Θεραπεία αίματος με άγαρ, χρήσεις και προετοιμασία

Το άγαρ αίματος είναι ένα εμπλουτισμένο στερεό μέσο, ​​διαφορικό αλλά όχι επιλεκτικό. Χρησιμοποιείται για την ανάκτηση και ανάπτυξη μιας μεγάλης ποικιλίας μικροοργανισμών από κλινικά δείγματα ή υποκαλλιέργειες.

Για την σπορά των περισσότερων κλινικών δειγμάτων που λαμβάνονται στο εργαστήριο πρέπει να περιλαμβάνεται κλασικό άγαρ αίματος. εκτός από τα δείγματα κοπράνων όπου δεν είναι χρήσιμο, εκτός εάν έχουν προετοιμαστεί με ορισμένες τροποποιήσεις.

Αυτό το μέσο καλλιέργειας βασικά αποτελείται από άγαρ εμπλουτισμένης βάσης και αίμα 5%. Η βάση του άγαρ μπορεί να ποικίλει ανάλογα με τις ανάγκες, αλλά κυρίως θα αποτελείται από πεπτόνες, αμινοξέα, βιταμίνες, εκχύλισμα κρέατος, χλωριούχο νάτριο, άγαρ, μεταξύ άλλων.

Όσον αφορά το αίμα, απαιτείται συνήθως να έρχεται σε επαφή με ένα βιοτέριο για να αποκτάται αίμα από ζώα, όπως τα πρόβατα, το κουνέλι ή το άλογο. Ωστόσο, αυτό δεν είναι πάντα εφικτό και μερικές φορές χρησιμοποιείται ανθρώπινο αίμα.

Το μέσο άγαρ αίματος μπορεί να παρασκευαστεί στο εργαστήριο ή μπορεί να αγοραστεί έτοιμο για εταιρείες που είναι αφιερωμένες σε αυτό. Η παρασκευή αυτού του μέσου είναι ένα από τα πιο ευαίσθητα, οποιαδήποτε απροσεξία στην παρασκευή του θα έχει ως αποτέλεσμα μια μολυσμένη παρτίδα.

Αυτός είναι ο λόγος για τον οποίο πρέπει να ληφθούν όλες οι πιθανές προφυλάξεις και τελικά να γίνει έλεγχος ποιότητας με επώαση σε πλάκα 37 ° C 1 για κάθε 100 που παρασκευάζεται.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
• 2 Χρήσεις
  • 2.1 Επιλογή του τύπου αίματος
  • 2.2 Επιλογή τύπου βάσης άγαρ
  • 2.3 Χρήσεις του άγαρ αίματος σύμφωνα με το μέσο βάσης που χρησιμοποιήθηκε για την παρασκευή του
• 3 Προετοιμασία
  • 3.1 Ζυγίστε και διαλύστε
  • 3.2 Αποστειρώστε
  • 3.3 Συσσωμάτωση του αίματος
  • 3.4 Ρίξτε μέσα στα πιάτα Petri
• 4 Αναφορές

Ίδρυμα

Έχει ήδη αναφερθεί ότι το άγαρ αίματος έχει το χαρακτηριστικό ότι είναι ένα εμπλουτισμένο, διαφορικό και μη επιλεκτικό μέσο. Το υπόγειο καθεμίας από αυτές τις ιδιότητες εξηγείται παρακάτω.

Το άγαρ αίματος είναι ένα εμπλουτισμένο μέσο επειδή έχει σαν κύριο πρόσθετο 5-10% αίμα σε βάση άγαρ. Και οι δύο ενώσεις περιέχουν πολλά θρεπτικά συστατικά και αυτή η ιδιότητα επιτρέπει στα περισσότερα καλλιεργητικά βακτήρια να αναπτυχθούν σε αυτό.

Αυτή η ανάπτυξη συμβαίνει χωρίς περιορισμούς. για το λόγο αυτό δεν είναι επιλεκτική. Ωστόσο, εάν προστίθενται ενώσεις σε αυτό το μέσο που εμποδίζουν την ανάπτυξη ορισμένων μικροοργανισμών και ευνοούν την ανάπτυξη άλλων, γίνεται επιλεκτική. Αυτό συμβαίνει εάν προστίθενται ορισμένα είδη αντιβιοτικών ή αντιμυκητιασικών ουσιών.

Ομοίως, το άγαρ αίματος είναι ένα διαφορικό μέσο, ​​καθώς επιτρέπει τη διάκριση 3 τύπων βακτηρίων: βήτα-αιμολυτικό, άλφα-αιμολυτικό και γ-αιμολυτικό..

Βήτα-αιμολυτικές είναι αυτά που έχουν την ικανότητα να λύουν ή να σπάσει τελείως ερυθρών αιμοσφαιρίων, σχηματίζοντας ένα διαυγές φωτοστέφανο γύρω από τις αποικίες, έτσι παράγουν αιμόλυση ή ß -hemólisis και μικροοργανισμούς SS ονομάζονται β-αιμολυτικός.

Παραδείγματα β-αιμολυτικών βακτηρίων είναι Streptococcus pyogenes και Streptococcus agalactiae.

Άλφα-αιμολυτικές εκτελούν μια μερική αιμόλυση, όπου η αιμοσφαιρίνη οξειδούται προς μεθαιμοσφαιρίνη, δημιουργώντας ένα πρασινωπό χρώμα γύρω από τις αποικίες. Αυτό το φαινόμενο είναι γνωστό ως αιμόλυση α ή α -hemólisis και τα βακτήρια έχουν ταξινομηθεί ως α - αιμολυτική.

Παράδειγμα α-αιμολυτικών βακτηρίων είναι Streptococcus pneumoniae και Streptococcus της ομάδας viridans.

Τέλος, υπάρχουν τα βακτήρια που ονομάζονται γ-αιμολυτικά ή μη αιμολυτικά. Αυτά αναπτύσσονται στο άγαρ χωρίς να προκαλούν αλλαγές σε αυτό, ένα αποτέλεσμα γνωστό ως γ-αιμόλυση, και οι μικροοργανισμοί είναι γ-αιμολυτικό.

Παράδειγμα γ-αιμολυτικών βακτηρίων: μερικά στελέχη Streptococcus της ομάδας D (Streptococcus bovis και Enterococcus faecalis).

Χρησιμοποιεί

Το μέσο καλλιέργειας αίματος άγαρ είναι ένα από τα συνηθέστερα χρησιμοποιούμενα στο εργαστήριο μικροβιολογίας.

Μεταξύ μικροοργανισμοί ικανά να αναπτύσσονται στο μέσο αίμα άγαρ είναι: αυστηρή αερόβια βακτήρια, προαιρετικά, μικροαερόφιλο, αναερόβια, Gram θετικά ή κατά Gram αρνητικά βακτηρίδια ταχέως αναπτυσσόμενη ή βραδέως αναπτυσσόμενο.

Ορισμένα βακτήρια που είναι απαιτητικά ή ενοχλητικά από τη θρεπτική άποψη, καθώς και μύκητες και ζυμομύκητες, επίσης αυξάνονται. Παρομοίως, είναι χρήσιμο να υποκαλλιεργούνται ή να ενεργοποιούνται εκ νέου στελέχη τα οποία είναι πολύ ασθενή μεταβολικά.

Ωστόσο, η επιλογή της βάσης άγαρ αίματος και θα ποικίλει ανάλογα με τον μικροοργανισμό πιθανό ύποπτο ανακάμψει και χρήση που θα δώσει στην πλάκα (καλλιέργειας ή αντιβιογράμματος).

Επιλογή τύπου αίματος

Το αίμα μπορεί να είναι αρνί, κουνέλι, άλογο ή άνθρωπος.

Το πιο συνιστώμενο είναι το αίμα του αρνιού, με μερικές εξαιρέσεις. Για παράδειγμα, για να απομονωθούν είδη Haemophilus, όπου το αίμα συνιστάται άλογο ή κουνέλι, αφού το αίμα προβάτου κατέχει ένζυμα που αναστέλλουν τον παράγοντα V.

Το λιγότερο συνιστάται είναι ο άνθρωπος, ωστόσο είναι το πιο χρησιμοποιημένο, ίσως επειδή είναι το πιο εύκολο να αποκτηθεί. 

Το αίμα πρέπει να απινιδώνεται, να λαμβάνεται χωρίς οποιοδήποτε πρόσθετο και από υγιή ζώα. Για τη χρήση του ανθρώπινου αίματος πρέπει να ληφθούν υπόψη διάφοροι παράγοντες:

Εάν το αίμα προέρχεται από άτομα που έχουν υποστεί βακτηριακές λοιμώξεις, θα έχουν συγκεκριμένα αντισώματα. Υπό αυτές τις συνθήκες, η ανάπτυξη ορισμένων βακτηρίων είναι πιθανό να ανασταλεί.

Εάν προέρχεται από την τράπεζα αίματος, περιέχει κιτρικό άλας και είναι πιθανό ότι ορισμένα βακτηρίδια δεν αναπτύσσονται στην παρουσία του. Από την άλλη πλευρά, εάν το αίμα προέρχεται από ασθενείς που λαμβάνουν αντιβιοτικά, μπορεί να ανασταλεί η ανάπτυξη ευαίσθητων βακτηρίων.

Και αν το αίμα προέρχεται από ένα διαβητικό άτομο, η περίσσεια γλυκόζης παρεμβαίνει στη σωστή ανάπτυξη αιμολυτικών μοτίβων.

Επιλογή τύπου βάσης άγαρ

Το άγαρ βάσης που χρησιμοποιείται για την παρασκευή του άγαρ αίματος μπορεί να είναι πολύ ευρύ. Μεταξύ αυτών είναι: θρεπτικό άγαρ, άγαρ καρδιά έγχυσης εγκεφάλου, άγαρ θρυπτικάσης σόγιας, άγαρ Mueller Hinton, άγαρ Thayer Martin, Columbia άγαρ, άγαρ Brucella, άγαρ Campylobacter, κ.λπ..

Χρήσεις του άγαρ αίματος σύμφωνα με το μέσο βάσης που χρησιμοποιήθηκε για την παρασκευή του

Θρεπτικό άγαρ

Αυτή η βάση είναι η λιγότερο χρησιμοποιημένη, επειδή πάνω της θα αναπτυχθούν κυρίως μη απαιτητικά βακτηρίδια, όπως τα εντερικά βακίλλια, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, μεταξύ άλλων. Δεν συνιστάται η απομόνωση του Streptococcus.

Άγαρ έγχυσης εγκεφάλου καρδιάς (BHI)

Είναι ένα από τα πιο χρησιμοποιημένα ως βάση του άγαρ αίματος, επειδή έχει τα απαραίτητα θρεπτικά συστατικά για την ανάπτυξη των περισσότερων βακτηριδίων, συμπεριλαμβανομένων Streptococcus sp και άλλα απαιτητικά βακτηρίδια. Αν και δεν είναι σκόπιμο να παρατηρούνται πρότυπα αιμόλυσης.

Το αίμα των αρνιών χρησιμοποιείται συνήθως με αυτή τη βάση.

Μπορούν επίσης να παρασκευαστούν παραλλαγές άγαρ αίματος, όπου προστίθενται άλλες ενώσεις για την απομόνωση ορισμένων μικροοργανισμών. Για παράδειγμα, άγαρ έγχυσης καρδιάς εγκεφάλου συμπληρωμένο με αίμα κουνελιού, κυστίνη και γλυκόζη, χρησιμεύει για την απομόνωση Francisella tularensis.

Ενώ, με την τερυρίτη κυστίνης είναι χρήσιμη για την απομόνωση του Corynebacterium diphteriae. Μπορείτε να χρησιμοποιήσετε ανθρώπινο ή αρνί αίμα.

Με την πρώτη η βήτα-αιμόλυση θα μοιάζει με ένα στενό φωτοστέφανο, ενώ με το δεύτερο το φωτοστέφανο θα είναι πολύ ευρύτερο.

Επίσης, αυτή η βάση με βακιτρακίνη, άμυλο αραβοσίτου, αίμα αλόγου και άλλα συμπληρώματα εμπλουτισμού (isovitalex), χρησιμοποιείται για απομόνωση του γένους Haemophilus sp από αναπνευστικά δείγματα.

Επίσης, εάν προστεθεί το συνδυασμό των αντιβιοτικών χλωραμφαινικόλη - γενταμυκίνη ή πενικιλίνη - στρεπτομυκίνη αίμα αλόγου, είναι ιδανικό για απομόνωση παθογόνων μυκήτων απαιτητική, ακόμη και ανώτερη απόδοση σε άγαρ γλυκόζης Sabouraud. Ιδιαίτερα, είναι χρήσιμη στην απομόνωση των Histoplasma capsulatum.

Τυποποιητική σόγια

Αυτή η βάση είναι η συνιστώμενη για καλύτερη παρατήρηση του προτύπου της αιμόλυσης και των επιδόσεων των διαγνωστικών εξετάσεων, όπως τα ταξώματα της οπτοκίνης και της βακιτρακίνης. Είναι το κλασικό άγαρ αίματος που χρησιμοποιείται συστηματικά.

Με αυτή τη βάση μπορείτε επίσης να προετοιμάσετε το ειδικό άγαρ αίματος για Corynebacterium diphteriae, με κυστίνη τελλουρίου και αίμα αρνιού.

Ομοίως, ο συνδυασμός αυτού του άγαρ με αίμα αρνιού συν καναμυκίνη-βανκομυκίνη είναι ιδανικός για την ανάπτυξη αναερόβιων, ιδιαίτερα Bacteroides sp.

Άγαρ Müeller Hinton

Αυτή η βάση συμπληρωμένη με αίμα χρησιμοποιείται για την εκτέλεση του αντιβιογράμματος απαιτητικών μικροοργανισμών, όπως π.χ. Streptococcus sp.

Είναι επίσης χρήσιμο για την απομόνωση των βακτηρίων όπως Legionella pneumophila.

Άγαρ Thayer Martin

Αυτό το μέσο είναι ιδανικό ως βάση για το άγαρ αίματος όταν υπάρχει υπόνοια για το γένος Neisseria, ιδιαίτερα Neisseria meningitidis, από τότε N. gonorrhoeae δεν αναπτύσσεται σε άγαρ αίματος.

Χρησιμεύει επίσης για την εκτέλεση δοκιμών ευαισθησίας στο Neisseria meningitidis.

Άγαρ Κολούμπια

Αυτή η βάση είναι εξαιρετική για σπορά δειγμάτων γαστρικών βιοψιών σε αναζήτηση Helicobacter pylori.

Το μέσο παρασκευάστηκε με προσθήκη 7% απινωδογονωμένο αίμα προβάτου με αντιβιοτικά (βανκομυκίνη, τριμεθοπρίμη, αμφοτερικίνη Β και κεφσουλοδίνη) για να περιορίσει την ανάπτυξη των άλλων βακτηρίων που μπορεί να υπάρχουν.

Αυτή η ίδια βάση συμπληρωμένη με ανθρώπινο ή αρνί αίμα, ναλιδιξικό οξύ και κολιστίνη είναι χρήσιμη για απομόνωση Gardnerella vaginalis. Είναι επίσης ιδανικό για την αξιολόγηση της αντιμικροβιακής ευαισθησίας στα αντιβιοτικά του ίδιου μικροοργανισμού.

Επιπλέον, χρησιμοποιείται για την παρασκευή άγαρ αίματος για την καλλιέργεια αναερόβιων, προσθέτοντας αμινογλυκοσίδες και βανκομυκίνη.

Αυτή η βάση μας επιτρέπει να παρακολουθούμε σωστά τα πρότυπα αιμόλυσης.

Brucella Agar

Αυτό το μέσο που χρησιμοποιείται ως βάση του άγαρ αίματος μαζί με την προσθήκη βιταμίνης Κ είναι ιδανικό για την καλλιέργεια αναερόβιων βακτηρίων. Σε αυτή την περίπτωση συνιστάται η χρήση αίματος αρνιού.

Campylobacter άγαρ

άγαρ Campylobacter συμπληρωμένο με 5% αίμα προβάτου και πέντε αντιβιοτικά (κεφαλοθίνη, αμφοτερικίνη Β, τριμεθοπρίμη, πολυμυξίνη Β και βανκομυκίνη), είναι το μέσο που χρησιμοποιείται για την απομόνωση Campylobacter jejuni σε δείγματα κοπράνων.

Προετοιμασία

Κάθε εμπορικό σπίτι φέρνει στο πίσω μέρος της συσκευασίας τις οδηγίες για την προετοιμασία ενός λίτρου μέσου καλλιέργειας. Οι αντίστοιχοι υπολογισμοί μπορούν να γίνουν για να παρασκευαστεί η επιθυμητή ποσότητα, σύμφωνα με το επιλεγμένο άγαρ βάσης.

Ζυγίστε και διαλύστε

Το άγαρ βάσης έρχεται αφυδατωμένο (σκόνη), έτσι πρέπει να διαλύεται σε απεσταγμένο νερό ρυθμισμένο σε ρΗ 7,3.

Η ποσότητα που υποδεικνύεται από το επιλεγμένο άγαρ βάσης ζυγίζεται και διαλύεται στην αντίστοιχη ποσότητα νερού σε μία φιάλη, στη συνέχεια θερμαίνεται σε μέτρια θερμότητα και αναμειγνύεται με περιστροφικές κινήσεις μέχρι να διαλυθεί όλη η σκόνη..

Αποστειρώστε

Μόλις διαλυθεί, αποστειρώνεται σε αυτόκλειστο στους 121 ° C για 20 λεπτά.

Σύνολο αίματος

Κατά την έξοδο από το αυτόκλειστο αφήστε το φιάλα να κρυώσει μέχρι η θερμοκρασία να κυμαίνεται μεταξύ 40 και 50 ° C. είναι μια θερμοκρασία που υποστηρίζει το ανθρώπινο δέρμα και ταυτόχρονα το άγαρ δεν έχει ακόμη στερεοποιηθεί.

Γι 'αυτό, η φιάλη αγγίζεται με το χέρι και αν η θερμότητα είναι ανεκτή, είναι η ιδανική θερμοκρασία για να προσθέσετε την αντίστοιχη ποσότητα αποφλοιωμένου αίματος (50 ml ανά λίτρο άγαρ). Αναμείξτε απαλά για ομογενοποίηση.

Η διέλευση του συνόλου του αίματος είναι κρίσιμη, διότι αν γίνει όταν το μέσο είναι πολύ ζεστό τα ερυθρά αιμοσφαίρια θα σπάσουν και το μέσο δεν θα χρησιμεύσει για να παρατηρήσει την αιμόλυση.

Εάν προστεθεί πολύ κρύο, θα σχηματιστούν σβώλοι και η επιφάνεια του μέσου δεν θα είναι ομαλή για να κάνει σωστά το φλάουτο.

Ρίξτε σε πιάτα Petri

Σερβίρετε σε στείρα πιάτα Petri αμέσως μετά την ομογενοποίηση του αίματος. Περίπου 20 ml χύνεται σε κάθε τρυβλίο Petri. Αυτή η διαδικασία εκτελείται σε απορροφητήρα με ελαστική ροή ή κοντά στον καυστήρα.

Όταν σερβίρετε το άγαρ αίματος στα πιάτα Petri, δεν πρέπει να παραμείνουν φυσαλίδες αέρα στην επιφάνεια της πλάκας. Εάν συμβεί αυτό, η φλόγα του καυστήρα Bunsen περνά γρήγορα πάνω από την πλάκα για να τα εξαλείψει..

Οι πλάκες αφήνονται να στερεοποιηθούν και να αποθηκευτούν σε ψυγείο (2-8 ° C) ανεστραμμένη μέχρι να χρησιμοποιηθούν. Πριν από τη χρήση της πλάκας άγαρ αίματος θα πρέπει να μετριάζεται (αφήστε να πάρει τη θερμοκρασία δωματίου) για να σπαρθεί.

Οι προετοιμασμένες πλάκες διαρκούν περίπου 1 εβδομάδα.

Αναφορές

1. Μικροβιολογικές συνθήκες καλλιέργειας Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013 · 28 (2): 94-99
2. García Ρ, Paredes F, Fernández del Barrio Μ. (1994). Πρακτική κλινική μικροβιολογία. Πανεπιστήμιο του Κάντιθ, 2η έκδοση. Υπηρεσία Εκδόσεων της UCA.
3. "Άγαρ αίμα." Wikipedia, Η ελεύθερη εγκυκλοπαίδεια. 10 Δεκ 2018, 14:55 UTC. 27 Δεκεμβρίου 2018, 01: 49 el.wikipedia.org.
4. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. (2009). Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Αργεντινή Πανamericana S.A Σύνταξη.
5. CEDIVET Εργαστήριο Κτηνιατρικού Διαγνωστικού Κέντρου. Γουατεμάλα Διατίθεται στο: trensa.com.
6.  Koneman Ε, Allen S, Janda W, Schreckenberger Ρ, Winn W. (2004). Μικροβιολογική διάγνωση. (5η έκδοση). Αργεντινή, Εκδοτική Panamericana S.A..