Ίδρυμα Agard CLED, χρήσεις και προετοιμασία

Το CLED άγαρ (Κυστεϊνη-λακτόζη-έλλειψη ηλεκτρολυτών) είναι ένα διαφορικό μέσο στερεάς καλλιέργειας, που χρησιμοποιείται για τη διάγνωση λοιμώξεων του ουροποιητικού συστήματος. Η σύνθεση του μέσου καλλιέργειας έχει σχεδιαστεί για την καλή ανάπτυξη των παθογόνων ουρολοίμωξης και είναι ιδανική για την ποσοτικοποίηση μονάδων σχηματισμού αποικιών (CFU).

Το μέσο καλλιέργειας CLED δεν είναι εκλεκτικό, καθώς αρνητικοί κατά Gram και θετικοί κατά Gram μικροοργανισμοί μπορούν να αναπτυχθούν σε αυτό. Αλλά αυτό δεν είναι ένα πρόβλημα, δεδομένου ότι οι περισσότερες λοιμώξεις του ουροποιητικού συστήματος προκαλούνται από έναν μόνο τύπο μικροοργανισμού.

Σε περίπτωση πολυμικροβιακών λοιμώξεων μπορούν να ληφθούν 2 ή 3 διαφορετικά βακτηρίδια, αλλά είναι πολύ σπάνια και τα περισσότερα από αυτά είναι μολυσμένα δείγματα.

Μεταξύ των Gram-αρνητικών βακτηρίων που μπορούν να αναπτυχθούν σε αυτό το μέσο είναι τα βακίλλια που ανήκουν στην οικογένεια Enterobacteriaceae και άλλα εντερικά βακίλλια, τα ουροπαθογόνα που απομονώνονται συχνότερα σε δείγματα ούρων, τα ακόλουθα: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, μεταξύ άλλων.

Ομοίως, μεταξύ των θετικών κατά Gram βακτηρίων που μπορούν να αναπτυχθούν σε αυτό το μέσο είναι Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp και μπορούν ακόμη και να αναπτύξουν μαγιά, όπως και το συγκρότημα Candida albicans.

Ωστόσο, λόγω της χημικής σύνθεσης του μέσου δεν επιτρέπει την ανάπτυξη ορισμένων απαιτητικών ουρογεννητικών παθογόνων, όπως Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, μεταξύ άλλων.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυση του άγαρ CLED
• 2 Ίδρυση του άγαρ CLED (Bevis)
• 3 Χρήσεις
  • 3.1 Σπορά δειγμάτων ούρων
  • 3.2 Ερμηνεία
  • 3.3 Ταυτοποίηση
• 4 Προετοιμασία
• 5 Αναφορές

Ίδρυση του άγαρ CLED

Το μέσο καλλιέργειας CLED έχει ως εκχύλισμα κρέατος ενεργειακής πηγής, υδρόλυμα παγκρεατικής καζεΐνης και υδρόλυμα ζελατίνης. Παρέχουν τα θρεπτικά συστατικά για την ανάπτυξη μη απαιτητικών βακτηρίων.

Περιέχει επίσης κυστίνη, ένα αμινοξύ που επιτρέπει την ανάπτυξη κολοβακτηριδίων, που διακρίνεται από το μικρό του μέγεθος.

Ομοίως, η λακτόζη περιέχει ζυμώσιμο υδατάνθρακα, γι 'αυτό το μέσο αυτό είναι διαφορετικό. να είναι σε θέση να διακρίνει τα ζυμωτικά βακτήρια από τη μη ζυμωμένη λακτόζη.

Βακτηριδίων ζύμωσης γυρίστε καταστή το ρΗ του οξέος παραγωγής για την ανάπτυξη κίτρινες αποικίες, ενώ οι μη-ζυμωτικά βακτήρια δεν παράγουν αλλαγές στο περιβάλλον, λαμβάνοντας έτσι το χρώμα του αρχικού άγαρ, πράσινο.

Η αντίδραση ζύμωσης αποκαλύπτεται χάρη στην παρουσία του δείκτη pH, ο οποίος σε αυτό το μέσο είναι μπλε βρωμοθυμόλης.

Από την άλλη πλευρά, η χαμηλή συγκέντρωση ηλεκτρολύτη στο μέσο εμποδίζει την τυπική διεισδυτική ανάπτυξη του γένους Proteus, που ονομάζεται επίδραση swarming. Αυτό δημιουργεί ένα πλεονέκτημα σε σχέση με άλλα μέσα, δεδομένου ότι επιτρέπει την καταμέτρηση των UFC, ακόμη και αν υπάρχει το γένος Proteus.

Ωστόσο, η χαμηλή συγκέντρωση ηλεκτρολυτών αναστέλλει την ανάπτυξη ορισμένων ειδών του γένους Shigella, αυτό είναι ένα μειονέκτημα σε σχέση με άλλα μέσα.

Βάση άγαρ CLED (Bevis)

Υπάρχει μια παραλλαγή ή τροποποίηση αυτού του μέσου από τον Bevis, ο οποίος ενσωμάτωσε την αρχική σύνθεση φουκσινικού οξέος (δείκτης Andrade) στην αρχική σύνθεση. Λειτουργεί μαζί με το μπλε βρωμοθυμόλης για να διαφοροποιήσει τη ζύμωση από μη ζυμωτικά βακτήρια.

Η διαφορά μεταξύ του συμβατικού και του τροποποιημένου μέσου είναι το χρώμα που υιοθετείται από τις αποικίες. Στην περίπτωση της ζύμωσης λακτόζης βακτηρίων, αποικίες αναπτύξει ένα κοκκινωπό πορτοκαλί με ένα ροζ ή κόκκινο φωτοστέφανο, ενώ αζυμωτικοί είναι μπλε-γκρι.

Χρησιμοποιεί

Το άγαρ CLED χρησιμοποιείται αποκλειστικά για τη σπορά δειγμάτων ούρων. Η χρήση αυτού του μέσου είναι ιδιαίτερα συχνή στα ευρωπαϊκά εργαστήρια, ενώ στην Αμερική χρησιμοποιείται λιγότερο.

Η συλλογή του δείγματος πρέπει να πληροί ορισμένες παραμέτρους για την επίτευξη αξιόπιστων αποτελεσμάτων, όπως:

• Μη λήψη αντιβιοτικών πριν πάρετε το δείγμα.
• Κατά προτίμηση παίρνετε τα ούρα από την πρώτη ώρα του πρωινού, καθώς είναι περισσότερο συγκεντρωμένη, όταν δεν είναι δυνατή η λήψη δειγμάτων με επεμβατικές μεθόδους.
• Πλένετε σχολαστικά τα γεννητικά όργανα πριν πάρετε το δείγμα.
• Απορρίψτε την πρώτη ροή ούρησης και στη συνέχεια τοποθετήστε το δοχείο.
• Συλλέξτε μεταξύ 25 και 30 ml των ούρων σε αποστειρωμένα επισημασμένα δοχεία.
• Πάρτε αμέσως στο εργαστήριο που περιβάλλεται από πάγο.
• Πρέπει να υποβληθεί σε επεξεργασία πριν από τις 2 ώρες εκπομπής ή να ψυχθεί στους 4 ° C για μέγιστο χρονικό διάστημα 24 ωρών.

Σπορά δείγματα ούρων

Το δείγμα ούρων πρέπει να αραιωθεί 1:50.

Για αραίωση, τοποθετήστε 0,5 ml ούρων του ασθενούς και αραιώστε με 24,5 ml αποστειρωμένου φυσιολογικού διαλύματος.

Μετρήστε 0,1 ml αραιωμένων ούρων και χοίρων ανά επιφάνεια με σπάτουλα drigalski στο μέσο CLED. Αυτή είναι η μέθοδος σποράς που υποδεικνύεται για την καταμέτρηση των αποικιών. Αυτός είναι ο λόγος που χρησιμοποιείται σε δείγματα ούρων, αφού τα αποτελέσματα πρέπει να εκφράζονται σε CFU / ml.

Για ποσοτικοποίηση αυτών των αποικιών, προχωρήστε ως εξής: μετράνε αποικίες και να πολλαπλασιάζεται από την πλάκα 10 και στη συνέχεια 50. Αυτό λαμβάνει τον αριθμό των CFU / ml ούρων.

Ερμηνεία

Μετρώντας πάνω από 100.000 CFU / ml -Indica ουρολοίμωξη

Υπολογίζοντας κάτω από 1000 CFU / ml- Δεν υπάρχει μόλυνση

Μετρώντας μεταξύ 1000-10.000 CFU / ml -Διπλή, πιθανή μόλυνση, επαναλαμβανόμενη λήψη δείγματος.

Ταυτοποίηση

Οι αποικίες που αναπτύσσονται σε CLED άγαρ θα πρέπει να γίνονται ένα Gram και ανάλογα με τα μορφοτυπικά χαρακτηριστικά του μικροοργανισμού γίνεται μια ορισμένη υποκαλλιέργεια.

Για παράδειγμα, αν πρόκειται για Gram αρνητικό βακίλο, θα σπαρθεί σε άγαρ MacConkey, όπου επιβεβαιώνεται η ζύμωση ή όχι της λακτόζης. Επιπλέον, προστίθεται ένα θρεπτικό άγαρ για να εκτελεστεί η δοκιμή οξειδάσης.

Στην περίπτωση που το Gram αποκαλύπτει θετικούς Gram cocci, μπορεί να υποκαλλιεργηθεί σε άγαρ αλμυρού μαννιτόλης και σε θρεπτικό άγαρ. Στην τελευταία, πραγματοποιείται η δοκιμή καταλάσης. Τέλος, εάν παρατηρηθούν ζύμες, θα σπαρθεί σε ένα άγαρ Sabouraud.

Πολλά εργαστήρια αποφεύγουν τη χρήση του μέσου CLED και προτιμούν να χρησιμοποιούν μόνο άγαρ αίματος, MacConkey και θρεπτικό άγαρ για να σπείρουν τα δείγματα ούρων.

Προετοιμασία

Σε ένα φιαλίδιο με ένα λίτρο απεσταγμένου νερού, διαλύονται 36,2 gr κονιοποιημένου άγαρ CLED. Μετά από 5 λεπτά ανάπαυσης, ζεστάνετε το αιωρούμενο άγαρ, αναμιγνύοντας συνεχώς έως ότου βράσει για 1 λεπτό.

Στη συνέχεια αποστειρώστε στους 121 ° C για 15 λεπτά στο αυτόκλειστο. Μόλις τελειώσει ο χρόνος, αφαιρείται από το αυτόκλειστο και αφήνεται να ψυχθεί έως ότου φθάσει σε θερμοκρασία 45 ° C. Στη συνέχεια σερβίρεται μεταξύ 15 - 20 ml σε κάθε αποστειρωμένο πιάτο Petri.

Η διαδικασία για την τροφοδοσία των πιάτων πρέπει να γίνεται μέσα σε μια πλαστική μεμβράνη ή μπροστά από τον καυστήρα Bunsen για να αποφευχθεί η μόλυνση.

Τα πιάτα που σερβίρονται αφήνονται να στερεοποιηθούν, παραγγέλλονται σε έναν κάτοχο πλάκας ανεστραμμένα και αποθηκεύονται σε ψυγείο (2-8 ° C) μέχρι να χρησιμοποιηθούν.

Το τελικό ρΗ του παρασκευασθέντος μέσου θα πρέπει να είναι 7,3 ± 0,2.

Αναφορές

1. Συστάσεις για τη μικροβιολογική διάγνωση της λοίμωξης του ουροποιητικού συστήματος. chil infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Διατίθεται στο: scielo.org.
2. Panchi J. Αναγνώριση του μικροβιακού παράγοντα που προκαλεί λοιμώξεις του ουροποιητικού συστήματος σε εσωτερικούς ασθενείς που υποβάλλονται σε καθετηριασμό της ουροδόχου κύστης. 2016. Προπτυχιακές εργασίες για την υποβολή αίτησης για τίτλο πτυχίου στο Κλινικό Εργαστήριο. Τεχνικό Πανεπιστήμιο του Ambato. Εκουαδόρ.
3. Εργαστήρια Βρετανίας. Μισό CLED. Διατίθεται στο: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories Οδηγίες χρήσης, CLED Agar. 2013 Διατίθεται στη διεύθυνση: www.renylab.ind.br.
5. Cultimed Laboratories Βασικό εγχειρίδιο μικροβιολογίας. Διατίθεται στο: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado Ε, Rodriguez-Creixems Μ, Diaz MD, Vicente Τ, η επιλογή Bouza Ε Η CLED άγαρ σε συνήθη καλλιέργεια ούρων. Μια προοπτική και συγκριτική αξιολόγηση. Diagnostic Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García Ρ, Paredes F, Fernández del Barrio Μ. (1994). Πρακτική κλινική μικροβιολογία. Πανεπιστήμιο του Κάντιθ, 2η έκδοση. Υπηρεσία Εκδόσεων της UCA.