Άλατα άγαρ και θεμέλιο μανιτόλης, προετοιμασία και χρήσεις

Το άγαρ άλατος και μαννιτόλη ή αλμυρή μαννιτόλη είναι ένα στερεό, εκλεκτικό και διαφορικό μέσο καλλιέργειας. Δημιουργήθηκε από τον Chapman για την απομόνωση των παθογόνων Gram θετικών κοκκίων, ιδιαίτερα Staphylococcus aureus.

Ωστόσο, είναι επίσης χρήσιμο να απομονωθούν Staphylococcus epidermidis, που μερικές φορές μπορεί να υπάρχει ως ευκαιριακό παθογόνο, και Staphylococcus saprophyticus, αναγνωρισμένο ουροποιητικό παθογόνο, μεταξύ άλλων ειδών.

Κάποιοι Enterococcus είναι ικανοί να αναπτυχθούν σε αυτό το μέσο, ​​καθώς και ορισμένοι Gram θετικοί σχηματιστές σπορίων bacilli.

Αυτό το μέσο είναι πολύ χρήσιμο στην ανάλυση των κλινικών δειγμάτων, αλλά χρησιμοποιείται επίσης στη μικροβιολογική μελέτη των τροφίμων και στον ποιοτικό έλεγχο των βιομηχανικών προϊόντων, όπως τα καλλυντικά, τα φάρμακα, μεταξύ άλλων..

Μαννιτόλη άγαρ άλας αποτελείται από εκχυλίσματα και πεπτονών βοδινού, τρυπτικάσης, μαννιτόλη, χλωριούχο νάτριο, ερυθρό φαινόλης και άγαρ.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
• 2 Προετοιμασία
• 3 Χρήσεις
• 4 Έλεγχος ποιότητας
• 5 Τελικές εκτιμήσεις
• 6 Αναφορές

Ίδρυμα

Το άγαρ μαννιτόλης είναι επιλεκτικό χάρη στην υψηλή συγκέντρωση αλατιού που έχει. Η αλατότητα δρα ως ανασταλτική ουσία και αποτρέπει την ανάπτυξη αρνητικών κατά Gram βακτηρίων.

Είναι επίσης διαφορά λόγω της παρουσίας υδατανθράκων μαννιτόλης και του δείκτη φαινολικού κόκκινου pH. Από αυτό, τα βακτήρια ικανά να ζυμώσουν τη μαννιτόλη παράγουν οξέα, οξυνίζουν το μέσο, ​​μετατρέποντας τις αποικίες και το μέσο κίτρινο.

Από την άλλη πλευρά, οι αποικίες που δεν ζυμώνουν τη μαννιτόλη αναπτύσσονται στο μέσο λαμβάνοντας τα θρεπτικά συστατικά που παρέχονται από τα εκχυλίσματα και τα πεπτάνα του κρέατος και της τριτεΐνης. Από εκεί τα βακτήρια εκχυλίζουν τον άνθρακα, το άζωτο, τις βιταμίνες και τα μέταλλα που είναι απαραίτητα για την ανάπτυξή τους.

Οι αποικίες σε αυτή την περίπτωση μπορεί να είναι αδύναμες ή ισχυρές ροζ και το μέσο παραμένει το ίδιο χρώμα ή αλλαγές στη φούξια.

Το άγαρ είναι η ουσία που παρέχει τη συνέπεια στο μέσο.

Προετοιμασία

Για την παρασκευή ενός λίτρου άγαρ μαννιτόλης άλατος 111 g του αφυδατωμένου μέσου του εμπορικού προτίμηση αυτοί ζυγίζονται και διαλύονται σε 1000 ml απεσταγμένου νερού, χρησιμοποιώντας ένα fiola.

Η θερμότητα εφαρμόζεται με την συχνά απομάκρυνση του μέσου για τη βελτίωση της διαδικασίας διάλυσης. Αφήστε το να βράσει για ένα λεπτό.

Τοποθετήστε τη φιάλη στο αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά.

Με τον καιρό, το φιαλίδιο απομακρύνεται από το αυτόκλειστο, αφήνεται να κατακαθίσει και σερβίρεται από 15 έως 20 ml αποστειρωμένου πιάτα Petri όταν η θερμοκρασία είναι περίπου 50 έως 55 ° C.

Αφήνεται να στερεοποιηθεί, να παραγγελθεί σε ανεστραμμένη μορφή σε πλάκες και να διατηρηθεί στο ψυγείο μέχρι τη χρήση του. Πριν από τη φύτευση ενός δείγματος, πρέπει να περιμένετε να πάρει η πλάκα την θερμοκρασία του περιβάλλοντος.

Οι πλάκες σπέρνονται με ραβδώσεις ή με σπορά στην επιφάνεια με σπάτουλα drigalski. Το τελικό ρΗ του παρασκευασθέντος μέσου θα πρέπει να είναι 7,4 ± 0,2

Το χρώμα του αφυδατωμένου μέσου είναι ελαφρώς μπεζ και το χρώμα του παρασκευασμένου μέσου είναι πορτοκαλί κόκκινο.

Χρησιμοποιεί

Λόγω της υψηλής εκλεκτικότητας του, αυτό το μέσο είναι ιδανικό για τη φύτευση δειγμάτων με μικτή χλωρίδα στην οποία κάποιος θέλει να ψάξει για την παρουσία του Staphylococcus aureus, ως κύριο παθογόνο αυτού του γένους.

Υπό αυτή την έννοια, μια από τις συχνότερες χρήσεις της είναι στη μικροβιολογική ανάλυση δειγμάτων εκβολών του φάρυγγα και ρινικών εκκρίσεων, ειδικά για την ανίχνευση ασυμπτωματικών φορέων S. aureus.

Ορισμένες χώρες έχουν εφαρμόσει αυτήν την ανάλυση ως υποχρεωτική απαίτηση για άτομα που επιθυμούν να εργαστούν ως πωλητές τροφίμων.

Αυτός ο έλεγχος εμποδίζει την πρόσληψη ατόμων που μεταφέρουν S. aureus, αποφεύγοντας έτσι τη μαζική δηλητηρίαση των τροφίμων, λόγω της κατανάλωσης τροφίμων που έχουν μολυνθεί με σταφυλοκοκκική εντεροτοξίνη.

Μπορεί επίσης να συμπεριληφθεί στη σπορά λοιμώξεων από τραύματα, καλλιέργειες αίματος, CSF, πλύση βρογχοκυψελίδων, μεταξύ άλλων..

Μαννιτόλη άγαρ άλας είναι χρήσιμη για καλλιέργειες ούρων απομονώθηκε εκ νέου αποικία από άγαρ CLED ή άγαρ αίματος που έχει αποκαλύψει Gram Gram θετικοί κόκκοι σε συστάδες.

Ισχύει επίσης στη μικροβιολογική ανάλυση των τροφίμων, του πόσιμου νερού, των εδαφών, μεταξύ άλλων εφαρμογών.

Έλεγχος ποιότητας

Μόλις παρασκευαστεί μία παρτίδα πλακών με αλατισμένο άγαρ μαννιτόλης, συνιστάται να πραγματοποιηθεί ποιοτικός έλεγχος. Τα στελέχη ελέγχου σπέρνονται για να δείξουν εάν υπάρχει ανάπτυξη ή όχι.

Ως θετικός έλεγχος, γνωστά στελέχη του Staphylococcus aureus. Πρέπει να αναπτυχθεί ικανοποιητικά αναπτύσσοντας κίτρινες αποικίες και το μέσο γίνεται επίσης το ίδιο χρώμα.

Ομοίως, είναι βολικό να συμπεριληφθεί ένα γνωστό στέλεχος του Staphylococcus epidermidis. Πρέπει να αναπτυχθεί ικανοποιητικά αναπτύσσοντας ροζ αποικίες και το μέσο παραμένει το ίδιο χρώμα ή σκουραίνει σε ένα ισχυρότερο ροζ.

Ως αρνητικός έλεγχος, χρησιμοποιούνται στελέχη που δεν πρέπει να αναπτύσσονται σε αυτό το μέσο. Για παράδειγμα, μπορείτε να φυτέψετε ένα γνωστό στέλεχος του Escherichia coli ή Klebsiella pneumoniae. Το αναμενόμενο αποτέλεσμα είναι η πλήρης αναστολή, δηλαδή, καμία ανάπτυξη.

Επιπλέον, μια πλάκα χωρίς εμβολιασμό θα πρέπει να επωάζεται. Σε αυτό δεν πρέπει να υπάρχει ανάπτυξη, καμία αλλαγή χρώματος.

Είναι σημαντικό η πλάκα να μην χρησιμοποιείται εάν υπάρχουν ενδείξεις φθοράς, όπως μόλυνση, αφυδάτωση, αποχρωματισμός, μεταξύ άλλων..

Τελικές εκτιμήσεις

Όταν χρησιμοποιείται το αλατισμένο μέσο άγαρ μανιτόλης, πρέπει να λαμβάνονται υπόψη ορισμένες σημαντικές πτυχές:

-Η απόκτηση μιας ανάπτυξης κίτρινων αποικιών δεν δείχνει ότι είναι Staphylococcus aureus. Να θυμάστε ότι ορισμένα στελέχη Enterococcus είναι σε θέση να αναπτυχθούν σε αυτό το μέσο και ζύμωση μαννιτόλη και ορισμένα Gram θετικά σπορίων που σχηματίζουν.

Επομένως, είναι σημαντικό να εκτελέσετε ένα Gram στην αποικία και μια δοκιμή καταλάσης.

-Από την άλλη πλευρά, πρέπει να θεωρηθεί ότι άλλα είδη Staphylococcus διαφέρουν από aureus Είναι επίσης ικανές να ζυμώσουν τη μαννιτόλη. Ως εκ τούτου, είναι σημαντικό να καλλιεργηθεί η αποικία σε θρεπτικό ζωμό για να ληφθεί από εκεί και να εκτελεστεί ο έλεγχος της κοαγκουλάσης.

Μεταξύ των ειδών Staphylococcus που έχουν κλινική σημασία για τη μαννιτόλη που ζυμώνει ο άνθρωπος είναι: S. aureus, S. simulans, S. capitis capitis ssp, S. capitis urealyticus ssp, S. xylosus, S. cohnii urealyticum ssp, μεταξύ άλλων.

Άλλοι μπορεί να δώσουν μια μεταβλητή αντίδραση, δηλαδή μερικές φορές θετική και μερικές φορές αρνητική. Κάποιοι είναι S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, μεταξύ άλλων.

-Δεν συνιστάται να λάβει αποικίες άμεσα μαννιτόλη άγαρ για τη δοκιμή κοαγκουλάσης επειδή η υψηλή συγκέντρωση άλατος του μέσου μπορεί να παρέμβει με το αποτέλεσμα.

-Τέλος, συνιστάται η επώαση των πλακών που έχουν σπαρθεί με αλατισμένη μαννιτόλη για έως και 48 ώρες, λόγω του γεγονότος ότι ορισμένα στελέχη S. aureus Μπορούν να ζυμώνουν αργά τη μαννιτόλη, αν και αυτό δεν είναι πολύ συχνό.

Αναφορές

1. Εργαστήρια Βρετανίας. Μαγνιτόλη αλμυρό άγαρ. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com
2. "Αλατισμένο άγαρ μαννιτόλης". Wikipedia, Η ελεύθερη εγκυκλοπαίδεια. Οκτ 31, 2018, 19:08 UTC. 17 Ιανουαρίου 2019, 20:55, διατίθεται στη διεύθυνση: en.wikipedia.org.
3. Koneman Ε, Allen S, Janda W, Schreckenberger Ρ, Winn W. (2004). Μικροβιολογική διάγνωση. (5η έκδοση). Αργεντινή, Εκδοτική Panamericana S.A..
4. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. (2009). Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Αργεντινή Πανamericana S.A Σύνταξη
5. BD Laboratories BD Mannitol Salt Agar. 2013. Διατίθεται στη διεύθυνση: bd.com.