Ίδρυμα Agar TCBS, προετοιμασία και χρήση

Το TCAR άγαρ είναι ένα εξαιρετικά επιλεκτικό και διαφορικό μέσο στερεής καλλιέργειας, που χρησιμοποιείται για την απομόνωση και καλλιέργεια βακτηρίων Vibrio, ιδιαίτερα Vibrio cholerae, V. vulnificus και V. parahaemolyticus ως κύρια παθογόνα αυτού του γένους.

Το ακρωνύμιο TCBS σημαίνει θειοθειική κιτρική χολική σακχαρόζη. Αυτό το άγαρ είναι επίσης γνωστό ως το εκλεκτικό μέσο για τον Vibrios. Ο αρχικός τύπος δημιουργήθηκε από τον Nakanishi και αργότερα τροποποιήθηκε από τον Kobayashi.

Αποτελείται από εκχύλισμα ζύμης, πεπτόνη κρέατος, τρυπτικάσης, κιτρικό νάτριο, θειοθειικό νάτριο, οχ χολής, σακχαρόζη, χλωριούχο νάτριο, κιτρικό σίδηρο, κυανού της βρωμοθυμόλης, μπλε της θυμόλης και άγαρ.

Αυτή η σύνθεση επιτρέπει επαρκή ανάπτυξη των ειδών Vibrio από νερό, περιττώματα και δείγματα τροφίμων. εκτός από Vibrio hollisae, που δεν αναπτύσσεται σε αυτό το μέσο. Επιπλέον, το μέσο TCBS είναι ικανό να αναστέλλει την ανάπτυξη άλλων συνοδευτικών βακτηριδίων, ειδικά κολοβακτηριδίων.

Λόγω των σοβαρών γαστρεντερικών και εξω-εντερικών προβλημάτων που παράγουν ορισμένα είδη του γένους Vibrio, η διάγνωσή τους είναι πολύ σημαντική. Ο άνθρωπος μολύνεται κυρίως από την κατανάλωση ακατέργαστων ή μη ψημένων θαλασσινών ή μολυσμένου νερού, αλλά και από τη μόλυνση τραυμάτων.

Εξαιτίας αυτού, τα κλινικά εργαστήρια θα πρέπει να περιλαμβάνουν άγαρ TCBS στη μελέτη των καλλιεργειών κοπράνων υγρών δειγμάτων κοπράνων, ειδικά με την εμφάνιση νερού ρυζιού. Ειδικά αν ο ασθενής αναφέρει ότι έρχεται σε επαφή με θαλασσινό νερό ή ότι έχει καταναλώσει θαλασσινά ή ψάρια.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
• 2 Προετοιμασία
• 3 Χρήση
• 4 Τοποθέτηση
• 5 Περιορισμός
• 6 Έλεγχος ποιότητας
• 7 Αναφορές

Ίδρυμα

Το εκχύλισμα ζύμης, οι πεπτόνες κρέατος και το τρίθεν είναι η θρεπτική πηγή αυτού του μέσου. Ωστόσο, το άγαρ TCBS είναι ένα αφιλόξενο μέσο για τα περισσότερα βακτηρίδια.

Η υψηλή επιλεκτικότητα του δίνεται από την προσθήκη κιτρικού νατρίου και χολικού βολφραμίου. αμφότεροι είναι ανασταλτικοί παράγοντες που παρέχουν επίσης ένα αλκαλικό ρΗ στο μέσο, ​​περιορίζοντας την ανάπτυξη της συνοδευτικής χλωρίδας και ευνοώντας την ανάπτυξη του V. cholerae, μεταξύ άλλων ειδών. Πρέπει να σημειωθεί ότι Vibrio cholerae είναι πολύ ευαίσθητο στην καούρα.

Από την πλευρά του, το χλωριούχο νάτριο εξισορροπείται οσμωτικά στο μέσο. Επιπλέον, καθώς η συγκέντρωσή του είναι υψηλή, δρα επίσης ως ανασταλτικός παράγοντας, ευνοώντας την ανάπτυξη των αλογονοφίλων βακτηρίων.

Η σακχαρόζη είναι το ζυμώσιμο σάκχαρο που μαζί με τους μπλε δείκτες pH της βρωμοθυμόλης και της μπλε θυμόλης δίνουν τον διαφορικό χαρακτήρα στο μέσο. Για το λόγο αυτό, με αυτό το μέσο είναι δυνατόν να διαφοροποιηθούν τα στελέχη ζυμώσεως σακχαρόζης από μη ζυμωτικά στελέχη.

Οι αποικίες των στελεχών ζυμώσεως σακχαρόζης αναπτύσσουν ένα κίτρινο χρώμα και θα μετατρέψουν το μέσο από πράσινο σε κίτρινο λόγω της παραγωγής οξέων. Οι μη ζυμωτήρες αναπτύσσονται διαφανείς και το μέσο παραμένει το αρχικό χρώμα (πράσινο).

Ομοίως, αυτό το μέσο περιέχει θειοθειικό νάτριο ως πηγή θείου και κιτρικού σιδήρου ως παράγοντα αποκάλυψης. Αμφότερα δείχνουν τα βακτήρια ικανά να παράγουν υδρόθειο (άχρωμο αέριο). Το Η₂S σχηματίζεται από το θειοθειικό άλας και στη συνέχεια αντιδρά με κιτρικό σιδήρου ένα ορατό μαύρο ίζημα.

Τέλος, το άγαρ είναι αυτό που δίνει τη σταθερή συνοχή στο μέσο.

Προετοιμασία

Ζυγίζονται 89 gr του αφυδατωμένου μέσου και διαλύονται σε ένα λίτρο απεσταγμένου νερού. Βοηθήστε τη διάλυση με θέρμανση και συχνή διέγερση. Το μείγμα μπορεί να βράσει για 2 λεπτά.

Το μέσο αυτό δεν αποστειρώνεται σε αυτόκλειστο. Μετά τη διάλυση του σερβίρεται απευθείας σε αποστειρωμένες πλάκες. Όταν στερεοποιούνται, είναι διατεταγμένα ανεστραμμένα στους κατασκευαστές πλακών και αποθηκεύονται σε ψυγείο (2-8 ° C) μέχρι να χρησιμοποιηθούν.

Το μέσο μετά την παρασκευή θα πρέπει να είναι σε ρΗ 8,6 ± 0,2.

Το χρώμα του αφυδατωμένου μέσου είναι ανοιχτό μπεζ ή πράσινο-μπεζ και το χρώμα του μέσου είναι πράσινο ή μπλε πράσινο.

Είναι σημαντικό να αφήνετε τα πλακίδια να σκληρύνουν πριν σπείρουν τα δείγματα.

Χρήση

Το πιο συνηθισμένο δείγμα για την απομόνωση του Vibrios είναι τα διάρροια κόπρανα.

Τα δείγματα κοπράνων αν δεν μπορούν να εμβολιασθούν αμέσως στο επιλεκτικό μέσο πρέπει να μεταφέρονται στη μέση του Cary Blair.

Για να αυξηθεί η ευαισθησία της καλλιέργειας, το σκαμνί μπορεί να περάσει από αυτό νερό πεπτόνης σε ρΗ 8,4 ως μέσο εμπλουτισμού για 8 ώρες κατ 'ανώτατο όριο, TCBS εκείθεν μέσο υποκαλλιεργείται.

Επίσης, να έχετε κατά νου ότι ορισμένα στελέχη του Vibrio μπορεί να προκαλέσει σήψη σε ανοσοκατεσταλμένους ασθενείς, ώστε να μπορούν να απομονωθούν από καλλιέργειες αίματος. Ομοίως, μπορούν να αναλυθούν δείγματα νερού και τροφίμων από τη θάλασσα, όπου υπάρχουν εστίες της νόσου χολέρας.

Σπαρμένο

Το ενοφθάλμισμα του εξεταζόμενου δείγματος πρέπει να είναι προεξέχουσα, η σπορά γίνεται με τη μέθοδο της εξώθησης. Οι πλάκες επωάζονται στους 37 ° C για 24 ώρες σε αερόβιο.

Οι υποτιθέμενες αποικίες του Vibrio cholerae Είναι μεσαίου μεγέθους, λείες, αδιαφανείς, με λεπτές άκρες και κίτρινες, επειδή ζυμώνουν σακχαρόζη..

Με παρόμοιο τρόπο, το είδος του V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii και μερικοί V. vulnificus. Άλλα είδη του Vibrios κλινικά σημαντικά ως V. parahaemolyticus μην ζυμώνετε τη σακχαρόζη, αναπτύσσοντας τις αποικίες της πράσινης ελιάς.

Επιπλέον, πρέπει να θυμόμαστε ότι ορισμένα στελέχη του Aeromonas και Plesiomonas οξειδάσης (+) μπορούν να αναπτυχθούν σε αυτό το υλικό, την ανάπτυξη κίτρινες αποικίες που μπορεί να μπερδεύουν τον κλινικό ιατρό. Ενώ ορισμένα στελέχη του Pseudomonas οξειδάση και (+) αποικίες αυξάνεται το πράσινο και V. parahaemolyticus.

Περιορισμός

τεστ οξειδάσης είναι δεν πρέπει ποτέ να είναι θετικές για το Vibrio φύλου από TCBS άγαρ αποικίες που λαμβάνονται, γιατί το αποτέλεσμα θα είναι ένα ψευδώς αρνητικό. Ενώσεις μέσο παρεμβαίνει έντονα σε αυτό το τεστ. Επομένως, πρέπει να γίνει από υποκουλτούρες σε άγαρ αίματος.

Έλεγχος ποιότητας

Για να αποδείξετε ότι το μέσο είναι σε καλή κατάσταση, συνιστάται να φυτέψετε γνωστά ή πιστοποιημένα στελέχη ελέγχου και να παρατηρήσετε εάν η ανάπτυξη ικανοποιεί τα αναμενόμενα χαρακτηριστικά.

Για αυτό, τα στελέχη:

-Vibrio cholerae - Ικανοποιητική ανάπτυξη (κίτρινες αποικίες, διαφανή σύνορα).

-Vibrio parahaemolyticus - Ικανοποιητική ανάπτυξη (αποικία με πράσινο κέντρο και ημιδιαφανές περίγραμμα).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - ικανοποιητική ανάπτυξη (κίτρινες αποικίες με halos του ίδιου χρώματος γύρω από την αποικία).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - ολική ή μερική αναστολή (μικρές κίτρινες ή ημιδιαφανείς αποικίες).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- μερική ή ολική αναστολή (μπλε αποικίες).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Πλήρως παρεμποδισμένη.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Ολική ή μερική αναστολή. (Οι μικρές αποικίες στο κέντρο της πράσινης διαφανούς ακμής).

Η επώαση ενός μη εμβολιασμένου μέσου δεν πρέπει να αλλάξει.

Αναφορές

1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCAR άγαρ. 2009. Διαθέσιμο στη διεύθυνση: f-soria.es
2. BD Laboratory. BD. TCBS Agar 2003. Διαθέσιμο σε: bd.com
3. Εργαστήρια Βρετανίας. Μέσο TCBS. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com
4. Τα εργαστήρια Nowedia Αγάρ TCBS. 2016. Διατίθεται στη διεύθυνση: foodsafety.neogen.com
5. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. (2009). Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Αργεντινή.
6. Koneman Ε, Allen S, Janda W, Schreckenberger Ρ, Winn W. (2004). Μικροβιολογική διάγνωση. 5η έκδοση. Editorial Panamericana S.A. Αργεντινή.