Μερίδιο:
Ταμείο βάσης δεξτρόζης Papa, προετοιμασία και χρήση
Το το άγαρ δεξτρόζης παπά είναι ένα στερεό, μη εκλεκτικό θρεπτικό μέσο καλλιέργειας. Μπορεί να αναπτυχθεί βακτηριακά και μυκητιακά είδη, αλλά η χρήση του ενδείκνυται ειδικά για την απομόνωση νηματωδών μυκήτων και ζυμών. Είναι επίσης γνωστό ως μέσο PDA από την αγγλική έκφραση Agar Dextrose Potato.
Είναι ιδιαίτερα χρήσιμο για την απομόνωση των φυτοπαθογόνων μυκήτων, δηλαδή εκείνων που επηρεάζουν τα φυτά. Για τη φυτεία των δειγμάτων από μολυσμένα φυτά, μπορούν να χρησιμοποιηθούν άλλα μέσα όπως άγαρ Sabouraud ή άγαρ μάλτας, για συνήθη χρήση, προτιμάται το άγαρ δεξτρόζης της πατάτας λόγω της μεγαλύτερης σποριοποίησης..
Χρησιμοποιείται επίσης για την καταμέτρηση μυκητιακών αποικιών σε δείγματα καλλυντικών, φαρμακευτικών και ορισμένων γαλακτοκομικών προϊόντων. Ομοίως, είναι ευνοϊκό να φυτέψουμε δείγματα αποξεσμάτων δέρματος σε αναζήτηση δερματοφυτών, τα οποία αναπτύσσονται πολύ καλά σε αυτό το μέσο, αναπτύσσοντας τις χαρακτηριστικές τους χρωστικές ουσίες.
Το μέσο δεξτρόζης της πατάτας είναι πολύ απλό και εύκολο να παρασκευαστεί στο εργαστήριο. Περιέχει, όπως υποδηλώνει το όνομα, έγχυση πατάτας, δεξτρόζη και άγαρ-άγαρ. Επιπρόσθετα μπορούν να προστεθούν ανασταλτικές ουσίες για την πρόληψη της βακτηριακής ανάπτυξης και την αύξηση της εκλεκτικότητας για μυκητιακά είδη.
Ευρετήριο
- 1 Ίδρυμα
- 2 Προετοιμασία
- 2.1 - Σπιτικό (μη εμπορικό) παρασκεύασμα άγαρ δεξτρόζης παπά
- 2.2 - Εμπορική παρασκευή άγαρ δεξτρόζης παπά
- 3 Χρήσεις
- 3.1 Διαδικασία φύτευσης δειγμάτων φυτών σε άγαρ δεξτρόζης γεωμήλων
- 3.2 Διαδικασία φύτευσης δειγμάτων ζυγαριάς δέρματος, μαλλιών ή νυχιών σε άγαρ δεξτρόζης παπά
- 3.3 Διαδικασία αναγνώρισης
- 3.4 Καταμέτρηση αποικιών
- 3.5 Διατήρηση των μυκητιακών στελεχών
- 4 Έλεγχος ποιότητας
- 5 Αναφορές
Ίδρυμα
Το άγαρ δεξτρόζης Papa είναι ένα μέσο καλλιέργειας που παρέχει τα απαραίτητα θρεπτικά στοιχεία για την ανάπτυξη νηματωδών μυκήτων και ζυμών.
Ο συνδυασμός της έγχυσης της πατάτας με τη γλυκόζη παρέχει την τέλεια πηγή ενέργειας για την ικανοποιητική ανάπτυξη των μυκήτων. Ενώ το άγαρ είναι εκείνο που παρέχει συνέπεια στο περιβάλλον.
Το μέσο μόνο δεν εμποδίζει την ανάπτυξη βακτηριδίων, επομένως είναι ένα μη εκλεκτικό μέσο. Για να το κάνετε επιλεκτικό, χρειάζεστε την προσθήκη ανασταλτικών ουσιών όπως το τρυγικό οξύ ή τα αντιβιοτικά.
Προετοιμασία
-Σπιτικό (μη εμπορικό) παρασκεύασμα άγαρ δεξτρόζης πατάτας
Πιάτα Petri
Παρασκευάζεται με τον ακόλουθο τρόπο:
Πρώτα απ 'όλα, οι πατάτες πλένονται πολύ καλά, αφαιρώντας τη βρωμιά που έχουν. Κόβονται σε λεπτές φέτες με τα πάντα και το κέλυφος. 200 γραμμάρια πατάτας ζυγίζονται και τοποθετούνται για να βράσουν σε ένα λίτρο απεσταγμένου νερού για μισή ώρα.
Αφού ο χρόνος φιλτραριστεί ή στραβώσει όλο το παρασκεύασμα μέσω γάζας.
Το λαμβανόμενο υγρό συμπληρώνεται με απεσταγμένο νερό μέχρι να φτάσει το ένα λίτρο. Στην έγχυση, προστίθενται 20 g άγαρ-άγαρ και 20 g δεξτρόζης, αναμιγνύονται καλά και αποστειρώνται σε αυτόκαυστο στους 121 ° C, στα 15 λίβρες πίεσης για 15 λεπτά.
Αφήνουμε να κρυώσει στους 50 ° C και σερβίρουμε σε αποστειρωμένα πιάτα Petri. Οι παρασκευασμένες πλάκες αποθηκεύονται σε ψυγείο.
Σφήνες
Μπορείτε επίσης να προετοιμάσετε σφήνες από άγαρ από πατάτα δεξτρόζη.
Στην περίπτωση αυτή, πριν από την αποστείρωση στο αυτόκλειστο τοποθετούνται 12 έως 15 ml του μέσου σε σωληνάρια, κατόπιν αυτοκλασματοποιούνται και αφήνουν να βρίσκονται σε ειδικά υποστηρίγματα μέχρι να στερεοποιηθούν. Αποθηκεύστε στο ψυγείο.
Το μέσο παραμένει σε ρΗ 5,6 ± 0,2, ωστόσο, μερικά εργαστήρια προσθέτουν 10% τρυγικό οξύ για να μειώσουν το ρΗ στο 3,1 ± 0,1 προκειμένου να αναστείλουν τη βακτηριακή ανάπτυξη.
Με την ίδια έννοια, άλλα εργαστήρια προτιμούν να προσθέτουν αντιβιοτικά για να είναι επιλεκτικά για την καλλιέργεια μυκήτων και για την πρόληψη της βακτηριακής ανάπτυξης.
-Εμπορική παρασκευή άγαρ δεξτρόζης πατάτας
Ζυγίζονται 39 g του εμπορικώς διαθέσιμου αφυδατωμένου μέσου και διαλύονται σε ένα λίτρο απεσταγμένου νερού. Αφήστε σε ηρεμία για 5 λεπτά.
Το μίγμα θερμαίνεται με ανάδευση συχνά μέχρι την πλήρη διάλυση του. Στη συνέχεια αποστειρώθηκε σε αυτόκαυστο στους 121 ° C για 15 λεπτά.
Μπορούν να προετοιμαστούν πλάκες ή σφήνες. Συνεχίστε όπως περιγράφεται παραπάνω.
Το ρΗ παραμένει στα 5,6 ± 0,2. Εάν είναι επιθυμητό το ρΗ 3.1, πρέπει να προστεθούν 14 κ.εκ. 20% στείρου τρυγικού οξέος πριν να χρησιμεύσουν στις πλάκες..
Το χρώμα του μη προετοιμασμένου μέσου είναι μπεζ και παρασκευάζεται είναι ελαφρύ κίτρινο με ελαφρώς θολό ή οπαλίσια εμφάνιση.
Χρησιμοποιεί
Μέθοδος για τη φύτευση δειγμάτων φυτών σε άγαρ δεξτρόζης πατάτας
-Για τα φύλλα με κηλίδες
Τα φύλλα κόβονται σε κομμάτια.
Σε γυάλινο δοχείο των 50cc με αλκοόλη 50%, τοποθετήστε τα κομμάτια των φύλλων (κομμάτια λεκιασμένα και υγιεινά), για να απολυμάνετε την επιφάνεια για 20 έως 30 δευτερόλεπτα. Τραβήξτε το αλκοόλ και προσθέστε 20% υποχλωριώδες νάτριο για 40 έως 50 δευτερόλεπτα εάν είναι λεπτά φύλλα και αυξήστε το χρόνο σε 80 δευτερόλεπτα αν είναι φλοιός και κούτσουρα.
Τραβήξτε το υποχλωριώδες νάτριο και αφαιρέστε με αποστειρωμένο κλιπ τα απολυμασμένα κομμάτια και τοποθετήστε τα στην επιφάνεια του μέσου (μέχρι 10 τεμάχια κατ 'ανώτατο όριο). Τοποθετήστε την ημερομηνία και επωάστε από 20 έως 30 ° C.
-Για φρούτα και κονδύλους
Εάν ο καρπός είναι σαρκώδης, ανοίξτε το φρούτο που προσβάλλεται από τον μύκητα και πάρτε τα κομμάτια με αποστειρωμένο νυστέρι, τόσο το άρρωστο μέρος όσο και το υγιές μέρος και το τοποθετήστε στην επιφάνεια του άγαρ.
Εάν ο καρπός είναι εσπεριδοειδές, όπως ένα λεμόνι ή ένα πορτοκάλι, θα πρέπει να ανοίξετε και να σπείρετε τους σπόρους σας.
Όταν η επιφάνεια του φρούτου επηρεάζεται και παρατηρούνται σπόρια, είναι προτιμότερο να χρησιμοποιήσετε την τριμμένη μέθοδο στην πλάκα. αυτό συνίσταται στην επαφή των σπορίων με μια σπάτουλα με τη μορφή "L" αποστειρωμένη και ψύχεται, και στη συνέχεια εκτελείται μια ζιγκ-ζαγκ σπορά 2 έως 3 φορές στο άγαρ.
-Για σπόρους
Απολυμαίνονται όπως περιγράφεται στα φύλλα και στη συνέχεια τοποθετούνται στο άγαρ.
-Για κλαδιά και μίσχους
Εκτελείται αποξήρανση του φλοιού και στη συνέχεια τα κομμάτια του υγιούς και νοσούντος τμήματος λαμβάνονται και σπέρνονται απευθείας πάνω στο άγαρ..
Οι σπαρμένες πλάκες επωάζονται σε αερόβιοση στους 20-30 ° C για 72 ώρες.
Διαδικασία για τη φύτευση δειγμάτων ζυγαριάς δέρματος, μαλλιών ή νυχιών σε άγαρ δεξτρόζης παπά
Το δείγμα πρέπει να ληφθεί με τη χρήση λεπίδας νυστέρι Νο 11, είτε για να κόψει τα μαλλιά που έχουν προσβληθεί, νιφάδες δέρματος ή νύχια σε αναζήτηση δερματόφυτων. Πριν από τη λήψη του δείγματος, η περιοχή θα πρέπει να απολυμαίνεται με 70% αλκοόλ.
-Δείγμα δέρματος
Σε αλλοιωμένες αλλοιώσεις η άκρη της βλάβης πρέπει να αποξέεται, καθώς υπάρχει πιθανότητα να βρεθεί ο μύκητας.
Σε εξιδρωματικές βλάβες το δείγμα λαμβάνεται με ξηρό ή υγρό επίχρισμα. Σπάζετε αμέσως σε άγαρ δεξτρόζης γεωμήλων ή σε άγαρ Sabouraud. Αποφύγετε τα μέσα μεταφοράς.
Μια άλλη μέθοδος δειγματοληψίας είναι μέσω της τετραγωνικής τεχνικής χαλιών των Mariat και Adan Campos. Σε αυτή την περίπτωση η πληγείσα περιοχή τρίβεται 5 φορές με ένα κομμάτι αποστειρωμένου μαλλιού για περαιτέρω καλλιέργεια.
Το δείγμα μπορεί να τοποθετηθεί απευθείας στο μέσο καλλιέργειας.
-Δείγμα τριχών
Ανάλογα με την παθολογία, το προσβεβλημένο μέρος μπορεί να αποκοπεί ή να αποκοπεί από τις ρίζες. Τοποθετήστε το δείγμα στο μέσο καλλιέργειας.
-Δείγμα νυχιών
Μπορείτε να ξύσετε ή να κόψετε ένα συγκεκριμένο μέρος του προσβεβλημένου καρφιού. Θα εξαρτηθεί από τον τύπο του τραυματισμού.
Κόψτε το δείγμα σε τεμάχια 1 mm πριν από τη σπορά για να αυξήσετε την πιθανότητα επαφής του μύκητα με το μέσο καλλιέργειας.
Διαδικασία αναγνώρισης
Οι αποικίες που λαμβάνονται στην πλάκα απομονώνονται σε σωλήνες που περιέχουν άγαρ δεξτρόζης πατάτας για να διεξαχθεί η μακροσκοπική μελέτη των αποικιών (εμφάνιση, χρώμα, συνέπεια, βαθμός ανάπτυξης)..
Η μικροσκοπική μελέτη (παρατήρηση των δομών και των σχηματισμών τους), μπορεί να γίνει με μικροκαλλιέργειες ή με άμεση παρατήρηση κάτω από το μικροσκόπιο μεταξύ των φύλλων και των ελασμάτων.
Καταμέτρηση αποικιών
Αυτό το μέσο μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για τον προσδιορισμό του φορτίου των μυκήτων και των ζυμών που υπάρχουν στα δείγματα των φυτών, στα τρόφιμα, στα καλλυντικά ή στα φάρμακα. Για το σκοπό αυτό, χρησιμοποιείται άγαρ δεξτρόζης παπά, συμπληρωμένο με αντιβιοτικά, όπως: (χλωραμφενικόλη, χλωροτετρακυκλίνη ή αμφότερα).
Ρίξτε 1 ml του δείγματος - κατά προτίμηση αραιωμένο - σε ένα αποστειρωμένο και άδειο τρυβλίο Petri, στη συνέχεια τήξτε ένα βύσμα άγαρ δεξτρόζης πατάτας και αφήστε το να κρυώσει στους 45 ° C. Χύστε το τρυβλίο Petri και περιστρέψτε μέχρι να ομογενοποιηθεί. Αφήστε το σε ηρεμία μέχρι να στερεοποιηθεί.
Επωάστε σε αερόβιοση στους 20-25 ° C (καλούπια) ή στους 30-32 ° C (ζύμη) για 5 έως 7 ημέρες ή περισσότερο, ανάλογα με τον τύπο του μύκητα που ζητείται και τον τύπο του δείγματος. Δύο πλάκες μπορούν να χρησιμοποιηθούν για επώαση και στις δύο κλίμακες θερμοκρασίας.
Διατήρηση των μυκητιακών στελεχών
Το άγαρ δεξτρόζης παπά μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να διατηρήσει βιώσιμα μυκητιακά στελέχη για αρκετά χρόνια.
Για να γίνει αυτό, ο μύκητας καλλιεργείται σε πατάτες δεξτρόζης άγαρ σφήνες και μόλις καλλιεργηθεί ο μύκητας, καλύπτεται με ορυκτέλαιο. Το λάδι πρέπει να αποστειρωθεί σε αυτόκλειστο επί 45 λεπτά και να έχει κατά προσέγγιση ιξώδες 300 έως 330 Saybolt. Το λάδι πρέπει να υπερβαίνει το άκρο της λοξοτομής κατά 1 έως 2 cm.
Έλεγχος ποιότητας
Από κάθε παρασκευασμένη παρτίδα πρέπει να ληφθούν μία ή δύο πλάκες και να επωαστούν στους 25 ° C για 48 ώρες ή στους 20 ° C για 96 ώρες. Ένας καλός έλεγχος της στειρότητας είναι αυτός στον οποίο δεν υπάρχει ανάπτυξη αποικιών.
Επίσης γνωστά ή πιστοποιημένα στελέχη ελέγχου όπως:
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Σε όλες τις περιπτώσεις αναμένεται καλή ανάπτυξη.
Αναφορές
- Εργαστήρια Βρετανίας. Παπά γλυκοζάτο άγαρ. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com
- Neogen Laboratories Άγαρ δεξτρόζης πατάτας. Διατίθεται στη διεύθυνση: foodsafety.neogen.com
- Εργαστήριο Insumolab Άγαρ δεξτρόζης πατάτας. Διατίθεται στη διεύθυνση: insumolab.cl
- Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. (2009). Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Αργεντινή.
- Casas-Rincon G. Γενική Μυκολογία. 1994. 2nd Ed. Universidad Central de Venezuela, Εκδόσεις βιβλιοθήκης. Βενεζουέλα, Καράκας.
- Aceituno Μ Εκτίμηση της μικροβιολογικής ποιότητας σκιά ματιών, Σκόνη Compact Τύπος ένα Εθνικό Εργαστήριο Παραγωγής, σύμφωνα με την Αναφορά Μέθοδο της Φαρμακοποιίας Usp 2005. Διατριβή για τον τίτλο της Φαρμακευτικής Χημείας. Πανεπιστήμιο του Σαν Κάρλος της Γουατεμάλας.
- Cuétara M. Επεξεργασία δειγμάτων επιφάνειας. Iberoamerican Mycology Magazine. 2007; σ. 1-12