Agar Hektoen ίδρυμα, προετοιμασία και χρήσεις



Το Hektoen άγαρ ή εντερικό Hektoen άγαρ είναι ένα στερεό, εκλεκτικό και διαφορικό μέσο καλλιέργειας. Δημιουργήθηκε στο Ινστιτούτο Hektoen από τον King και τον Metzger για την απομόνωση των εντεροπαθογόνων βακτηρίων των γενών Shigella και Salmonella..

Το μέσο αποτελείται από πρωτεόζης πεπτόνης, εκχύλισμα ζύμης, χολικά άλατα, λακτόζη, σακχαρόζη, σαλικίνη, θειοθειικό νάτριο, χλωριούχο νάτριο, κιτρικό σίδηρο, κιτρικό αμμώνιο, κυανού της βρωμοθυμόλης, οξύ φουξίνη και άγαρ. Αυτό το σκεύασμα επιτρέπει τη διαφοροποίηση των γενών Shigella και Salmonella από τα υπόλοιπα βακτηρίδια ικανά να αναπτυχθούν σε αυτό το μέσο.

Αν και υπάρχουν άλλα μέσα με την ίδια λειτουργία όπως το Hektoen agar, αυτό παρουσιάζει μεγαλύτερο πλεονέκτημα σε σύγκριση με άλλα μέσα, ειδικά όταν θέλετε να ανακτήσετε το είδος Shigella.

Τα είδη αμφοτέρων των γενών παράγουν σοβαρά γαστρεντερικά προβλήματα στους ανθρώπους λόγω της κατανάλωσης μολυσμένων τροφίμων. ως εκ τούτου η μετάδοση είναι κοπράνων - από του στόματος. Αυτός είναι ο λόγος για τον οποίο η χρήση του Hektoen agar ενδείκνυται κυρίως στη μικροβιολογική ανάλυση δειγμάτων κοπράνων και τροφίμων..

Ευρετήριο

  • 1 Ίδρυμα
  • 2 Προετοιμασία
  • 3 Χρήση
  • 4 Έλεγχος ποιότητας
  • 5 Περιορισμοί
  • 6 Αναφορές

Ίδρυμα

Το άγαρ Hektoen περιέχει πεπτόνες και εκχύλισμα ζυμομυκήτων ως πηγή θρεπτικών ουσιών, παρέχοντας τα βασικά στοιχεία για τη μικροβιακή ανάπτυξη.

Ωστόσο, έχει επίσης χολικά άλατα που δρουν αναστέλλοντας την ανάπτυξη ορισμένων βακτηριδίων, ειδικά Gram θετικά και μερικά Gram αρνητικά. Για το λόγο αυτό θεωρείται ένα επιλεκτικό μέσο.

Από την άλλη πλευρά, το Hektoen άγαρ είναι ένα διαφορικό μέσο. Αυτή η ιδιότητα παρέχεται από την παρουσία ζυμώσιμων υδατανθράκων όπως η λακτόζη, η σακχάρου και η σαλικίνη, μαζί με το σύστημα δείκτη ρΗ, που αντιπροσωπεύεται από μπλε βρωμοθυμόλης και όξινη φουκσίνη..

Όλα τα βακτηρίδια που μπορούν να αναπτυχθούν σε αυτό το μέσο και τα οποία δεν ανήκουν στο γένος Salmonella και Shigella θα αναπτύξουν αποικίες σολομού ή πορτοκαλιού με εξαίρεση το γένος Proteus. Αυτό οφείλεται στη ζύμωση ενός ή περισσοτέρων από τους υπάρχοντες υδατάνθρακες, οι οποίοι οξινίζουν το μέσο, ​​γεγονός που προκαλεί την ενεργοποίηση του δείκτη pH.

Εν τω μεταξύ, το γένος Shigella και Salmonella αδυνατούν να ζυμώσουν οποιεσδήποτε υδατανθράκων που περιέχονται, χρησιμοποιώντας μόνο πεπτόνες ως πηγή ενέργειας, η οποία αλκαλοποιείται μέσο και ως εκ τούτου οι αποικίες του είναι πράσινα-γαλαζωπό.

Επίσης σε αυτό το μέσο μπορούν να διακριθούν βακτηρίδια ικανά να σχηματίσουν υδρόθειο (άχρωμο αέριο). Το θειοθειικό νάτριο δρα ως πηγή θείου ενώ το κιτρικό σίδηρο είναι ο αποκαλυπτικός παράγοντας. Και οι δύο ενώσεις επιτρέπουν τον σχηματισμό ενός μαύρου ίζηματος σουλφιδίου σιδήρου που αποδεικνύει την αντίδραση.

Το μαύρο ίζημα στο κέντρο της αποικίας με ένα διαφανές φωτοστέφανο δίνει μια εμφάνιση ψαριού στα μάτια. Αυτό το χαρακτηριστικό δείχνει την παρουσία του γένους Salmonella.

Τέλος, το χλωριούχο νάτριο διατηρεί την ωσμωτική ισορροπία και το άγαρ δίνει την στερεή σύσταση στο μέσο.

Προετοιμασία

Ζυγίζονται 76 g του αφυδατωμένου μέσου και διαλύονται σε ένα λίτρο απεσταγμένου νερού. Ανακινήστε το μίγμα έντονα και αφήστε το να ξεκουραστεί για 10 έως 15 λεπτά. Μπορεί να θερμανθεί και να βράσει, παρέχοντας περιστροφικές κινήσεις μέχρι την πλήρη διάλυση του. Αυτό το μέσο δεν είναι αυτόκλειστο.

Όταν το μέσο φθάσει σε θερμοκρασία περίπου 45 ° C, ένας όγκος 20 ml αποχύνεται απευθείας σε στείρα τρυβλία Petri..

Το άγαρ αφήνεται να στερεοποιηθεί. Εκείνη την εποχή είναι έτοιμα για χρήση. Συνιστάται η άμεση χρήση τους. Εάν δεν είναι δυνατόν, θα πρέπει να φυλάσσονται σε ψυγείο μέχρι να χρησιμοποιηθούν.

Οι πλάκες θα πρέπει να απομακρύνονται νωρίς από το ψυγείο πριν τις φυτεύσετε για να πάρει τη θερμοκρασία δωματίου.

Το ρΗ του μέσου θα πρέπει να είναι 7,5 ± 0,2. Το χρώμα του αφυδατωμένου μέσου είναι πορφυρό και παρασκευάζεται καφέ πράσινο.

Χρήση

Η χρήση του Hektoen agar συνιστάται για την αναζήτηση βακτηρίων του γένους Shigella και Salmonella σε δείγματα κοπράνων και τροφίμων..

η ικανότητα για την απομόνωση αυτών των βακτηρίων, εάν το δείγμα προηγουμένως σε ειδικές ζωμούς, όπως σεληνικό, σεληνιώδες ζωμό κυστίνη, τετραθειονικό ζωμό, εμπλουτισμένο ουσιαστικά αυξάνοντας κ.λπ..

Το ενοφθάλμισμα πρέπει να είναι ισχυρό και η σπορά γίνεται με ραβδώσεις. Οι πλάκες επωάζονται στους 37 ° C για 24 έως 48 ώρες σε αερόβιο.

Η επώαση συνιστάται για 48 ώρες, επειδή τα χαρακτηριστικά των αποικιών είναι σαφέστερα για την ερμηνεία και τη διαφοροποίησή τους αυτή τη στιγμή.

Έλεγχος ποιότητας

Για τον έλεγχο ποιότητας σε αυτό το μέσο χρησιμοποιούνται πιστοποιημένα βακτηριακά στελέχη, όπως: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 και Shigella sonnei ATCC 25931.

Τα αναμενόμενα αποτελέσματα είναι τα εξής: Salmonella typhimurium και  Salmonella enteritidis πρέπει να αναπτύξουν γαλαζοπράσινες αποικίες με ή χωρίς μαύρο κέντρο. Ενώ το είδος Shigella θα αναπτυχθεί ως μπλε-πράσινες αποικίες.

Μπορείτε επίσης να συμπεριλάβετε τα στελέχη του Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 και Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Σε αυτές τις περιπτώσεις τα παρατηρούμενα χαρακτηριστικά είναι τα ακόλουθα: Ε. Coli και Κ. Pneumoniae Σε αυτό το μέσο θα αναπτύξουν αποικίες σολομού προς πορτοκαλί, με ένα ίζημα του ίδιου χρώματος γύρω τους. Εν τω μεταξύ, η Proteus θα αναπτύξει μπλε-πράσινες αποικίες με ή χωρίς μαύρο κέντρο.

Ενώ S. aureus και  E. faecalis θα πρέπει να παρεμποδίζεται, μερικές φορές E. faecalis καταφέρνει να αναπτυχθεί ως κίτρινες αποικίες, πολύ μικρές.

Από την άλλη πλευρά, επειδή αυτό το μέσο δεν αποστειρώνεται σε αυτόκλειστο, είναι σημαντικό να αξιολογηθεί η στειρότητα του μέσου. Συνεπώς, κάθε παρασκευασμένη παρτίδα πρέπει να επωαστεί μία έως δύο πλάκες χωρίς εμβολιασμό στους 37 ° C για 24 ώρες σε αερόβιοση.

Προφανώς αναμένεται ότι δεν υπάρχει καμία αύξηση στην πλάκα.

Περιορισμοί

-Τα είδη Proteus μπορούν να αναπτυχθούν σε αυτό το περιβάλλον και τα χαρακτηριστικά των αποικιών τους μπορεί να συγχέονται με είδη Salmonella ή Shigella. Για το λόγο αυτό, κάθε ύποπτη αποικία πρέπει να επιβεβαιωθεί με βιοχημικές εξετάσεις.

-Είναι απαραίτητο να συνοδεύει τη χρήση αυτού του μέσου με άλλα λιγότερο επιλεκτικά άγαρ, επειδή εάν ο επιθυμητός μικροοργανισμός βρίσκεται σε χαμηλές συγκεντρώσεις, μπορεί να μην αναπτυχθεί σε αυτό το μέσο.

-Μην υπερθερμαίνετε κατά την παρασκευή του, καθώς η υπερβολική θερμότητα μεταβάλλει τη σύνθεση του μέσου.

-Ασυνήθιστα οι αποικίες Salmonella που ζυμώνονται με λακτόζη μπορεί να εμφανίζονται απαρατήρητες.

Αναφορές

  1. Συμμετέχοντες στη Wikipedia. Εντερικό άγαρ Hektoen. Wikipedia, Η ελεύθερη εγκυκλοπαίδεια. 13 Μαρτίου 2019, 23:38 UTC. Διατίθεται στη διεύθυνση: .wikipedia.org / Πρόσβαση στις 16 Μαρτίου 2019.
  2. BD Laboratories BD Hektoen Εντερικό άγαρ (ΗΑ Agar). 2013. Διατίθεται στη διεύθυνση: bd.com
  3. Εργαστήρια Βρετανίας. Εντερικό άγαρ Hektoen. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Hektoen άγαρ. Διατίθεται στο: f-soria.es
  5. Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. 2η έκδοση. Διατίθεται σε: bd.com/europe