Ίδρυμα Agar EMB, προετοιμασία και χρήση



Το EMB agar είναι ένα εκλεκτικό και διαφορικό στερεό μέσο καλλιέργειας που χρησιμοποιείται για την απομόνωση των αρνητικών κατά Gram βακίλλων, κυρίως της οικογένειας Enterobacteriaceae, και άλλων μη απαιτητικών Gram αρνητικών βακίλλων. Είναι επίσης γνωστό με το ακρωνύμιο EAM, το οποίο σημαίνει μπλε εοζίνης-μεθυλενίου.

Αυτό το μέσο δημιουργήθηκε από τους Holt-Harris και Teague το 1916. Περιέχει πεπτόνη, λακτόζη, σακχαρόζη, φωσφορικό κάλιο, άγαρ, ηωσίνη, μπλε του μεθυλενίου και νερό. Είναι πολύ παρόμοιο με το άγαρ MacConkey, ειδικά αν χρησιμοποιείται EMB άγαρ τροποποιημένο από Levine, το οποίο δεν περιέχει σακχαρόζη.

Στην πραγματικότητα, κάθε εργαστήριο αποφασίζει εάν συνεργάζεται με το ένα ή το άλλο, δεδομένου ότι πληρούν την ίδια λειτουργία, αν και βιοχημικά είναι διαφορετικές.

Παρουσιάζει ακόμη και το ίδιο μειονέκτημα με το κλασικό άγαρ MacConkey όσον αφορά την παραγωγή σμήνους από το γένος Proteus. Επομένως, για να αποφύγετε αυτό το φαινόμενο, μπορείτε να αυξήσετε τη συγκέντρωση του άγαρ μέχρι 5%.

Ευρετήριο

  • 1 Ίδρυμα
    • 1.1 Επιλεκτική
    • 1.2 Διαφορική
  • 2 Προετοιμασία
  • 3 Χρήσεις
  • 4 Έλεγχος ποιότητας
  • 5 Τελικές εκτιμήσεις
  • 6 Αναφορές

Ίδρυμα

Επιλεκτική

άγαρ ΕΜΒ είναι διακριτικά επιλεκτικό επειδή περιέχει τις anilinic χρωστικές (ηωσίνη κυανού του μεθυλενίου), τα οποία δρουν ως αναστολείς, εμποδίζοντας την ανάπτυξη των περισσότερων Gram-θετικών βακτηριδίων και ορισμένων αρνητικών κατά Gram βακτηρίων απαιτητικές.

Ωστόσο, αυτό το άγαρ έχει το μειονέκτημα ότι μερικά θετικά κατά Gram βακτηρίδια μπορούν να αντισταθούν στην παρουσία των ανασταλτικών ουσιών και να αναπτυχθούν ως μικρές άχρωμες αποτυπώσιμες αποικίες, όπως Enterococcus faecalis και μερικοί Staphylococcus.

Μπορείτε επίσης να αναπτύξετε ορισμένες ζύμες, όπως Συγκρότημα Candida albicans, Θα δώσει πολύ μικρές ροζ αποικίες. Ακόμα και τα χλαμυδόσπορα μπορούν να αναπτυχθούν από αυτή τη ζύμη εάν το δείγμα σπαρεί κατά βάθος.

Διαφορικό

Επιπλέον, το άγαρ ΕΜΒ είναι επίσης ένα διαφορικό μέσο, ​​δεδομένου ότι αυτές οι χρωστικές μαζί (ηωσίνη κυανού του μεθυλενίου) έχουν την ιδιότητα να σχηματίζει ένα ίζημα σε όξινο ρΗ, έτσι χρησιμεύουν ως δείκτες της παραγωγής αυτής.

Επομένως, βακτήρια χαμηλής ζύμωσης λακτόζη ή σακχαρόζη παράγουν πορφυρές αποικίες σε 24 έως 48 ώρες. Για παράδειγμα τα γένη Klebsiella, Enterobacter και Serratia.

Αυτά τα βακτήρια που ζυμώνονται έντονα τη λακτόζη, όπως το Escherichia coli, ή σακχαρόζη, όπως Yersinia enterocolitica o Proteus penneri, σχηματίζουν ένα καταπράσινο μαύρο ίζημα, δίνοντας χαρακτηριστική μεταλλική λάμψη σε αυτά τα είδη.

Πρέπει να σημειωθεί ότι εάν χρησιμοποιείται το μέσο λεβίνης EMB (χωρίς σακχαρόζη), Yersinia enterocolitica και Proteus penneri θα παράγουν διαφανείς αποικίες.

Τα βακτήρια δεν ζυμώνουν λακτόζη ή σακχαρόζη τροφοδοτούνται από την παρουσία των πεπτονών, παρέχοντας αμινοξέα και άζωτο για την ανάπτυξη των βακτηρίων, και παράγουν διαφανή αποικίες. Για παράδειγμα, τα γένη Salmonella και Shigella, μεταξύ άλλων.

Είναι επίσης σημαντικό να σημειωθεί ότι γένος Acinetobacter μπορεί να έχει λεβάντα μπλε αποικίες, αν και δεν ζυμωτή λακτόζη, ή σακχαρόζη, αλλά έχουν την ιδιότητα να τον καθορισμό του κυανού του μεθυλενίου σε κυτταρικό τοίχωμα τους. Αυτό μπορεί να συμβεί και με άλλα οξειδωτικά βακτηρίδια.

Προετοιμασία

Το αρχικό αφυδατωμένο μέσο είναι ανοιχτό μπεζ.

Για την παρασκευή αυτού του μέσου καλλιέργειας, 36 γραμμάρια του αφυδατωμένου μέσου θα πρέπει να ζυγίζονται και να τίθενται σε εναιώρηση σε ένα φιαλίδιο που περιέχει ένα λίτρο απεσταγμένου νερού.

Αφού αφήσετε το μείγμα για 5 λεπτά σε ηρεμία, φέρτε τη φιάλη σε μια πηγή θερμότητας, ανακατεύοντας δυνατά και συνεχώς έως ότου βράσει και διαλύεται τελείως..

Στη συνέχεια, το διαλυμένο μέσο καλλιέργειας πρέπει να αποστειρωθεί χρησιμοποιώντας το αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά.

Στο τέλος του χρόνου, αφαιρείται από το αυτόκλειστο και αφήνεται να ξεκουραστεί σύντομα. Έπειτα σερβίρεται ακόμη ζεστό (45 - 50 ° C) μεταξύ 15 και 20 ml άγαρ σε κάθε στείρο τρυβλίο petri. Το μέσο θα πρέπει να είναι μπλε λακκούβας.

Μετά το σερβίρισμα οι πλάκες αφήνονται ελαφρώς ακάλυπτες έως ότου το άγαρ κρυώσει λίγο. Στη συνέχεια καλύπτονται και αφήνονται να στερεοποιηθούν τελείως. Αργότερα, παραγγέλλονται σε μια αντίστροφη θήκη πλάκας και φυλάσσονται σε ψυγείο (8 ° C) μέχρι να χρησιμοποιηθούν.

Αυτή η διαδικασία εκτελείται κατά προτίμηση σε απορροφητήρα με ελαστική ροή ή μπροστά από τον καυστήρα Bunsen για να αποφευχθεί η μόλυνση.

Είναι σημαντικό να έχετε κατά νου ότι κάθε εμπορικός οίκος θα υποδείξει την ποσότητα που θα ζυγιστεί για την προετοιμασία του μέσου καλλιέργειας.

Το τελικό ρΗ του μέσου θα πρέπει να είναι 7,2 ± 0,2

Χρησιμοποιεί

Αυτό το μέσο χρησιμοποιείται για να σπείρουν τα ούρα και τα κόπρανα ή οποιοδήποτε είδος των κλινικών δειγμάτων, ειδικά αν υποψιάζονται την παρουσία απαιτητικών Gram αρνητικών βακτηριδίων όπως βάκιλλοι που ανήκουν στην οικογένεια Enterobacteriaceae, η οποία αναπτύσσεται πολύ καλά σε αυτό το μέσο.

Τα εντεροπαθογόνα βακτηρίδια των γενών Shigella και Salmonella διακρίνονται από τις άχρωμες ή ελαφρώς πορτοκαλί αποικίες τους.

Άλλες μη ζυμωτικές βακίλλες λακτόζης επίσης αναπτύσσονται, όπως Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, μεταξύ άλλων..

Ομοίως, αυτό το μέσο είναι πολύ χρήσιμο στη μικροβιολογική ανάλυση τροφίμων και νερού, δεδομένου ότι είναι ιδανικό για την πλήρη επιβεβαιωτική φάση του προσδιορισμού των κολοβακτηριδίων, δηλαδή για την επιβεβαίωση της παρουσίας Ε. Coli από τους θολωμένους ζωμούς EC, από την τεχνική του πιό πιθανού αριθμού (NMP).

Έλεγχος ποιότητας

Για να επιβεβαιωθεί ότι το πρόσφατα καλλιεργημένο μέσο καλλιέργειας λειτουργεί καλά, τα στελέχη ελέγχου μπορούν να φυτευτούν για να παρατηρήσουν τα χαρακτηριστικά των αποικιών και να επαληθεύσουν ότι δίνουν όπως αναμένεται.

Γι 'αυτό, τα στελέχη της ATCC ή καλά αναγνωρισμένα στελέχη του Ε. Coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa και κάποια Gram-θετικά βακτήρια, όπως S. aureus.

Αυτό αναμένεται Ε. Coli Δημιουργήστε καλά αναπτυγμένες μπλε-μαύρες αποικίες με πράσινη μεταλλική λάμψη. Όσο καιρό, Enterobacter aerogenes και Klebsiella sp πρέπει να δώσουν καλά αναπτυγμένες αποικίες βλεννογόνου-μαύρου.

Από τη μεριά του, Salmonella typhimurium και Shigella flexneri, πρέπει να αναπτύξουν μεγάλες αποικίες, άχρωμες ή με ελαφρώς πορτοκαλί χρώμα.

Τελικά το είδος Pseudomonas aeruginosa αναπτύσσεται ως άχρωμες αποικίες ακανόνιστου μεγέθους, ενώ τα θετικά κατά Gram βακτήρια πρέπει να αναστέλλονται πλήρως ή να αναπτύσσονται φειδωλά με πολύ μικρές αποικίες.

Τελικές εκτιμήσεις

Μερικές φορές η αποστείρωση προκαλεί τη μείωση του μπλε του μεθυλενίου, παρατηρώντας ένα πορτοκαλί μέσο. Για να οξειδωθεί το κυανό του μεθυλενίου και να ανακτηθεί το πορφυρό χρώμα, πρέπει να αναμειχθεί απαλά μέχρι να ανακτηθεί το χρώμα.

Επίσης, μετά την αποστείρωση μπορεί να καθιζάνει η βαφή, έτσι πρέπει να αναμιχθεί καλά πριν από την εξυπηρέτηση των πιάτων Petri.

Αναφορές

  1. Camacho Α, Giles Μ, Ortegón Α, Palao Μ, Serrano Β και Velázquez Ο. 2009. Τεχνικές για τη μικροβιολογική ανάλυση των τροφίμων. 2η έκδοση. Τμήμα Χημείας, UNAM. Μεξικό.
  2. Carranza C, Leon R, Falcón Ν, Neumann Α, Kromm C. Χαρακτηρισμός και διανομή στελεχών Escherichia coli Ενδεχομένως παθογόνα απομονωμένα κρέατα κοτόπουλου από πουλερικά στο Περού. Επανεξέταση. vet. Περού 2012 23 (2): 209-219. Διατίθεται στο: scielo.org.
  3. Laboratories Conda S.A. Αγάρ εωσίνης και μπλε του μεθυλενίου. 2010. Διαθέσιμο στη διεύθυνση: condalab.com
  4. Εργαστήρια Βρετανίας. Levine E.M.B (με εωσίνη και μεθύλενο μπλε) 2011. Διατίθεται στο: britanialab.com
  5. BD Laboratories BD EMB Agar (άγαρ μπλε μεθυλενίου), τροποποιημένο. 2013. Διατίθεται στη διεύθυνση: bd.com
  6. Koneman Ε, Allen S, Janda W, Schreckenberger Ρ, Winn W. (2004). Μικροβιολογική διάγνωση. (5η έκδοση). Αργεντινή, Εκδοτική Panamericana S.A..
  7. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. 2009. Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Αργεντινή Πανamericana S.A Σύνταξη