Ίδρυμα Agar Sabouraud, προετοιμασία και χρήσεις

Το Sabouraud άγαρ, επίσης γνωστή ως άγαρ δεξτρόζης Sabouraud, είναι ένα στερεό μέσο, ​​ειδικά εμπλουτισμένο για την απομόνωση και την ανάπτυξη των μυκήτων, όπως ζύμες, μύκητες και δερματόφυτα.

Ως εκ τούτου, αυτό το μέσο δεν μπορεί να αποτύχει σε ένα εργαστήριο μικροβιολογίας για την παρουσία παθογόνων ή ευκαιριακών μυκήτων, είτε κλινικά δείγματα ή κλινικές. Παρομοίως, είναι επίσης ιδανικές για την ανάπτυξη των νηματοειδών βακτηρίων όπως Streptomyces και Nocardias. Η χρήση του είναι πολύ ευρεία, μπορεί να χρησιμοποιηθεί στην ανθρώπινη, ζωική, φυτική και βιομηχανική μυκολογία.

Αυτό το μέσο δημιουργήθηκε το 1896 από τον Raimond Sabouraud εξέχοντα δερματολόγο γιατρό, ο οποίος έγινε ένας παγκοσμίου φήμης ειδικός σε διαταραχές του τριχωτού της κεφαλής, που προκαλείται κυρίως από δερματόφυτα.

Η δημιουργία του ήταν τόσο σημαντική που έχει χρησιμοποιηθεί από τότε και συνεχίζεται σήμερα, αν και με κάποιες τροποποιήσεις.

Αν και είναι ειδικός για τους μύκητες, σε αυτό το μέσο τα βακτήρια μπορούν να αναπτυχθούν, επομένως για τα δείγματα με μικτή χλωρίδα απαιτείται η συμπερίληψη αντιβιοτικών στην παρασκευή τους και έτσι αναστέλλεται η ανάπτυξη βακτηριακής χλωρίδας που μπορεί να είναι παρούσα.

Η επιλογή του αντιβιοτικού πρέπει να γίνεται με προσοχή και λαμβάνοντας υπόψη τον τύπο του μύκητα που θέλετε να ανακτήσετε, καθώς μερικοί αναστέλλονται παρουσία ορισμένων ουσιών.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
  • 1.1 Πιο χρησιμοποιούμενοι συνδυασμοί άγαρ δεξτρόζης Sabouraud με αντιβιοτικά
• 2 Προετοιμασία
  • 2.1 Άγαρ δεξτρόζης Sabouraud 
  • 2.2 Άγαρ δεξτρόζης Sabouraud (τροποποίηση των Emmons)
  • 2,3 άγαρ δεξτρόζης Sabouraud (τροποποίηση Emmons) με χλωραμφενικόλη
  • 2.4 Άγαρ δεξτρόζης Sabouraud Emmons με κυκλοεξιμίδιο
  • 2.5 Άγαρ δεξτρόζης Sabouraud (Emmons) με χλωραμφενικόλη και κυκλοεξιμίδιο
  • 2.6 Άλλα αντιβιοτικά που μπορούν να προστεθούν
• 3 Ειδικές εκτιμήσεις
• 4 Έλεγχος ποιότητας
• 5 Χρήσεις
  • 5.1 Πρωτογενής καλλιέργεια
  • 5.2 Αθλητισμός
  • 5.3 Διατήρηση
  • 5.4 Μικροκαλλιέργειες
  • 5.5 Στην ανθρώπινη μυκολογία
  • 5.6 Μυκητολογία των ζώων
  • 5.7 Περιβαλλοντική μυκολογία
  • 5.8 Βιομηχανική μυκολογία
  • 5.9 Μυκητολογία φυτών
• 6 Αναφορές

Ίδρυμα

Το μέσο άγαρ δεξτρόζης Sabouraud είναι στην αρχική διατύπωση του είναι ασθενώς εκλεκτικό, λόγω της όξινης ρΗ του 5,6 ± 0,2, όμως ακόμα βακτήρια μπορούν να αναπτυχθούν, ειδικά σε παρατεταμένη επωάσεις.

Το μέσο περιέχει πεπτόνη καζεΐνης και παγκρεατικό ζωϊκό ιστό, που παρέχει την πηγή άνθρακα και αζώτου για την ανάπτυξη μικροοργανισμών.

Περιέχει επίσης υψηλή συγκέντρωση γλυκόζης, η οποία ενεργεί ως πηγή ενέργειας, ευνοώντας την ανάπτυξη μυκήτων σε βακτήρια. Όλα αναμιγνύονται με άγαρ-άγαρ, ένα συστατικό που παρέχει τη σωστή συνέπεια.

Επιπλέον, το άγαρ δεξτρόζης Sabouraud μπορεί να είναι επιλεκτική, αν προσθέσετε τα αντιβιοτικά.

Με αντιβιοτικά είναι ιδιαίτερα χρήσιμο σε δείγματα τραύματος, ανοιχτά έλκη ή οποιοδήποτε δείγμα στο οποίο υπάρχει υποψία για μεγάλη βακτηριακή μόλυνση.

Οι περισσότεροι συνδυασμοί του άγαρ δεξτρόζης Sabouraud με αντιβιοτικά

-Sabouraud άγαρ με χλωραμφενικόλη: ιδανικό για την ανάκτηση ζυμομύκητες και νηματοειδείς μύκητες.

-Sabouraud άγαρ με γενταμυκίνη και χλωραμφενικόλη: με αυτόν τον τρόπο μεγαλώνουν πιο νηματοειδείς μύκητες και ζυμομύκητες, και αναστέλλει ένα μεγάλο αριθμό βακτηρίων, συμπεριλαμβανομένων των Enterobacteriaceae, Pseudomonas και Staphylococcus.

-Sabouraud άγαρ με κυκλοεξιμίδιο: είναι ιδιαίτερα χρήσιμο για δείγματα από το δέρμα ή την αναπνευστική οδό, αρκεί η υποψία να είναι διμορφικοί μύκητες.

Η κυκλοεμιδίδη πρέπει να χρησιμοποιείται με προσοχή. αν και χρησιμοποιείται για την αναστολή της ανάπτυξης των μυκήτων και ζυμών περιβαλλοντικές μη παθογόνο ή ότι μπορεί να υπάρχουν ως προσμείξεις σε ένα δείγμα, επίσης αναστέλλει την ανάπτυξη ορισμένων μυκήτων όπως Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Allescheria ϋογσ, Penicillium sp και άλλους ευκαιριακούς μύκητες.

-Το άγαρ Sabouraud με χλωραμφενικόλη συν κυκλοεξιμίδιο: χρησιμοποιείται κυρίως για την απομόνωση των δερματοφυτικών και των μύκητων. Έχει το μειονέκτημα ότι εμποδίζει ορισμένα είδη ευκαιριακών μυκήτων όπως Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes ή C. νεομορφών.

-Sabouraud άγαρ με χλωραμφενικόλη, στρεπτομυκίνη, πενικιλλίνη G και κυκλοεξιμίδιο: είναι ιδανικό για εξαιρετικά δείγματα μολυσμένα με βακτηρίδια και σαπροφυτικών μυκήτων, αλλά έχει το μειονέκτημα ότι αναστέλλει την ανάπτυξη του Actinomyces και Nocardias, εκτός από τα ευκαιριακά μανιτάρια που αναφέρθηκαν παραπάνω.

Προετοιμασία

Αν έχετε τα συστατικά ξεχωριστά, μπορείτε να τα ετοιμάσετε με τον ακόλουθο τρόπο:

Άγαρ δεξτρόζης Sabouraud 

Ζυγίστε:

- 40 γρ. Δεξτρόζης

- 10 g πεπτόνης

- 15 gr άγαρ-άγαρ

- Μετρήστε 1000 ml αποσταγμένου νερού

Όλα τα συστατικά αναμιγνύονται, το ρΗ ρυθμίζεται στο 5,6. Διαλύονται οι διαλυμένες ουσίες με βρασμό, διανέμονται 20 ml του μέσου σε σωλήνες των 25 x 150 mm, χωρίς φλάντζα και με βαμβακερή κορυφή κατά προτίμηση.

Μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν και άλλα μεγέθη σωλήνων, ανάλογα με τη διαθεσιμότητα.

Αποστειρώνται σε αυτόκαυστο για 10 λεπτά σε ατμόσφαιρα πίεσης (121 ° C). Μην υπερβείτε τον χρόνο αυτόκαυστου. Κατά την έξοδο από το αυτόκλειστο, οι σωλήνες γέρνουν με στήριγμα μέχρι να στερεοποιηθούν σε κορυφή φλογών..

Ένας άλλος τρόπος είναι να διαλυθούν τα συστατικά με θέρμανση μέχρι να βράσει. Στην ίδια φιάλη του αυτοκλείστου για 10 λεπτά και κατόπιν διανείμετε 20 ml σε τρυβλία Petri.

Εάν έχετε ένα μέσο άγαρ δεξτρόζης Sabouraud που ήδη περιέχει όλα τα συστατικά, θα προχωρήσουμε παρά το ποσό που ορίζεται από το σπίτι των συναλλαγών για ένα λίτρο νερό. Τα υπόλοιπα βήματα είναι τα ίδια με αυτά που περιγράφονται παραπάνω.

Άγαρ δεξτρόζης Sabouraud (τροποποίηση του Emmons)

Ζυγίστε:

-  20 γρ. Δεξτρόζης

- 10 g πεπτόνης

-  17 gr άγαρ-άγαρ

-  Μετρήστε 1000 ml αποσταγμένου νερού

Όλα τα συστατικά αναμιγνύονται, το ρΗ ρυθμίζεται στο 6,9. Προχωρήστε με τον ίδιο τρόπο όπως στην προηγούμενη περίπτωση.

Υπάρχουν εμπορικά σπίτια που προσφέρουν μεσαία με όλα τα συστατικά. Σε αυτή την περίπτωση ζυγίστε και παρασκευάστε όπως περιγράφεται στο ένθετο.

Sabouraud δεξτρόζη άγαρ (τροποποίηση Emmons) με χλωραμφενικόλη

Απόθεμα διαλύματος χλωραμφαινικόλης

- Ζυγίστε 500 mg βάσης χλωραμφενικόλης

- Μετρήστε 100 ml 95% αιθανόλης

- Αναμίξτε

μέσο άγαρ δεξτρόζης Sabouraud (Emmons) παρασκευάζεται όπως ήδη περιγράφηκε και περαιτέρω ανά λίτρο μέσου προστίθενται 10 ml διαλύματος αποθέματος χλωραμφαινικόλη πριν αυτόκαυστο.

Άγαρ δεξτρόζης Sabouraud Emmons με κυκλοεξιμίδιο

Κυκλοεξιμιδικό διάλυμα αποθέματος

- Ζυγίζονται 5 gr κυκλοεξιμιδίου

- Μετρήστε 100 ml ακετόνης

- Αναμίξτε

μέσο άγαρ δεξτρόζης Sabouraud (Emmons) παρασκευάζεται όπως ήδη περιγράφηκε και περαιτέρω ανά λίτρο μέσου προστίθενται 10 ml διαλύματος αποθέματος κυκλοεξιμίδιο πριν αυτόκαυστο.

Sabouraud άγαρ δεξτρόζης (Emmons) με χλωραμφενικόλη και κυκλοεξιμίδιο

μέσο άγαρ δεξτρόζης Sabouraud (Emmons) παρασκευάζεται όπως ήδη περιγράφηκε και περαιτέρω ανά λίτρο μέσου προστίθενται 10 ml διαλύματος αποθέματος χλωραμφαινικόλη και 10 ml διαλύματος αποθέματος κυκλοεξιμιδίου πριν αυτόκαυστο.

Άλλα αντιβιοτικά που μπορούν να προστεθούν

20.000 έως 60.000 μονάδες πενικιλλίνης ανά λίτρο μέσου.

30 mg στρεπτομυκίνης ανά λίτρο μέσου.

Και τα δύο θα πρέπει να ενσωματωθούν μετά από το αυτόκλειστο του μέσου, ελαφρώς ψυχθέντα (50-55 ° C).

0,04 g νεομυκίνης ανά λίτρο μέσου.

0,04 g γενταμικίνης ανά λίτρο μέσου.

Ειδικές εκτιμήσεις

Για την ασφάλεια είναι προτιμώμενο φυτό αγάρ Sabouraud δεξτρόζης σε σωλήνες σφηνοειδή (κεκλιμένη κορυφής αυλακώσεως) αντί σε τρυβλία Petri, για να αποφευχθεί η διασπορά και την εισπνοή σπορίων.

Είναι σημαντικό οι σωλήνες με άγαρ Sabouraud να καλύπτονται με βαμβάκι και όχι με βιδωτό καπάκι, αφού έχει δειχθεί ότι οι ημιεναεροβικές συνθήκες αναστέλλουν τον σχηματισμό σπορίων σε μερικά στελέχη, για παράδειγμα Coccidioides immitis. Επιπλέον, οι περισσότεροι μύκητες είναι αερόβιοι.

Εάν χρησιμοποιείτε βιδωτό καπάκι, μην κλείνετε καλά.

Έλεγχος ποιότητας

Τα έτοιμα μέσα πρέπει να έχουν ποιοτικό έλεγχο για να ελέγξουν την καλή λειτουργία τους. Για το σκοπό αυτό, σπέρνονται ορισμένα στελέχη ελέγχου.

Για να Sabouraud άγαρ δεξτρόζης με μπορούν να χρησιμοποιηθούν χλωραμφενικόλη στελέχη ATCC Candida albicans, που πρέπει να έχουν άριστη ανάπτυξη. Μια άλλη πλάκα εμβολιάζεται με στελέχη της Escherichia coli, πρέπει να αναστέλλεται πλήρως.

Μία μη εμβολιασμένη πλάκα επωάζεται και δεν πρέπει να αναπτυχθεί κανένας μικροοργανισμός.

Το άγαρ δεξτρόζης Sabouraud με χλωραμφενικόλη και κυκλοεξιμίδιο μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε στελέχη του  Trichophyton mentagrophytes, πρέπει να αναπτυχθούν καλά. Μια άλλη πλάκα εμβολιάζεται με ένα στέλεχος Aspergillus flavus, στην οποία πρέπει να υπάρξει μικρή ανάπτυξη ή καμία ανάπτυξη. Επιπροσθέτως, μία μη εμβολιασμένη πλάκα επωάζεται για να επιδείξει την στειρότητα της.

Για άγαρ δεξτρόζης Sabouraud με κυκλοεξιμίδιο, στελέχη του Candida albicans, Trichophyton rubrum  o Microsporum canis, που θα πρέπει να δείχνουν καλή ανάπτυξη.

Ομοίως, ένα στέλεχος του Aspergillus flavus, παρουσιάζοντας μικρή ανάπτυξη ή μη ανάπτυξη. Τέλος επωάστε μια μη εμβολιασμένη πλάκα για έλεγχο στειρότητας.

Χρησιμοποιεί

Πρωτογενής καλλιέργεια

Το κλασικό άγαρ δεξτρόζης Sabouraud περιέχει 4 γραμμάρια δεξτρόζης και είναι εξαιρετικό ως κύριο μέσο απομόνωσης, καθώς παρουσιάζει τη χαρακτηριστική μορφολογία κάθε μύκητα.

Είναι επίσης εξαιρετική η επίδειξη της παραγωγής χρωστικών ουσιών. Ωστόσο, δεν είναι το καταλληλότερο μέσο για την παρακολούθηση της σποριάς.

Δεν συνιστάται επίσης να αναπτυχθεί Blastomyces dermatitidis, η οποία αναστέλλεται από την υψηλή συγκέντρωση της γλυκόζης που υπάρχει.

Από την άλλη πλευρά, πρέπει να ληφθούν υπόψη ορισμένες σκέψεις για καλλιέργεια.

Μερικοί μύκητες αναπτύσσονται καλύτερα σε θερμοκρασία δωματίου, όπως καλούπια, άλλοι αναπτύσσονται με επιτυχία στους 37 ° C, όπως μερικές ζύμες, ενώ άλλοι μπορούν να αναπτυχθούν σε αμφότερες τις θερμοκρασίες (διμορφικοί μύκητες).

Ως εκ τούτου, μερικές φορές είναι απαραίτητη η χρήση πολλών πλακών άγαρ Sabouraud για ένα μόνο δείγμα, διότι πραγματοποιείται συχνά εμβολιάζονται εις διπλούν για επώαση ενός πλάκα σε θερμοκρασία δωματίου και μία άλλη στους 37 ° C.

Για παράδειγμα, Sporothrix schenckii σπέρνεται σε δύο πλάκες. η μία επωάζεται σε θερμοκρασία δωματίου για να ληφθεί η φάση του καλουπιού και η άλλη επωάζεται στους 37 ° C για να ληφθεί η φάση όμοια με ζύμη, αλλά στην τελευταία αυτή είναι απαραίτητη η προσθήκη 5% αίματος στο μέσο.

Σε άλλες περιπτώσεις, όπως σε δείγματα μυκητομών, σπέρνονται δύο πλάκες Sabouraud άγαρ, μία με χλωραμφενικόλη και η άλλη με κυκλοεξιμίδιο. Ο πρώτος θα επιτρέψει την ανάπτυξη αιτιολογικών παραγόντων του mycetoma μυκητιακής προέλευσης (Eumicetoma) και του δεύτερου αιτιολογικού παράγοντα των μυκητομών βακτηριακής προέλευσης, όπως οι ακτινομύκητες..

Σπορ

Το άγαρ δεξτρόζης Sabouraud τροποποιημένο από την Emmons περιέχει 2 γραμμάρια δεξτρόζης και δεν χρησιμοποιείται μόνο για απομόνωση αλλά και για σπορίωση και συντήρηση μυκήτων.

Σε αυτό το μέσο αν μπορείτε να ανακτήσετε τα στελέχη του Blastomyces dermatitidis.

Διατήρηση

Για τη διατήρηση μυκητιακών καλλιεργειών μπορούν να αποθηκευτούν σε ψυγείο (2-8 ° C). Ο χρόνος αποθήκευσης μπορεί να κυμαίνεται από 2 έως 8 εβδομάδες. Μετά από αυτό το διάστημα πρέπει να υποκαλλιεργηθούν για να επαναλάβουν τη διαδικασία.

Μερικοί μύκητες διατηρούνται καλύτερα σε θερμοκρασία δωματίου, όπως Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum και Microsporum audounii.

Η διατήρηση του στελέχους μπορεί να επιμηκυνθεί για να αποφευχθεί ο πλειομορφισμός αν η δεξτρόζη απομακρυνθεί εντελώς από το άγαρ και εάν η ποσότητα του άγαρ στο μέσο μειωθεί για να αποφευχθεί η ξηρότητα.

Μικροκαλλιέργειες

Για την ταυτοποίηση ορισμένων νηματοειδών μυκήτων είναι απαραίτητο να διεξάγονται μικροκαλλιέργειες χρησιμοποιώντας άγαρ Sabouraud ή άλλα ειδικά μέσα για την παρατήρηση των δομών της σεξουαλικής και ασεξουαλικής αναπαραγωγής.

Στην ανθρώπινη μυκολογία

Χρησιμοποιείται κυρίως για τη διάγνωση μυκητιακών παθήσεων, ιδιαίτερα εκείνων που επηρεάζουν το δέρμα και τα εξαρτήματά του (μαλλιά και νύχια).

Τα δείγματα μπορεί να είναι εκκρίσεις, εξιδρώματα, δέρμα, τρίχα, καρφιά, πτύελα, CSF ή ούρα. Τα παθογόνα που συνήθως απομονώνονται είναι τα δερματόφυτα, οι μύκητες που προκαλούν υποδόριες και συστηματικές μυκητιακές λοιμώξεις.

Μυκητολογία των ζώων

Τα ζώα συχνά επηρεάζονται από μυκητιασικές λοιμώξεις, επομένως το άγαρ Sabouraud είναι τόσο χρήσιμο στο ζώο όσο και στην ανθρώπινη μυκολογία..

Για παράδειγμα, τα δερματοφύκη μπορούν συχνά να επηρεάσουν τα ζώα. Αυτή είναι η περίπτωση Microsporum canis var distortum, που συχνά μολύνει σκύλους, γάτες, άλογα, χοίρους και πιθήκους. Ομοίως, Microsporum gypseum μολύνει σκύλους, γάτες και βοοειδή.

Πουλιά όπως τα κοτόπουλα, τα κοκοράκια και τα κοτόπουλα επηρεάζονται από Microsporum gallinae.

Άλλα μανιτάρια, όπως Zymonema farciminosum, είναι επίσης μια αιτία ασθένειας σε ζώα, κυρίως σε άλογα, μουλάρια και γαϊδούρια, προκαλώντας σημαντική φλεγμονή στα λεμφικά αγγεία.

Sporothrix schenkii και Histoplasma capsulatum επηρεάζουν τα κατοικίδια και τα ανθρώπινα ζώα.

Περιβαλλοντική μυκολογία

Πολλοί παθογόνοι ή ευκαιριακοί μύκητες μπορούν να συγκεντρωθούν σε δεδομένο χρόνο σε ένα συγκεκριμένο περιβάλλον, ειδικά σε χειρουργεία και μονάδες εντατικής θεραπείας (ΚΕΑ) κλινικών και νοσοκομείων. Επομένως, είναι απαραίτητο να τα ελέγξουμε.

Άλλοι ευάλωτοι χώροι είναι οι βιβλιοθήκες και τα παλιά κτίρια, τα οποία μπορεί να επηρεαστούν από τη συγκέντρωση περιβαλλοντικών μυκήτων.

Σε περιβαλλοντικές μελέτες το άγαρ δεξτρόζης Sabouraud χρησιμοποιείται για την απομόνωση των μυκήτων.

Βιομηχανική μυκολογία

Το άγαρ δεξτρόζης Sabouraud δεν μπορεί να λείπει για τη μελέτη μολυσματικών μύκητων στην παραγωγή καλλυντικών, τροφίμων, ποτών, δέρματος, υφασμάτων, μεταξύ άλλων.

Μυκητολογία των φυτών

Τα φυτά υποφέρουν επίσης από ασθένειες που προκαλούνται από μύκητες, επηρεάζοντας διάφορα τμήματα του φυτού, τα οποία μπορούν να σταματήσουν ακόμη και τη συγκομιδή, προκαλώντας μεγάλες απώλειες στη γεωργία.

Αναφορές

1. Cuenca Μ, Gadea Ι, Martín Ε, Pemán J, Pontón J, Rodriguez (2006). Μικροβιολογική διάγνωση των μυκητιάσεων και μελέτες ευαισθησίας στα αντιμυκητιασικά. Συστάσεις της Ισπανικής Εταιρείας Λοιμωδών Νοσημάτων και Κλινικής Μικροβιολογίας. Διατίθεται στο: coesant-seimc.org
2. Εργαστήριο ValteK. (2009). Sabarud άγαρ δεξτρόζης με κυκλοεξιμίδιο. Διατίθεται στη διεύθυνση: andinamedica.com.
3. Navarro Ο. (2013). Κτηνιατρική μυκολογία. Εθνικό Αγροτικό Πανεπιστήμιο. Νικαράγουα.
4. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. 2009. Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Αργεντινή Πανamericana S.A Σύνταξη
5. Casas-Rincon G. Γενική Μυκολογία. 1994. 2nd Ed. Universidad Central de Venezuela, Εκδόσεις βιβλιοθήκης. Βενεζουέλα, Καράκας.