Ίδρυμα Agar Endo, προετοιμασία και χρήση

Το Endo άγαρ ή το μέσο Endo είναι ένα στερεό, διαφορικό μέσο καλλιέργειας με ορισμένο βαθμό εκλεκτικότητας. Ο αρχικός τύπος δημιουργήθηκε από την Endo το 1904 για να διαφοροποιήσει τα βακτήρια ζύμωσης της λακτόζης από μη ζυμωτικά βακτήρια. Στην αρχή σχεδιάστηκε για την απομόνωση του Salmonella typhi, αλλά αργότερα ο στόχος του μέσου στράφηκε στην αναζήτηση κολοβακτηριδίων.

Η αρχή του άγαρ Endo έχει παραμείνει, αλλά η ανάπτυξή του έχει υποστεί πολλές αλλαγές όλα αυτά τα χρόνια. Επί του παρόντος, το μέσο αποτελείται από πεπτικά πέψης του ζωικού ιστού, λακτόζη, όξινο φωσφορικό δικάλιο, θειώδες νάτριο, βασική φουξίνη και άγαρ.

Η κύρια χρήση του μέσου έχει συνδεθεί με την απομόνωση και τη διαφοροποίηση των Gram αρνητικών βακίλλων που ανήκουν στην οικογένεια Enterobacteriaceae και σε άλλες οικογένειες που βρίσκονται κοντά..

Long χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση των κολοβακτηριδίων σε δείγματα νερού, τροφίμων και γαλακτοκομικών προϊόντων, αλλά τώρα έχει μετακινηθεί χρησιμοποιώντας αυτό το μέσο για άλλες παρόμοιες λειτουργίες. Ωστόσο, ορισμένα μικροβιολογικά εργαστήρια χρησιμοποιούν αυτό το άγαρ για απομόνωση των Enterobacteriaceae από κλινικά δείγματα.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
• 2 Προετοιμασία
  • 2.1 Endo άγαρ
  • 2.2 Παραλλαγή άγαρ m-Endo
• 3 Χρήση
• 4 Έλεγχος ποιότητας
• 5 Περιορισμοί
• 6 Αναφορές

Ίδρυμα

Το endo agar περιέχει πεπτόνες που χρησιμεύουν ως πηγή αμινοξέων, αζώτου, άνθρακα και ενέργειας, που είναι απαραίτητα για την ανάπτυξη των μη απαιτητικών μικροοργανισμών.

Από την άλλη πλευρά, ο ελαφρώς επιλεκτικός χαρακτήρας του άγαρ παρέχεται με την προσθήκη θειώδους νατρίου και βασικής φουξίνης. και τα δύο συστατικά εμποδίζουν εν μέρει ή πλήρως την ανάπτυξη των περισσότερων θετικών κατά Gram βακτηρίων.

Ο διαφορικός χαρακτήρας δίδεται από την παρουσία ζυμώσιμου υδατάνθρακα, που στην περίπτωση αυτή είναι η λακτόζη και η βασική φουκσίνη, η οποία επίσης χρησιμεύει ως δείκτης του pH.

Gram-αρνητικά βακτήρια που αναπτύσσονται σε αυτό το άγαρ και είναι ικανά να ζυμώσουν τη λακτόζη θα σχηματίσουν ισχυρές ροζ αποικίες. είναι παθογνωμονική Escherichia coli το σχηματισμό σκούρων κόκκινων αποικιών με μια πράσινη μεταλλική λάμψη ιριδίζουσα. Αυτό οφείλεται στην υψηλή παραγωγή οξέων από τη ζύμωση των υδατανθράκων.

Θα πρέπει να σημειωθεί ότι το μέσο που είναι γύρω από τις αποικίες μετατρέπεται επίσης σε ένα δυνατό ροζ χρώμα. Ενώ οι μη ζυμωτικοί gram-αρνητικοί βακίλοι λακτόζης σχηματίζουν απαλές ροζ αποικίες παρόμοιες με τις μέσες ή άχρωμες.

Το όξινο φωσφορικό δι-κάλιο εξισορροπεί το ρΗ του μέσου και το άγαρ είναι το συστατικό που παρέχει την στερεά σύσταση.

Προετοιμασία

Endo Agar

Ζυγίζονται 41,5 γρ. Του αφυδατωμένου μέσου και διαλύονται σε 1 λίτρο απεσταγμένου νερού. Θερμάνετε το μείγμα αναδεύοντας συχνά μέχρι να υπάρξει ολική διάλυση του μέσου. Αποστειρώστε σε αυτόκαυστο στους 121 ° C, σε πίεση 15 lb, για 15 λεπτά.

Κατά την αφαίρεση από το αυτόκλειστο, αφήστε να κρυώσει σε θερμοκρασία περίπου 45-50 ° C, ανακινήστε το μίγμα για να ομογενοποιηθεί πριν το σερβίρετε. Ρίξτε 20 ml σε αποστειρωμένα πιάτα Petri.

Αφήστε τα πλακίδια να στερεοποιηθούν, να αναστραφούν και να αποθηκευτούν σε ένα κουτί ή να τυλιχτούν με σκοτεινό χαρτί πριν αποθηκευτούν σε ψυγείο. Είναι πολύ σημαντικό να προστατεύεται το έτοιμο μέσο από το άμεσο φως. Μια συνιστώμενη πρακτική είναι να προετοιμαστεί το ακριβές ποσό που θα χρειαστεί.

Εάν φυλάσσεται σε ψυγείο, οι πλάκες θα πρέπει να σκληρυνθούν πριν από τη χρήση.

Το ρΗ του μέσου θα πρέπει να είναι μεταξύ 7,2 έως 7,6 και το χρώμα του παρασκευασμένου μέσου είναι ανοιχτό ροζ..

Παραλλαγές άγαρ m-Endo

Μια άλλη εκδοχή του άγαρ Endo (m-Endo) ακολουθώντας την φόρμουλα του McCarthy, Delaney και Grasso, που περιέχουν περισσότερες ενώσεις και ποικίλλει με τη μορφή παρασκευάσματος.

Αυτή η παραλλαγή περιέχει: τρυπτόζης λακτόζη, πέψη ενζυματική καζεΐνη πέψη ενζύμου των ζωικών ιστών, νάτριο, φωσφορικό κάλιο διβασικό, θειώδες νάτριο, εκχύλισμα ζύμης, μονοβασικό φωσφορικό κάλιο, βασική φουξίνη, χλωριούχο δεοξυχολικό νάτριο, λαυρυλοθειικό νατρίου και άγαρ.

Σε αυτή την περίπτωση ζυγίζουμε 51 g του αφυδατωμένου μέσου και το αναστέλουμε σε 1 λίτρο απεσταγμένου νερού που περιέχει 20 ml αιθανόλης.

Θερμαίνεται ελαφρώς ενώ αναδεύεται μέχρις ότου το μέσον διαλύεται εντελώς. Μην υπερθερμαίνετε και μην αποστειρώνετε σε αυτόκλειστο. Μόλις το μίγμα είναι ομοιογενές, χρησιμεύστε σε στείρα τρυβλία Petri και αφήστε να στερεοποιηθεί.

Χρήση

Σε ορισμένες χώρες εξακολουθεί να χρησιμοποιείται για την καταμέτρηση των ολικών και κοπρανώδεις κοπράνων σε δείγματα νερού και τροφίμων, ιδιαίτερα η παρουσία Escherichia coli ως κύριο δείκτη μόλυνσης κοπράνων.

M-Endo Agar συνιστάται από την Αμερικανική Ένωση Δημόσιας Υγείας (ΑΡΗΑ) για τα προγράμματα παρακολούθησης και ελέγχου απολύμανσης και επεξεργασίας λυμάτων, καθώς και για την αξιολόγηση της ποιότητας του πόσιμου νερού.

Η πλέον χρησιμοποιούμενη μέθοδος είναι η διήθηση με μεμβράνη, μετά τον εμπλουτισμό του δείγματος με ζωμό Lauryl sulfate για 2 έως 4 ώρες.

Μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί ως υποκατάστατο για άγαρ ΕΜΒ σε μικροβιολογική ανάλυση των τροφίμων και του νερού για τα πλέον πιθανά τεχνική αριθμό (ΝΜΡ), συγκεκριμένα στην πλήρη επιβεβαιωτική φάση για να επιβεβαιώνουν την παρουσία του Ε. Coli από θολωμένους ζωμούς ΕΚ.

Έλεγχος ποιότητας

Για να αξιολογηθεί η ποιότητα της παρασκευασμένης παρτίδας άγαρ Endo, γνωστά ή πιστοποιημένα στελέχη ελέγχου σπέρνονται.

Μεταξύ των στελεχών που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για το σκοπό αυτό είναι: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 και Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Τα στελέχη σπέρνονται με εξάντληση και επωάζονται στους 37 ° C για 24 ώρες σε αερόβιο.

Τα αναμενόμενα αποτελέσματα είναι:

• Για να Escherichia coli: αποικίες έντονα κόκκινες, με μεταλλική λάμψη.
• Για να Ε. Cloacae και Κ. Pneumoniae οι αποικίες θα πρέπει να είναι ροζ βλεννοειδές.
• Στην περίπτωση του S. typhimurium, S. flexneri και Ρ. mirabilis οι αποικίες είναι συνήθως ανοιχτό ροζ ή άχρωμες.
• Τέλος, E. faecalis αναμένεται να ανασταλεί εν μέρει, επομένως η ανάπτυξή του θα πρέπει να είναι χαμηλή με πολύ μικρές αποικίες ισχυρής ροζ.

Περιορισμοί

-Το μέσο Endo έχει χαμηλή εκλεκτική ισχύ, επομένως είναι πιθανό να αναπτυχθούν ορισμένοι Gram θετικοί μικροοργανισμοί όπως ο Staphylococcus, ο Enterococcus και ακόμη και οι ζυμομύκητες.

-Άλλα βακίλλια που δεν ανήκουν στην οικογένεια Enterobacteriaceae μπορούν να αναπτυχθούν σε αυτό το μέσο, ​​όπως για παράδειγμα Pseudomonas sp και Aeromonas sp. Τα χαρακτηριστικά αυτών των στελεχών είναι άχρωμες ακανόνιστες αποικίες.

-Αυτό το μέσο παρασκευής είναι πολύ ευαίσθητο στο φως, επομένως, μια παρατεταμένη έκθεση σε αυτό επιδεινώνει το σύστημα δείκτη, προκαλώντας μη αναστρέψιμη βλάβη στο μέσο.

-Τα συστατικά του μέσου θεωρούνται καρκινογόνα, επομένως πρέπει να αποφεύγεται η άμεση επαφή.

-Το αφυδατωμένο μέσο είναι πολύ υγροσκοπικό και πρέπει να διατηρείται στον αρχικό του περιέκτη σε θερμοκρασία δωματίου, ερμητικά κλειστό και σε ξηρό περιβάλλον.

Αναφορές

1. BD Laboratories Endo Agar. 2013. Διατίθεται στη διεύθυνση: bd.com
2. Neogen Laboratories M Endo Agar. Διατίθεται στη διεύθυνση: foodsafety.neogen.com
3. "Άγαρ Έντο". Wikipedia, Η ελεύθερη εγκυκλοπαίδεια. 7 Σεπ 2017, 08:27 UTC. 28 Φεβρουαρίου 2019, 22:55. Διατίθεται σε: en.wikipedia.
4. Εργαστήριο MercK. Endo άγαρ 2019. Διατίθεται στο: merckmillipore.com
5. Τεχνικό Φυλλάδιο Εργαστηρίων. Μ-Έντο Άγκαρ LES. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: liofilchem.net