
  • 1.2 Αιμοσφαιρίνη
  • 1.3 Συμπλήρωμα εμπλουτισμού
  • 1.4 Αναστολείς
• 2 Προετοιμασία
  • 2.1 Αρχικό Thayer Martin Agar
  • 2.2 Agar Thayer Martin τροποποιημένο
• 3 Χρήση
• 4 Έλεγχος ποιότητας
• 5 Περιορισμοί
• 6 Αναφορές

Ίδρυμα

Οι Νεσεσέρες είναι μικροοργανισμοί που ταξινομούνται ως ενοχλητικοί και ως εκ τούτου η απομόνωσή τους είναι δύσκολη. Για το λόγο αυτό, ο Thayer Martín είναι ένα σύνθετο μέσο και κάθε ένα από τα συστατικά του πληροί μια λειτουργία που εξηγείται παρακάτω:

GC πυρήνα άγαρ

άγαρ GC που περιέχουν πρωτεόζης πεπτόνης, άμυλο καλαμποκιού, χλωριούχο νάτριο, όξινο φωσφορικό κάλιο, φωσφορικό μονοκάλιο και άγαρ. Εξαρτήματα παρέχουν τα βασικά θρεπτικά συστατικά για την ανάπτυξη μικροβίων, εξουδετερώνουν τοξικά λιπαρά οξέα βοηθούν στη διατήρηση της οσμωτικής ισορροπίας, καθορίζουν το ρΗ και παρέχουν συνεκτικότητα στο στερεό μέσο.

Αιμοσφαιρίνη

Η αιμοσφαιρίνη παρέχει τους παράγοντες V και Χ (δινουκλεοτίδιο νικοτιναμιδίου αδενίνης NAD και ημίνη, αντιστοίχως). Ως εκ τούτου, σε αυτό το περιβάλλον, αναπτύσσονται επίσης είδη Haemophilus. Η αιμοσφαιρίνη μπορεί να ληφθεί εμπορικά σε αφυδατωμένη μορφή ή μπορεί να προστεθεί φρέσκο ​​αίμα αποφλοιωμένου βοδιού στο μέσο.

Συμπλήρωμα εμπλουτισμού

Από την άλλη πλευρά, πρέπει να προστεθεί ένα συμπλήρωμα εμπλουτισμού στο θρεπτικό μέσο Thayer-Martin, δεδομένου ότι τα θρεπτικά συστατικά που περιέχονται στο βασικό άγαρ δεν επαρκούν για τις απαιτήσεις του γένους Neisseria..

Το πιο συνηθισμένο συμπλήρωμα εμπλουτισμού καλείται isovitalex. Περιέχει γλουταμίνη, αδενίνη, NAD, κοκαρβοξυλάση, γουανίνη, νιτρικό σίδηρο, π-αμινο βενζοϊκό οξύ, βιταμίνη Β12, θειαμίνη και γλυκόζη. Όλες αυτές οι ενώσεις είναι απαραίτητες για την κατάλληλη ανάπτυξη παθογόνου Neisseria.

Αναστολείς

Επειδή είναι ένα εξαιρετικά θρεπτικό μέσο, ​​οι αναστολείς πρέπει να χρησιμοποιούνται για την πρόληψη της ανάπτυξης μικροοργανισμών της συνηθισμένης χλωρίδας της περιοχής και έτσι να ευνοούν την απομόνωση του γένους Neisseria..

συμπλόκου αναστολέα αποτελείται από βανκομυκίνη, κολιστίνη και νυστατίνη. Η βανκομυκίνη αναστέλλει την ανάπτυξη των Gram θετικών βακτηρίων, κολιστίνη εμποδίζει την ανάπτυξη των Gram-αρνητικών βακτηρίων, όπως Pseudomonas και μερικά σαπροφυτικών Neisseria, και Nystatin δρα επί μαγιάς ως Candida albicans.

Εν τούτοις, τροποποιήθηκε το άγαρ Thayer Martin. οι αλλαγές συνίσταντο στην προσθήκη τριμεθοπρίμης, στην αύξηση της ποσότητας άγαρ και στην προσθήκη επιπλέον γλυκόζης. Αυτές οι αλλαγές βελτίωσαν σημαντικά την ανάκτηση των ειδών Neisseria gonorrhoeae.

Θα πρέπει να σημειωθεί ότι η τριμεθοπρίμη αναστέλλει την ανάπτυξη του γένους Proteus και τον επακόλουθο σχηματισμό σμήγματος. Με αυτή την έννοια, τα αντιβιοτικά είναι αυτά που παρέχουν την επιλεκτική φύση στο μέσο Thayer Martin.

Προετοιμασία

Αρχικό Thayer Martin Agar

-GC Agar

Ζυγίζονται 8,2 g αφυδατωμένου μέσου GC και αναστέλλεται σε 100 ml. Ανακατεύουμε και βράζουμε για 1 λεπτό με συχνή ανάδευση για να διαλύσουμε στο σύνολό του. Αποστειρώστε το μείγμα σε αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά.

-2% αιμοσφαιρίνη

Αναστολή 2 g αφυδατωμένης αιμοσφαιρίνης σε 2 ή 3 ml ζεστού αποσταγμένου νερού για να σχηματιστεί ένα ομοιόμορφο μίγμα. Προσθέστε σιγά-σιγά περισσότερο νερό για να συμπληρώσετε όγκο των 100 ml. Το εναιώρημα πρέπει να είναι ομοιογενές πριν από την αποστείρωση.

Αποστειρώστε σε αυτόκαυστο για 15 λεπτά.

-Συμπλήρωμα εμπλουτισμού

Ανασυστήστε τον εμπορικό δρόμο με το αραιωτικό που παρέχεται από την ίδια εμπορική κατοικία. Ανακατεύουμε καλά. Η ποσότητα του αραιωτικού που θα χρησιμοποιηθεί θα καθορίζεται στις οδηγίες του κιτ..

-Συμπλήρωμα αναστολής V.C.N (βανκομυκίνη, κολιστίνη, νυστατίνη)

Ανασυστήστε το φιαλίδιο με το αραιωτικό που παρέχεται από την εμπορική κατοικία. Ανακατεύουμε καλά. Η ποσότητα του αραιωτικού που θα χρησιμοποιηθεί θα καθορίζεται στις οδηγίες του κιτ..

-Ετοιμάζεται

Για κάθε 100 ml άγαρ GC προχωρήστε ως εξής:

Όταν εξέρχεται από την άγαρ GC αυτόκλειστο, αφήνεται να ψυχθεί σε θερμοκρασία 50 ° C και προσθήκη 2 ml του διαλύματος αιμοσφαιρίνης που παρασκευάστηκε, συμπλήρωμα 2 εμπλουτισμός ml (isobitalex ή britalex), και 2 ml της αναστολής συμπληρώματος. Ανακατεύουμε και σερβίρουμε σε αποστειρωμένα πιάτα Petri.

Αφήστε να στερεοποιηθεί και να αποθηκευτεί σε ψυγείο μέχρι τη χρήση.

Το χρώμα του παρασκευασμένου μέσου είναι κόκκινο κεράσι. Το τελικό ρΗ του μέσου είναι 7,2 ± 0,2

Τροποποιημένο Thayer Martin Agar

Ζυγίζονται 8,2 g αφυδατωμένου μέσου GC και αναστέλλεται σε 100 ml. Προσθέστε 1 g άγαρ και προσθέστε 0.3 g γλυκόζης. Ανακατεύουμε και βράζουμε για 1 λεπτό με συχνή ανάδευση για να διαλύσουμε στο σύνολό του. Αποστειρώστε το μείγμα σε αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά.

Προετοιμάστε την αιμοσφαιρίνη και το συμπλήρωμα εμπλουτισμού όπως περιγράφεται παραπάνω.

Το συμπλήρωμα αναστολής που χρησιμοποιείται είναι το V.C.N.T (βανκομυκίνη, κολιστίνη, νυστατίνη, τριμεθοπρίμη).

-Ετοιμάζεται

Συνεχίστε όπως περιγράφεται για το αρχικό άγαρ Thayer Martin.

Χρήση

Το άγαρ Thayer Martin θα πρέπει να μετριάζεται πριν από τη σπορά των δειγμάτων. Τα κοινώς χρησιμοποιούμενα δείγματα είναι τα εκκρίματα του φάρυγγα, τα ρινικά εκκρίματα, η κολπική, η ουρηθρική και / ή η πρωκτική έκκριση και το CSF..

Χρησιμοποιήστε πρόσφατα ληφθέντα δείγματα και κάνετε ισχυρό εμβολιασμό στο άγαρ. Τα δείγματα σπέρνονται απευθείας με εκφόρτωση υλικού και στη συνέχεια χαράσσονται από την εξάντληση στην επιφάνεια.

Οι πλάκες επωάζονται στους 35-37 ° C για 24 έως 48 ώρες σε μικροαερόφιλο βάζο (5% CO₂). Στο τέλος της περιόδου επώασης, οι πλάκες εξετάζονται για μικρές, γκρίζες και μερικές φορές βλεννοειδείς αποικίες..

Εκτελέστε Gram και επιβεβαιώστε βιοχημικές εξετάσεις σε ύποπτες αποικίες.

Έλεγχος ποιότητας

Για να εκτελεστεί ο ποιοτικός έλεγχος του άγαρ Thayer Martin, μπορούν να χρησιμοποιηθούν τα ακόλουθα μικροβιακά στελέχη.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 και Neisseria meningitidis ATCC 13090; και στα δύο στελέχη αναμένεται ικανοποιητική ανάπτυξη.

Θα πρέπει επίσης να συμπεριληφθούν τα ακόλουθα στελέχη: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 και Candida albicans ATCC 10231. Σε όλα αυτά αναμένεται ολική ή μερική αναστολή σε αυτό το μέσο.

Περιορισμοί

-Πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι βακτήρια που είναι ανθεκτικά στους αναστολείς που χρησιμοποιούνται μπορούν να αναπτυχθούν στο μέσο..

-Υπάρχουν στελέχη Neisseria gonorrhoeae που μπορεί να είναι ευαίσθητα στη συγκέντρωση της βανκομυκίνης που χρησιμοποιείται. Για το λόγο αυτό συνιστάται η χρήση άγαρ σοκολάτας συμπληρωμένου με isovitalex παράλληλα, αλλά χωρίς αναστολείς.

-Υπάρχουν στελέχη ζυμομυκήτων ανθεκτικά στη νυστατίνη που μπορούν να αναπτυχθούν σε αυτό το μέσο και να παρεμβαίνουν στην απομόνωση παθογόνου Neisseria, ειδικά των γονοκοκκικών..

Αναφορές

1. Διαγνωστικά εργαστήρια Valtek. Agar Thayer-Martin.2016. Διαθέσιμο σε: com
2. Εργαστήρια Βρετανίας. Thayer Martin τροποποιημένο μέσο. 2010. Διαθέσιμο στη διεύθυνση: britanialab.com
3. Συμμετέχοντες στη Wikipedia. Thayer-Martin άγαρ. Wikipedia, Η ελεύθερη εγκυκλοπαίδεια. 26 Οκτωβρίου 2017, 16:33 UTC. Διατίθεται στη διεύθυνση: wikipedia.org4. Πρόσβαση στις 28 Φεβρουαρίου 2019.
4. Εργαστήρια Βρετανίας. GC άγαρ. 2010. Διαθέσιμο στη διεύθυνση: britanialab.com.
5. Εργαστήρια BBL ™ Μεσαίο εμπλουτισμό για πλαστικούς μικροοργανισμούς. 1999. Διατίθεται σε: bd.com
6. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. (2009). Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Αργεντινή.