Βοηθητική βάση tripticaseína άγαρ σόγιας, προετοιμασία και χρήσεις

Το τρυπτικασίνη άγαρ σόγιας ή άγαρ σόγιας τρυπτικάσης είναι ένα στερεό, μη εκλεκτικό και θρεπτικό μέσο καλλιέργειας. Χαρακτηρίζεται με τα γράμματα TSA για το ακρωνύμιό της στο αγγλικό Trypticase Soy Agar. Αποτελείται από τριπτένη, πεπτόνη σόγιας, χλωριούχο νάτριο και άγαρ-άγαρ.

Λόγω της υψηλής θρεπτικής του δύναμης, είναι ιδανική για την καλλιέργεια μέτρια απαιτητικών και μη απαιτητικών μικροοργανισμών. Το μέσο χωρίς πρόσθετα συμπληρώματα δεν συνιστάται για πρωτογενείς καλλιέργειες, αλλά είναι πολύ χρήσιμο για την υποκαλλιέργεια των καθαρών στελεχών και τη διατήρησή τους βιώσιμες, μεταξύ άλλων χρήσεων.

Επίσης, αυτό άγαρ χρησιμεύει ως βάση για την παρασκευή εμπλουτισμένων μέσων όπως άγαρ αίματος, ειδικά όταν απαιτείται να τηρούν τα πρότυπα της αιμόλυσης και για τοποθέτηση taxa optochin και βακιτρακίνη, απαιτούνται στη διάγνωση της Streptococcus pneumoniae και Streptococcus pyogenes αντίστοιχα.

Από την άλλη πλευρά, όταν συνδυάζεται με αντιβιοτικά, είναι χρήσιμο να απομονωθούν προαιρετικοί και αυστηροί αναερόβιοι μικροοργανισμοί κλινικής σημασίας από δείγματα με μικτή χλωρίδα..

Τέλος, η σύνθεση του άγαρ σόγιας τριπτικάσης και η απόδοσή του ανταποκρίνονται στις απαιτήσεις που έχουν καθοριστεί από τις διάφορες φαρμακοποιίες (ευρωπαϊκές, ιαπωνικές και βορειοαμερικανικές).

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
• 2 Προετοιμασία
  • 2.1 Πλάκες άγαρ σόγιας από τρυπτικάση
  • 2.2 Πλάκες από άγαρ σόγιας τρυπκαζεσίνης συμπληρωμένες με αίμα
  • 2.3 Πλάκες από άγαρ σόγιας τρυπκαζένης συμπληρωμένες με θερμασμένο αίμα
  • 2.4 Σφήνες άγαρ σόγιας τριπτικασίνης
• 3 Χρήσεις
• 4 Τοποθέτηση
• 5 Έλεγχος ποιότητας
  • 5.1 Έλεγχος της αποστείρωσης
  • 5.2 Έλεγχος ανάπτυξης
  • 5.3 Έλεγχος της ανάπτυξης και του μοτίβου της αιμόλυσης τριπεκτινάσης σε άγαρ σόγιας συμπληρωμένο με αίμα
• 6 Αναφορές

Ίδρυμα

Για τη σωστή ανάπτυξη των βακτηριδίων είναι απαραίτητη η παρουσία ενεργειακών συνεισφορών, όπως αμινοξέα, βιταμίνες, βάσεις πουρίνης και πυριμιδικές.

Με αυτή την έννοια, η τριπτίνη και η πεπτόνη σόγιας παρέχουν αυτά τα θρεπτικά συστατικά σε μικροοργανισμούς, επιτρέποντας έτσι την πλήρη ανάπτυξή τους. Ωστόσο, για τα απαιτητικά βακτήρια είναι απαραίτητο να συμπληρωθεί αυτό το άγαρ με αποφλοιωμένο αίμα ή θερμό αίμα για να αυξηθεί ο εμπλουτισμός του.

Από την άλλη πλευρά, αν προστεθούν αντιβιοτικά στο μέσο, ​​γίνεται ένα επιλεκτικό μέσο. Μπορείτε επίσης να προσθέσετε 0,6% εκχύλισμα ζυμομυκήτων για να ευνοήσετε την απομόνωση ειδών του γένους Listeria, ενώ προσθέτοντας τελουρίτη κυστίνης και Το αίμα του αρνιού είναι ιδανικό για Corynebacterium diphteriae.

Τελικά, το χλωριούχο νάτριο δίνει την ωσμωτική ισορροπία στο μέσο και το άγαρ παρέχει την στερεή σύσταση.

Προετοιμασία

Πλάκες από άγαρ σόγιας από τριπτικάσιν

Για την παρασκευή άγαρ σόγιας τρυπτικασίνης, 40 γραμμάρια του αφυδατωμένου εμπορικού μέσου θα πρέπει να ζυγίζονται σε ψηφιακή κλίμακα. Διαλύεται σε ένα λίτρο απεσταγμένου νερού που περιέχεται σε φιάλη.

Το μείγμα αφήνεται να παραμείνει για 5 λεπτά και έπειτα φέρεται σε μια πηγή θερμότητας για να βοηθήσει στην διάλυση του μέσου. Πρέπει να αναδεύεται συχνά και να αφήνεται να βράσει για 1 ή 2 λεπτά. Ακολούθως, το μέσο αποστειρώνεται στο αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά.

Αφήνεται να κρυώσει στους 50 ° C και διανέμεται σε αποστειρωμένα πιάτα Petri. Αφήστε να στερεοποιηθεί, να αναστρέψετε, να παραγγείλετε σε τακάκια και να φυλάξετε σε ψυγείο.

Το τελικό ρΗ του μέσου θα πρέπει να είναι 7,3 ± 0,2.

Θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι το χρώμα του αφυδατωμένου μέσου καλλιέργειας είναι ανοιχτό μπεζ και πρέπει να φυλάσσεται μεταξύ 10 και 35 ° C σε ξηρό μέρος.

Από την πλευρά του, το άγαρ που παρασκευάζεται είναι ελαφρώς κεχριμπαρένιο. Οι παρασκευασμένες πλάκες πρέπει να φυλάσσονται σε ψυγείο (2 έως 8 ° C) μέχρι να χρησιμοποιηθούν.

Οι πλάκες πρέπει να φτάσουν σε θερμοκρασία δωματίου πριν να χρησιμοποιηθούν.

Πλάκες από άγαρ σόγιας τρυπτικάσης που έχουν συμπληρωθεί με αίμα

Το άγαρ αίματος παρασκευάζεται με προσθήκη 5% απινιδωμένου αίματος κατά τον χρόνο ψύξης άγαρ σόγιας τρυπτικασίνης σε 50 ° C. Το μίγμα ομογενοποιείται με περιστροφή με απαλές κινήσεις.

Σερβίρετε στα αποστειρωμένα πιάτα Petri. Το χρώμα του μέσου θα πρέπει να είναι κόκκινο κεράσι.

Πλάκες από άγαρ σόγιας τρυπτικάσης που έχουν συμπληρωθεί με θερμασμένο αίμα

Για την παρασκευή του άγαρ αίματος με βάση την TSA, οι διαδικασίες που περιγράφηκαν παραπάνω είναι οι ίδιες αλλά όταν αφήνουμε το αυτόκλειστο αφήνεται να παραμείνει μέχρι η θερμοκρασία του μέσου να είναι περίπου μεταξύ 56 και 70 ° C. Την εποχή εκείνη το αίμα τοποθετείται και αναμιγνύεται μέχρις ότου το μέσον γίνει καφέ.

Σερβίρετε σε αποστειρωμένα πιάτα petri. Το χρώμα του μέσου είναι καφέ σοκολάτας.

Σφήνες τριγλυκεϊσίνης άγαρ σόγιας

Η διαδικασία παρασκευής του άγαρ είναι όπως περιγράφεται για πλάκες, με τη διαφορά ότι αντί να υπηρετούν το μέσο σε τρυβλία Petri, κατανέμεται μεταξύ 10 έως 12 ml σωλήνες με καπάκι βακελίτης πριν αυτόκαυστο.

Ακολούθως, οι σωλήνες υποβάλλονται σε αυτόκαυστο στους 121 ° C για 15 λεπτά. Όταν φεύγουν, κλίνουν με τη βοήθεια μιας στήριξης και αφήνουν τους εαυτούς τους να στερεοποιηθούν.

Οι προετοιμασμένες σφήνες σπέρνονται από την επιφάνεια και χρησιμεύουν για τη διατήρηση ορισμένων μη απαιτητικών βιώσιμων μικροοργανισμών για καθορισμένο χρόνο.

Χρησιμοποιεί

Το άγαρ σόγιας Trypticasein χρησιμοποιείται στις ακόλουθες περιπτώσεις:

-Ως βάση για την προετοιμασία του κλασικού άγαρ αίματος που χρησιμοποιείται συνήθως στα περισσότερα εργαστήρια.

-Η απομόνωση των απαιτητικών βακτηρίων.

-Παρατήρηση του μοτίβου της αιμόλυσης.

-Εκτέλεση διαγνωστικών εξετάσεων.

-Ως βάση για την προετοιμασία ειδικού άγαρ αίματος για Corynebacterium diphteriae, με κυστίνη τελλουρίου και αίμα αρνιού.

-Ως βάση για την παρασκευή άγαρ αίματος αρνιού, περισσότερη καναμυκίνη-βανκομυκίνη για την ανάπτυξη αναερόβιων, ιδιαίτερα Bacteroides sp.

-Για τη συντήρηση μη απαιτητικών στελεχών (Bacterioteca).

-Μικροβιακή αερόβια μέτρηση στη μελέτη μικροβιακών ορίων των δειγμάτων νερού, περιβάλλοντος, τροφίμων και καλλυντικών.

Σπαρμένο

Τα δείγματα μπορούν να εμβολιασθούν απευθείας στην επιφάνεια του άγαρ σόγιας τρυπτικασίνης συμπληρωμένου με αίμα ή άλλα πρόσθετα. Σπέρνεται με εξάντληση.

Ενώ οι τρυπατικές άγαρ πλάκες άγαρ σόγιας χωρίς πρόσθετα γενικά χρησιμοποιούνται σε υποκαλλιέργειες μικροβιακών στελεχών (βακτήρια ή ζύμες).

Έλεγχος ποιότητας

Έλεγχος αποστείρωσης

Για να ελεγχθεί η στειρότητα των διαφόρων μέσων που παρασκευάζονται με βάση τρυπτόνη άγαρ σόγιας συνιστάται ότι: κάθε παρτίδα προετοιμασμένη πρέπει να επωάζονται 1 ή 2 μη εμβολιασμένο πλάκες ή σωλήνες στους 37 ° C για 24 ώρες για να αποδείξει στειρότητα. Σε όλες τις περιπτώσεις, πρέπει να παραμείνει χωρίς ανάπτυξη.

Εάν διαπιστωθεί μόλυνση, ολόκληρη η παρτίδα πρέπει να απορριφθεί.

Έλεγχος ανάπτυξης

Για να μελετηθεί η σωστή λειτουργία του άγαρ σόγιας τρυπτικασίνης, μπορούν να χρησιμοποιηθούν τα ακόλουθα βακτηριακά στελέχη: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 και Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Τα στελέχη σπέρνονται και επωάζονται σε αερόβιοση στους 37 ° C για 24 ώρες.

Σε όλες τις περιπτώσεις η ανάπτυξη πρέπει να είναι ικανοποιητική.

Μπορείτε επίσης να χρησιμοποιήσετε μανιτάρια ως το συγκρότημα Candida albicans ATCC 10231 και Aspergillus niger ATCC 16404. Αναμένεται καλή ανάπτυξη και για τα δύο στελέχη.

Έλεγχος ανάπτυξης και πρότυπο αιμόλυσης τριπεκτινάσης σε άγαρ σόγιας συμπληρωμένο με αίμα

Για να επαληθευτεί η σωστή λειτουργία του άγαρ αίματος που παρασκευάζεται με αυτή τη βάση, μπορούν να χρησιμοποιηθούν τα ακόλουθα στελέχη: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 και Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Σπέρνονται και επωάζονται στους 37 ° C σε μικροαερόφιλο για 24 ώρες.

Σε όλες τις περιπτώσεις, η ανάπτυξη πρέπει να είναι ικανοποιητική, λαμβανομένου υπόψη του γεγονότος αυτού S. pyogenes βήτα-αιμόλυση (καθαρό φωτοστέφανο γύρω από την αποικία) και στα δύο στελέχη του S. pneumoniae θα πρέπει να παρατηρηθεί άλφα αιμόλυση (πράσινο φωτοστέφανο γύρω από τις αποικίες).

Αναφορές

1. Συμμετέχοντες στη Wikipedia. Τρυπτικάση Είμαι άγαρ. Wikipedia, Η ελεύθερη εγκυκλοπαίδεια. 17 Δεκεμβρίου 2018, 15:47 UTC. Διατίθεται στη διεύθυνση: https://en.wikipedia.org
2. Εργαστήρια Βρετανίας. Τυρκίνη άγαρ σόγιας. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Τρίπτυχο σόγιας. Διατίθεται στη διεύθυνση: foodsafety.neogen.com
4. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. (2009). Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Αργεντινή Πανamericana S.A Σύνταξη.
5. BD Laboratories Τρυπτικάση Είμαι Άγαρ. 2014. Διατίθεται στη διεύθυνση: .bd.com