Simmons citrate άγαρ ίδρυμα, την προετοιμασία και τη χρήση

Το Simmer άγαρ κιτρικού Είναι ένα στερεό μέσο που χρησιμοποιείται ως βιοχημική δοκιμασία για τον εντοπισμό μικροοργανισμών, ιδιαίτερα των Gram-αρνητικών βακίλλων. Το αρχικό μέσο δημιουργήθηκε από τον Koser το 1923.

Το μέσο κιτρικού Koser αποτελείται από ζωμό που περιέχει φωσφορικό νάτριο, φωσφορικό αμμώνιο, φωσφορικό μονοκάλιο, θειικό μαγνήσιο και κιτρικό νάτριο..

Όπως μπορεί να φανεί, η μόνη πηγή άνθρακα του μέσου είναι το κιτρικό, και το άζωτο είναι το φωσφορικό αμμώνιο, παραλείποντας πρωτεΐνες και υδατάνθρακες για αυτά τα στοιχεία, που συνήθως υπάρχουν σε άλλα μέσα.

Επομένως, το εμβόλιο που εμβολιάστηκε σε αυτό το μέσο μπορεί να αναπαραχθεί μόνο αν είναι σε θέση να πάρει τον κιτρικό άνθρακα. Η δοκιμή ήταν θετική αν υπήρχε θολερότητα στο μέσο, ​​ωστόσο είχε το μειονέκτημα ότι θα μπορούσε να συμβεί μη ειδική θολερότητα.

Αυτό το πρόβλημα επιλύθηκε από την Simmons προσθέτοντας άγαρ και μπλε βρωμοθυμόλης στην αρχική φόρμουλα του Koser. Αν και η αρχή είναι η ίδια, ερμηνεύεται διαφορετικά.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
  • 1.1 Λειτουργία σποράς
  • 1.2 Διερμηνεία
• 2 Προετοιμασία
• 3 Χρήση
• 4 Τελικές εκτιμήσεις
  • 4.1 Εμβόλιο
  • 4.2 Τοποθέτηση
  • 4.3 Ένταση χρώματος
• 5 Αναφορές

Ίδρυμα

Μερικά βακτήρια έχουν την ικανότητα να επιβιώνουν σε απουσία ζύμωσης ή της παραγωγής γαλακτικού οξέος, που χρειάζονται για να πάρει δύναμη μέσω της χρήσης άλλων υποστρωμάτων. Σε αυτή τη δοκιμή η μόνη πηγή άνθρακα που προσφέρεται είναι το κιτρικό άλας.

Τα βακτηρίδια που είναι σε θέση να επιβιώσουν υπό αυτές τις συνθήκες μεταβολίζουν γρήγορα το κιτρικό άλας μέσω μιας εναλλακτικής λύσης στην παραδοσιακή οδό, χρησιμοποιώντας τον κύκλο του τρικαρβοξυλικού οξέος ή τον κύκλο της κιτρικής ζύμωσης.

Κιτρικό καταβολισμού από τα βακτήρια περιλαμβάνει ένα ενζυματικό μηχανισμό χωρίς την παρέμβαση του συνενζύμου Α Το ένζυμο αυτό είναι γνωστό ότι citricasa (οξαλοξικό-κιτρική λυάση) ή κιτρικό δεσμολάση. Η αντίδραση απαιτεί την παρουσία ενός δισθενούς κατιόντος, το οποίο στην περίπτωση αυτή παρέχεται από το μαγνήσιο.

Η αντίδραση παράγει οξαλοξικό οξύ και πυροσταφυλικό, το οποίο στη συνέχεια να οδηγήσει σε οργανικά οξέα σε ένα μέσο αλκαλικό ρΗ που σχηματίζεται από τη χρήση της πηγής αζώτου. Αυτά τα οργανικά οξέα χρησιμοποιούνται ως πηγή άνθρακα που παράγει ανθρακικά και δισανθρακικά άλατα, περαιτέρω αλκαλοποίηση του μέσου.

Λειτουργία σποράς

Το μέσο κιτρικού Simmons θα πρέπει να εμβολιάζεται ελαφρά στην ουρά των ψαριών χρησιμοποιώντας ευθεία βρόχο ή βελόνα και επωάζεται για 24 ώρες στους 35-37 ° C. Στο τέλος της περιόδου παρατηρούνται τα αποτελέσματα.

Η σπορά γίνεται μόνο στην επιφάνεια του άγαρ. Μην κάνετε παρακέντηση.

Ερμηνεία

Εάν το μέσο είναι το αρχικό χρώμα (πράσινο) και καμία ορατή ανάπτυξη, η δοκιμή είναι αρνητική, αλλά αν το μέσο γίνεται μπλε, υποδεικνύοντας την παρουσία αλκαλίων, η οποία ανιχνεύεται από το δείκτη ρΗ. Στην περίπτωση αυτή η δοκιμή είναι θετική.

Αυτό είναι επειδή αν τα βακτήρια χρησιμοποιούν κιτρικό άνθρακα είναι επίσης σε θέση να λάβει αζώτου από φωσφορικό αμμώνιο με το οποίο απελευθερώνει αμμωνία, αλκαλοποίηση του μέσου.

Από την άλλη πλευρά, εάν παρατηρήθηκε ανάπτυξη των βακτηρίων εντός του μέσου, αλλά καμία αλλαγή χρώματος, επίσης η δοκιμή θα πρέπει να θεωρηθεί ως θετική, διότι εάν υπάρχει ανάπτυξη σημαίνει ότι το βακτήριο ήταν σε θέση να χρησιμοποιήσει κιτρικό ως πηγή άνθρακα, αν και δεν υπάρχει αλλαγή pH αυτή τη στιγμή (μερικές φορές μπορεί να χρειαστεί).

Εάν υπάρχει αμφιβολία ως προς την ερμηνεία του τελικού χρώματος, μπορεί να συγκριθεί με ένα σωλήνα μη κινοποιημένου κιτρικού.

Προετοιμασία

Ζυγίστε 24,2 γρ. Του αφυδατωμένου μέσου για 1 λίτρο νερού. Ανακατεύουμε και αφήνουμε να σταματήσουν περίπου 5 λεπτά περίπου. Ολοκληρώστε τη διάλυση του μέσου με θέρμανση για 1 ή 2 λεπτά, αναδεύοντας συχνά.

Σερβίρετε 4 ml στους δοκιμαστικούς σωλήνες και το αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά. Μετά την έξοδο από το αυτόκλειστο, χρησιμοποιώντας ένα βραχίονα κλίσης έτσι ώστε το άγαρ στερεοποιείται σχήματος κλίση με μικρό ιστορικό και taco ή λοξότμηση.

Το τελικό ρΗ του κιτρικού μέσου είναι 6,9 (πράσινο). Αυτό το μέσο είναι πολύ ευαίσθητο στην αλλαγή του pH.

Σε pH 6 ή χαμηλότερο, το μέσο γίνεται κίτρινο. Αυτό το χρώμα δεν παρατηρείται στη δοκιμή με βακτήρια.

Και σε pH 7,6 ή παραπάνω, το μέσο αλλάζει σε έντονο μπλε της Πρωσίας.

Χρήση

Simmons άγαρ κιτρικό χρησιμοποιείται για την ταυτοποίηση ορισμένων μικροοργανισμών, κυρίως βάκιλοι που ανήκει στην οικογένεια Enterobacteriaceae και άλλων μη ζύμωση βάκιλλοι γλυκόζης.

Τελικές εκτιμήσεις

Το κιτρικό μέσο Simmons είναι ένα πολύ λεπτό τεστ, επειδή μπορούν να ληφθούν ψευδώς θετικά αποτελέσματα αν γίνουν κάποια σφάλματα.

Η φροντίδα που πρέπει να ληφθεί είναι η ακόλουθη:

Εμβόλιο

Μην κάνετε ένα πολύ παχύ ή χρεώνονται βακτηριακό εμβόλιο γιατί μπορεί να προκαλέσει μια κίτρινη χάλκινα στη θέση του σπόρου αναπτύσσεται, χωρίς να επηρεαστεί το υπόλοιπο του μισού, αλλά πιστεύω ότι δεν υπάρχει ανάπτυξη. Το ίδιο δεν σημαίνει θετικότητα της δοκιμής.

Επίσης, ένα παχύ εμβόλιο μπορεί να παραγάγει ένα ψευδώς θετικό, επειδή οι προ-σχηματισμένο οργανικό ενώσεις μέσα στα κυτταρικά τοιχώματα των βακτηρίων πεθαίνουν μπορεί να απελευθερώσει αρκετό άνθρακα και αζώτου για να μετατρέψει το δείκτη ρΗ.

Επομένως, το ιδανικό είναι να εγκαταστήσετε τη βελόνα αντί για τη λαβή πλατίνας, για να αποφύγετε τη λήψη περίσσειας υλικού.

Σπαρμένο

Από την άλλη πλευρά, όταν η μπαταρία φυτεύεται για βιοχημική ταυτοποίηση του οργανισμού σε δοκιμές λόγω, είναι σημαντικό ότι η δοκιμή του κιτρικού είναι η πρώτη που πρέπει να εμβολιάζεται, για την αποφυγή παράσυρσης πρωτεΐνης ή υδατάνθρακα άλλα μέσα.

Κάτω από αυτή την περίπτωση είναι δυνατόν να ληφθεί ένα ψευδώς θετικό, επειδή οποιαδήποτε από αυτές τις ουσίες που εισάγονται κατά λάθος θα μεταβολίζεται και θα προκαλεί αλλαγή στο pH.

Ένας άλλος τρόπος για να αποφύγετε την οπισθέλκουσα των ουσιών είναι να κάψετε καλά τη λαβή και να πάρετε νέο ενοφθάλμισμα μεταξύ μιας δοκιμής και μιας άλλης.

Θα πρέπει επίσης να είναι προσεκτικοί όταν αγγίζετε την αποικία για το εμβόλιο, θα πρέπει να αποφεύγεται λόγω της κουλτούρας άγαρ σύρετε απ 'όπου τα βακτήρια, για τους λόγους που εξηγούνται ανωτέρω.

Με αυτή την έννοια, Matsen, Sherris και Branson προτείνουμε αραίωση του ενοφθαλμίσματος σε αλατόνερο πριν ενοφθαλμισμό στη δοκιμασία του κιτρικού για να αποτραπεί η μεταφορά των άλλων πηγών άνθρακα.

Ένταση χρώματος

Πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι η ένταση του χρώματος που παράγεται όταν η δοκιμή είναι θετική μπορεί να διαφέρει ανάλογα με το εμπορικό σπίτι.

Επιπλέον, υπάρχουν μικροοργανισμοί που εξετάζονται θετικά σε 24 ώρες, αλλά υπάρχουν και άλλα στελέχη που απαιτούν 48 ώρες ή περισσότερο για να προκαλέσουν αλλαγή στο pH.

Αναφορές

1. Mac Faddin Ι. (2003). Βιοχημικές δοκιμές για την ταυτοποίηση βακτηρίων κλινικής σημασίας. 3η έκδοση. Συντάκτης Panamericana. Μπουένος Άιρες Αργεντινή.
2. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. (2009). Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Αργεντινή.
3. Koneman Ε, Allen S, Janda W, Schreckenberger Ρ, Winn W. (2004). Μικροβιολογική διάγνωση. 5η έκδοση. Editorial Panamericana S.A. Αργεντινή.
4. BD Laboratories BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: bd.com
5. Εργαστήρια Βρετανίας. Άγαρ κιτρικού Simmons. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com
6. Valtek Diagnostic Laboratories. Άγαρ κιτρικού Simmons. 2016. Διατίθεται στη διεύθυνση: andinamedica.com.