Ίδρυμα σοκολάτας Agar, χρήσεις και προετοιμασία

Το σοκολάτα άγαρ είναι ένα στερεό, εμπλουτισμένο, μη επιλεκτικό και μη διαφορικό μέσο καλλιέργειας. Χρησιμοποιείται κυρίως για την απομόνωση μικροοργανισμών που απαιτούν από τη διατροφική άποψη, αν και μπορεί να αναπτυχθεί οποιοδήποτε είδος βακτηριδίων.

Γι 'αυτό η χρησιμότητα αυξάνει ιδιαίτερα σε δείγματα σπόρων φυσιολογικά άσηπτο, όπως CSF και του αρθρικού υγρού. Αν και επίσης συμπεριλαμβάνονται εντός των μέσων επιλέξει να φύτευση πολυμικροβιακή δείγματα, αλλά σε αυτές τις περιπτώσεις είναι αναγκαία η προσθήκη αντιβιοτικών που αναστέλλουν ταυτόχρονη χλωρίδας.

Αυτό το μέσο έχει ένα χαρακτηριστικό καφέ χρώμα πολύ παρόμοιο με τη σοκολάτα, εξ ου και το όνομά του. Το παρασκεύασμα είναι πολύ παρόμοια με άγαρ αίματος, αλλά στην προκειμένη περίπτωση το αίμα πρέπει να θερμαίνεται ώστε τα ερυθρά αιμοσφαίρια ρήξη.

Η παρασκευή του, όπως το άγαρ αίματος, είναι πολύ λεπτή, καθώς είναι εύκολα μολυσμένη. Για το λόγο αυτό πολλά εργαστήρια προτιμούν να αποκτήσουν αυτό το μέσο που έχουν ήδη προετοιμαστεί από εμπορικούς οίκους που εγγυώνται την ποιότητά τους.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
• 2 Χρήσεις
  • 2.1 Άγαρ σοκολάτας παρασκευασμένο με άγαρ Columbia
  • 2.2 Άγαρ σοκολάτας παρασκευασμένο με άγαρ βάσης GC (για γονοκόκκα)
  • 2.3 Άγαρ σοκολάτας παρασκευασμένο με άγαρ Müeller Hinton
  • 2.4 Άγαρ σοκολάτας παρασκευασμένο με άγαρ Thayer Martin
• 3 Προετοιμασία
  • 3.1 Υπολογισμοί
  • 3.2 Ζυγίστε και διαλύστε
  • 3.3 Αποστειρώστε
  • 3.4 Συσσωμάτωση αίματος
  • 3.5 Ένας άλλος τρόπος για να προετοιμάσετε το άγαρ σοκολάτας χωρίς να χρησιμοποιήσετε αίμα
• 4 Έλεγχος ποιότητας
• 5 Αναφορές

Ίδρυμα

Αυτό το μέσο αποτελείται από μία βάση άγαρ πλούσια σε θρεπτικά συστατικά και θερμαίνεται αίματος. Αιμόλυση των ερυθρών αιμοσφαιρίων παρέχουν τον παράγοντα μέσα X (αιμίνη) και παράγοντα V (NAD), είναι αναγκαία για την ανάπτυξη κάποιων μικροοργανισμών όπως το γένος Haemophilus. Είναι επίσης πολύ χρήσιμο για την απομόνωση του Neisserias sp.

Όπως το άγαρ αίματος, διαφορετικά μέσα μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως άγαρ βάσης ανάλογα με την ανάγκη. Μεταξύ των μέσων που χρησιμοποιούνται είναι έγχυση εγκεφάλου καρδιάς και άγαρ σόγιας τρυπτικάσης, αν και τα συνιστώμενα είναι το άγαρ Columbia, Müeller Hinton, άγαρ GC και άγαρ Thayer Martin..

Ορισμένες παραλλαγές του άγαρ σοκολάτας περιλαμβάνουν ένα εμπλουτισμένο στο εμπόριο συμπλήρωμα που ονομάζεται Isovitalex ή Polivitex.

Αυτά τα συμπληρώματα περιέχουν βιταμίνη Β₁₂, L-γλουταμίνη, αδενίνη, γουανίνη υδροχλωρική, ρ-αμινοβενζοϊκό οξύ, δινουκλεοτίδιο νικοτιναμιδίου αδενίνης (NAD), πυροφωσφορική θειαμίνη, νιτρικό σίδηρο, υδροχλωρική θειαμίνη, υδροχλωρική κυστεΐνη, L-κυστίνη και γλυκόζη.

Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι το άγαρ σοκολάτας είναι περισσότερο εμπλουτισμένο από το άγαρ αίματος, αλλά δεν επιτρέπει την παρατήρηση των σχημάτων αιμολύσεως.

Χρησιμοποιεί

Άγαρ σοκολάτας παρασκευασμένο με άγαρ Columbia

Αυτό το θρεπτικό μέσο περιέχει πεπτιδικό κρέας που έχει υποστεί πέψη με καζεΐνη και καρδιά παγκρέατος, χωνευμένο πεπτίδιο κρέατος, χλωριούχο νάτριο, άγαρ, εκχύλισμα ζύμης και άμυλο αραβοσίτου. Είναι επίσης πλούσιο σε βιταμίνες, μέταλλα και απαραίτητα αμινοξέα.

Αυτή η βάση με θερμό αίμα είναι ιδανική για την απομόνωση βακτηρίων του γένους Neisseria. Από την άλλη πλευρά, αν προστεθεί ένα συμπλήρωμα για τη Βρουκέλα στο μέσο, ​​ο προαναφερθείς μικροοργανισμός μπορεί να απομονωθεί. Τα αποτελέσματα βελτιώνονται χρησιμοποιώντας αίμα αλόγου.

Άγαρ σοκολάτας παρασκευασμένο με άγαρ βάσης GC (για γονοκόκκα)

Αυτό το μέσο περιέχει πεπτόνες, άμυλο αραβοσίτου, μονοβασικά και διβασικά ρυθμιστικά διαλύματα, χλωριούχο νάτριο και άγαρ.

Οι περισσότεροι παρουσιάσεις άγαρ σοκολάτας εμπορικώς που παρασκευάζονται με αυτή τη βάση και περιέχουν θερμάνθηκε αίμα, αλλά ένα συνθετικό μίγμα από αιμίνη και ένα χημικό συμπλήρωμα των αυξητικών παραγόντων, βιταμίνες, ανόργανα άλατα, αμινοξέα, γλυκόζη και παράγοντα V.

Άγαρ σοκολάτας παρασκευασμένο με άγαρ Müell Hinton

Χρησιμοποιείται για τη διεξαγωγή της δοκιμής αντιμικροβιακής ευαισθησίας απαιτητικών μικροοργανισμών, όπως π.χ. Streptococcus pneumoniae χρησιμοποιώντας 5% θερμαινόμενο αίμα.

Χρησιμεύει επίσης για την πρωταρχική απομόνωση του Neisserias και του Haemophilus, αλλά στη συγκεκριμένη περίπτωση της απομόνωσης Haemophilus η χρήση αλόγου αίματος προτιμάται, καθώς είναι πλούσια πηγή παράγοντα Χ και V.

Επιπλέον, εάν το δείγμα να φυτό προέρχεται από ένα μη-αποστειρωμένη περιοχή είναι προτεινόμενο να προστεθεί αντιβιοτικά για την αναστολή της φυσιολογικής χλωρίδας της περιοχής.

Παράδειγμα για δείγματα αναπνευστικών οδών όπου υπάρχει υποψία για την ύπαρξη βακτηρίων του γένους Haemophilus Η βακιτρακίνη χρησιμοποιείται για την αναστολή της ανάπτυξης του Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus και το σαπροφυτικό Neisseria.

Στην περίπτωση δειγμάτων γεννητικών οργάνων, όπου υπάρχει υποψία Haemophilus ducreyi, έχει χρησιμοποιηθεί επιτυχώς άγαρ σοκολάτας παρασκευάζεται ως εξής: Mueller - Hinton άγαρ με 5% αίμα αλόγου chocolatizada, 1% εμπλουτισμός Isovitalex και 3 ug / ml βανκομυκίνης.

Άγαρ σοκολάτας παρασκευασμένο με άγαρ Thayer Martin

Αυτό το μέσο είναι ειδικό για την απομόνωση του Neisseria gonorrhoeae. Πρέπει να περιέχει αντιβιοτικά για να αναστέλλει τη συνοδευτική χλωρίδα. Χρησιμοποιείται αίμα αρνιού.

Προετοιμασία

Πρέπει να δουν τις ενδείξεις για την παρασκευή του άγαρ βάσης που θα χρησιμοποιηθεί. Βρίσκονται στο πίσω μέρος της συσκευασίας του αφυδατωμένου μέσου. Περιγράφουν συνήθως πόσα πρέπει να ζυγίζονται για την προετοιμασία ενός λίτρου μέσου καλλιέργειας.

Στο εργαστήριο μπορείτε να προετοιμάσετε το ακριβές ποσό που χρειάζεται, μπορεί να είναι περισσότερο από λιγότερο από ένα λίτρο.

Υπολογισμοί

Ένας κανόνας τριών γίνεται για να υπολογίσετε πόσο πρέπει να ζυγιστεί για να προετοιμάσετε τον επιθυμητό όγκο. Παράδειγμα:

Αν για 1 λίτρο είναι απαραίτητο να ζυγίζετε 40 gr και το εργαστήριο απαιτεί 800 ml, λέγεται:

1000 ml -40 gr

800 ml - Χ

Ο τύπος θα είναι ο ακόλουθος:

Χ = 32 gr (ποσότητα που ζυγίζει για 800 ml).

Ζυγίστε και διαλύστε

Συνεχίζουμε να ζυγίζουμε την απαραίτητη ποσότητα και τοποθετούμε το σε φιάλη με νερό.

Θερμότητα έως μέτρια θερμότητα και πηγαίνει ανάμιξη απαλά με περιστροφικές κινήσεις για να διαλυθεί πλήρως το αφυδατωμένο μέσο, ​​βράζει για 1 λεπτό.

Αποστειρώστε

Η φιάλη εισάγεται στο αυτόκλειστο για να αποστειρωθεί το μέσο στους 121 ° C για 20 λεπτά.

Σύνολο αίματος

Όταν εξέρχεται από το αυτόκλειστο αφήνεται να παραμείνει μέχρις ότου η θερμοκρασία του μέσου είναι περίπου 56 έως 70 ° C για να τοποθετήσετε το αίμα και ανακατεύουμε μέχρι το μέσο γίνεται καφέ.

Εάν πρόκειται να προσθέσετε συμπληρώματα, αυτή είναι η ώρα να το κάνετε. Στη συνέχεια αναμείξτε και χρησιμεύστε 20 ml σε κάθε στείρο τρυβλίο Petri.

Ολόκληρη η διαδικασία πρέπει να εκτελείται σε απορροφητήρα ροής ή γύρω από τον καυστήρα Bunsen.

Αφήστε να σταθείτε μέχρι να στερεοποιηθούν και να παραμείνουν ανεστραμμένα στο ψυγείο.

Ένας άλλος τρόπος για να προετοιμάσετε το άγαρ σοκολάτας χωρίς τη χρήση αίματος

το μέσο βάσης παρασκευάζεται όπως περιγράφεται παραπάνω, το ληφθέν αφυδατωμένο αιμοσφαιρίνη διαλύεται στο εμπόριο και σε αυτόκλειστο.

Και τα δύο διαλύματα αφήνονται να ψυχθούν στους 50 ° C, ενώνονται και προστίθενται το συμπλήρωμα. Αναμιγνύουμε σε ασηπτικές συνθήκες και στη συνέχεια σερβίρουμε σε αποστειρωμένα πιάτα Petri.

Έλεγχος ποιότητας

Είναι σημαντικό ότι το αίμα τοποθετείται σε θερμοκρασία, είναι η ιδανική λύση για τη λύση των ερυθρών αιμοσφαιρίων, διατηρώντας παράλληλα τον παράγοντα V που είναι θερμοευαίσθητα.

Δεν πρέπει να υπάρχουν φυσαλίδες στην επιφάνεια του άγαρ. Κάθε παρτίδα 100 πλακών πρέπει να επωάζεται μία ή δύο πλάκες στη σόμπα στους 37 ° C για 24 ώρες για να ελέγξει την στειρότητα της.

Για καλύτερα αποτελέσματα, το άγαρ σοκολάτας θα πρέπει να χρησιμοποιείται λίγο μετά την προετοιμασία.

Τα βακτηριακά στελέχη ελέγχου θα πρέπει να λαμβάνονται στο εργαστήριο για να αξιολογηθεί η αποτελεσματικότητα του πρόσφατα παρασκευασμένου μέσου για την ανάπτυξη των κύριων απαιτητικών μικροοργανισμών κλινικής σημασίας.

Αναφορές

1. García Ρ, Paredes F, Fernández del Barrio Μ. (1994). Πρακτική κλινική μικροβιολογία. Πανεπιστήμιο του Κάντιθ, 2η έκδοση. Υπηρεσία Εκδόσεων της UCA.
2. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. (2009). Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Αργεντινή Πανamericana S.A Σύνταξη.
3. Koneman Ε, Allen S, Janda W, Schreckenberger Ρ, Winn W. (2004). Μικροβιολογική διάγνωση. (5η έκδοση). Αργεντινή, Εκδοτική Panamericana S.A..
4. Llanes R, Reyes Α, Rodriguez C, Guzman D, Llop Α σκοπιμότητας της χρήσης του μέσου καλλιέργειας με βάση άγαρ GC-Biocen Εργαστήριο Μικροβιολογίας. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Διατίθεται στο: scielo.sld.
5. Συμμετέχοντες στη Wikipedia. Άγαρ σοκολάτας. Wikipedia, Η ελεύθερη εγκυκλοπαίδεια. 17 Δεκεμβρίου 2018, 19:54 UTC. Διατίθεται στη διεύθυνση: en.wikipedia.org.