Θρεπτικό υπόστρωμα άγαρ, προετοιμασία και χρήσεις

Το θρεπτικό άγαρ είναι ένα μη-εκλεκτικό και μη διαφορικό στερεό μέσο καλλιέργειας. Σε αυτό το περιβάλλον αναπτύσσονται όλα τα είδη βακτηρίων που δεν απαιτούν από τη διατροφική άποψη.

Είναι ένα απλό μέσο και, παρά το όνομά του, περιέχει χαμηλότερη θρεπτική αξία σε σύγκριση με άλλα παρόμοια μέσα, όπως άγαρ έγχυσης καρδιάς εγκεφάλου ή άγαρ σόγιας τρυπτικάσης.

Η χρησιμότητά του στο εργαστήριο είναι πολύ διαφορετική. Χρησιμοποιείται κυρίως για την υποκουλτούρα των ειδών, τη διατήρηση των στελεχών, την καταμέτρηση των αποικιών, ως βάση για την προετοιμασία του άγαρ αίματος, μεταξύ άλλων.

Παρομοίως, λόγω του ελαφρώς μπεζ χρώματος, η παραγωγή χρωστικών ουσιών που παράγονται από μερικά βακτηριακά στελέχη, όπως η πρασινωπή χρωστική του Pseudomonas aeruginosa, το κόκκινο κόκκινο πιγμέντο που παράγεται από Serratia marcescens σε θερμοκρασία δωματίου, τη χρυσή κίτρινη χρωστική του Staphylococcus aureus, μεταξύ άλλων.

Επιπλέον, είναι ένα από τα πιο οικονομικά μέσα καλλιέργειας που βρέθηκαν στην αγορά.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
• 2 Σύνθεση
• 3 Προετοιμασία
• 4 Χρήσεις
  • 4.1 Ως βάση για την παρασκευή του άγαρ αίματος
  • 4.2 Διεγείρουν τη σπορίωση των βακτηρίων που σχηματίζουν σπορία
  • 4.3 Συντήρηση του στελέχους
  • 4.4 Καταμέτρηση αποικιών
  • 4.5 Εκτέλεση διαγνωστικών δοκιμών
  • 4.6 Ανάκτηση μεσόφιλων αερόβιων αναψυχημένων αλατούχων υδάτων (Παραλίες)
• 5 Αναφορές

Ίδρυμα

Όπως αναφέρθηκε ήδη, είναι ένα πολύ απλό μέσο που βασίζεται στην παροχή θρεπτικών ουσιών για βακτηριακή ανάπτυξη χωρίς περιορισμούς και χωρίς σύνθετες αντιδράσεις για την ερμηνεία.

Καθώς το μέσο είναι ημιδιαφανές, είναι ιδανικό για την καταμέτρηση αποικιών με τη μέθοδο της σποράς από βάθος.

Σύνθεση

Συντίθεται κυρίως από εκχύλισμα κρέατος ή εκχύλισμα ζυμομυκήτων, πεπτόνες ή πέψη από παγκρεατική ζελατίνη, άγαρ-άγαρ, χλωριούχο νάτριο και απεσταγμένο νερό.

Το εκχύλισμα κρέατος ή ζύμης και πεπτονών αντιπροσωπεύει τις πηγές άνθρακα και βασικών ορυκτών (άζωτο, φώσφορο και θείο), τα οποία θα χρησιμοποιηθούν από τα βακτήρια ως πηγή ενέργειας και παράγοντες ανάπτυξης.

Ομοίως, το άγαρ-άγαρ είναι η βάση όλων των στερεών μέσων καλλιέργειας, αντικαθιστώντας τη ζελατίνη, η οποία ήταν η πρώτη ένωση βάσης που χρησιμοποιήθηκε από τον Robert Koch για να δώσει στα μέσα του στερεά συνεκτικότητα..

Το άγαρ είναι ένας πολυσακχαρίτης αποτελούμενος από γαλακτόζη, γαλακτομαννάνη, αγαρόζη και αγαρακεκτίνη. Ρυθμίζεται στους 40 ° C και τήκεται κοντά στους 100 ° C.

Από την πλευρά της, το χλωριούχο νάτριο παρέχει το μέσο με την οσμωτικότητα που απαιτείται για την ανάπτυξη βακτηριδίων.

Τέλος, το νερό χρησιμεύει για την ενυδάτωση και τη διάλυση των λυοφιλοποιημένων ενώσεων. Πρέπει να χρησιμοποιείται απεσταγμένο νερό προσαρμοσμένο στο ουδέτερο pH. Το νερό της βρύσης δεν πρέπει να χρησιμοποιείται επειδή περιέχει ασβέστιο και μαγνήσιο που μπορούν να αντιδράσουν με τα φωσφορικά άλατα στο μέσο και να σχηματίσουν αδιάλυτα άλατα.

Προετοιμασία

Για ένα λίτρο θρεπτικού άγαρ, πρέπει να ζυγίζονται 31 g του αφυδατωμένου μέσου. Τοποθετείται σε φιάλη και διαλύεται σε ένα λίτρο απεσταγμένου νερού. Μετά από 5 λεπτά ανάπαυσης, θερμαίνετε την πηγή θερμότητας και ανακατεύετε συνεχώς έως ότου βράσει για 1 ή 2 λεπτά.

Στη συνέχεια τοποθετήστε τη φιάλη σε αυτόκλειστο και αποστειρώστε στους 121 ° C για 20 λεπτά.

Στο τέλος του χρόνου, αφαιρείται από το αυτόκλειστο και σερβίρεται σε αποστειρωμένα τρυβλία Petri, χρησιμοποιώντας απορροφητήρα με ελαστική ροή ή καυστήρα Bunsen..

Εάν τα τρυβλία Petri είναι μίας χρήσης (πλαστικό), το μέσο πρέπει να διανέμεται όταν το άγαρ έχει θερμοκρασία περίπου 50 ° C, για να αποφευχθεί η παραμόρφωση τους από υπερβολική θερμότητα.

Αφήνεται να στερεοποιηθεί και να αποθηκευτεί σε ένα συγκρατητή πλάκας ανεστραμμένο και να ψυχθεί στους 2-8 ° C μέχρι να χρησιμοποιηθεί.

Οι πλάκες πρέπει να υποστούν ζύμωση πριν από τη σπορά τους. Οι θρεπτικές πλάκες άγαρ δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται εάν είναι μολυσμένες ή αφυδατωμένες.

Το ρΗ του παρασκευασθέντος μέσου πρέπει να ρυθμιστεί σε 7,3 ± 0,2.

Χρησιμοποιεί

Είναι το απλούστερο μέσο καλλιέργειας που χρησιμοποιείται στο εργαστήριο μικροβιολογίας. Η σύνθεσή του είναι εξαιρετική για την ανάπτυξη μη απαιτητικών βακτηρίων.

Οι κύριες χρήσεις του εξηγούνται παρακάτω:

Ως βάση για την παρασκευή του άγαρ αίματος

Αυτό το μέσο χρησιμοποιείται μερικές φορές ως βάση για την παρασκευή άγαρ αίματος, ωστόσο δεν είναι η πιο συνηθισμένη βάση.

Ενεργοποιήστε τη σπορίωση των βακτηρίων που σχηματίζουν σπορία

Αυτό το μέσο καλλιέργειας είναι ιδιαίτερα χρήσιμο για την διέγερση της σπορίωσης των βακτηρίων που σχηματίζουν σπορία όπως Bacillus sp.

Για να γίνει αυτό, σπέρνεται ένα στέλεχος του γένους Bacillus και επωάστηκαν για 24 ώρες στους 37 ° C σε αερόβιο. Μόλις αναπτυχθούν οι αποικίες, η πλάκα υποβάλλεται σε πίεση από τη θερμοκρασία, δηλαδή η θερμοκρασία της σόμπας αυξάνεται στους 44 ° C και αφήνεται για 24 ώρες περισσότερο ή εισάγεται σε ψυγείο για 24 ώρες.

Στο τέλος της καλλιέργειας, οι καλλιέργειες επεκτείνονται και κηλιδώνονται με χρώση Gram ή χρώση σπορίων Shaeffer-Fulton. Σε αυτά θα παρατηρηθούν τα βακίλλια με ενδοσπόρια (σπόρια μέσα στο βακίλο) και τα εξωσπόρια (σπόρια εκτός του βακίλου)..

Συντήρηση του στελέχους

Ορισμένα ερευνητικά εργαστήρια ή πανεπιστημιακά εργαστήρια υποστήριξης διδασκαλίας πρέπει να διατηρούν βιώσιμα κλινικά σημαντικά βακτηρίδια όσο το δυνατόν περισσότερο, προκειμένου να χρησιμοποιήσουν την βακτηριοθεραπεία για ερευνητική εργασία ή για την προετοιμασία διδακτικών πρακτικών. Οι μαθητές θα μάθουν να χειρίζονται και να αναγνωρίζουν αυτούς τους μικροοργανισμούς.

Το θρεπτικό άγαρ, καθώς και το άγαρ έγχυσης καρδιάς εγκεφάλου, μπορούν να χρησιμοποιηθούν για το σκοπό αυτό. Το άγαρ παρασκευάζεται, χύνεται σε σωληνάρια καλυμμένους με βακελίτη και κεκλιμένο σε βάση, με τέτοιο τρόπο ώστε το άγαρ να στερεοποιείται σχηματίζοντας ένα μπλοκ στον πυθμένα και μια λοξότμηση στην επιφάνεια (κορυφή φλογών).

Κάθε σωλήνας είναι επισημασμένος τοποθετώντας το όνομα των βακτηρίων που πρόκειται να φυτευτούν και την ημερομηνία. Στη στεφάνη κάθε φυτό θα φυτευτεί και θα επωαστεί για 24 ώρες, μόλις αναπτυχθούν οι αποικίες, οι σωλήνες αποθηκεύονται σε θερμοκρασία δωματίου.

Η βακτηριοθεραπεία πρέπει να ανανεωθεί από 1 έως 3 μήνες, για να αποφευχθεί μόλυνση και αφυδάτωση του μέσου και καθώς και ο θάνατος των βακτηριδίων.

Μόνο τα μη απαιτητικά βακτηρίδια μπορούν να διατηρηθούν με τον τρόπο αυτό.

Καταμέτρηση αποικιών

Αν και υπάρχουν εξειδικευμένα μέσα για την καταμέτρηση αποικιών, όπως το πρότυπο άγαρ, μπορεί να χρησιμοποιηθεί θρεπτικό άγαρ για το σκοπό αυτό είτε με σπορά στην επιφάνεια με σπάτουλα drigalski είτε με βάθος. Ως εκ τούτου, είναι πολύ χρήσιμο στη μικροβιολογική ανάλυση τροφίμων και νερού.

Εκτέλεση διαγνωστικών εξετάσεων

Επειδή πρόκειται για ένα μέσο που δεν περιέχει αίμα ή οποιοδήποτε άλλο πρόσθετο, είναι ιδανικό να ληφθούν αποικίες που αναπτύσσονται σε αυτό το μέσο για να εκτελεστεί η δοκιμή καταλάσης.

Παρομοίως, λόγω του διαυγούς χρώματος του, ενδείκνυται η διεξαγωγή δοκιμών οξειδάσης απευθείας σε μια περιοχή του σπόρου αγάρ, χωρίς παρεμβολή.

Ανάκτηση μεσοφιλικών αερόβιων αναψυχτικών υδάτων (Παραλίες)

Το θρεπτικό άγαρ που παρασκευάζεται με 10% θαλασσινό νερό είναι χρήσιμο για την αξιολόγηση των μεσοφιλικών αερόβιων στα θαλάσσια νερά.

Με αυτό τον τρόπο, μπορούμε να εκτιμήσουμε το επίπεδο πραγματικής μόλυνσης που έχουν τα ύδατα με αυτούς τους μικροοργανισμούς, αφού σε αυτόν τον τύπο δειγμάτων τα αποτελέσματα επικαλύπτονται όταν χρησιμοποιούνται μέσα καλλιέργειας που παρασκευάζονται με συμβατικό τρόπο.

Αυτό αποδείχθηκε από τους Cortez et αϊ. το 2013 σε ερευνητικό έγγραφο.

Αυτό εξηγείται λόγω της απότομης μεταβολής που υφίστανται τα βακτήρια όταν πηγαίνουν από υπερ-αλατούχο περιβάλλον σε περιβάλλον με χαμηλή περιεκτικότητα σε άλατα, επομένως οι μικροοργανισμοί εισέρχονται σε μια κατάσταση λήθαργου στην οποία είναι βιώσιμα αλλά όχι καλλιεργήσιμα.

Αναφορές

1. "Θρεπτικό άγαρ." Wikipedia, Η ελεύθερη εγκυκλοπαίδεια. 13 Σεπ 2016, 20:33 UTC. 29 Δεκ 2018, 21:04 el.wikipedia.org
2. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. (2009). Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Αργεντινή Πανamericana S.A Σύνταξη.
3. Koneman Ε, Allen S, Janda W, Schreckenberger Ρ, Winn W. (2004). Μικροβιολογική διάγνωση. (5η έκδοση). Αργεντινή, Εκδοτική Panamericana S.A..
4. Cortez J, Ruiz Υ, Medina L, Valbuena Ο. Επίδραση των μέσων καλλιέργειας που παρασκευάζονται με θαλασσινό νερό στους δείκτες υγείας στα θαλάσσια ύδατα των ιαματικών πηγών Chichiriviche, στο κράτος Falcón, στη Βενεζουέλα. Rev Soc Come Microbiol 2013 · 33: 122-128
5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida Μ και Cardoso Μ. Μικροβιολογική ποιότητα νερού για τη σπερματέγχυση δόσεων, για το Suinos.Cient.Agro.Amaz. 2013 · 1 (2): 42-49.
6. García Ρ, Paredes F, Fernández del Barrio Μ. (1994). Πρακτική κλινική μικροβιολογία. Πανεπιστήμιο του Κάντιθ, 2η έκδοση. Υπηρεσία Εκδόσεων της UCA.