Ίδρυμα άγαρ Cetrimida, προετοιμασία, χρήσεις

Το cetrimide άγαρ ή το κετριμίδιο είναι ένα εκλεκτικό στερεό μέσο καλλιέργειας, σχεδιασμένο για την απομόνωση του Pseudomonas aeruginosa. Βασίζεται στην επισήμανση της παραγωγής χρωστικών χαρακτηριστικών αυτού του είδους και αναπτύχθηκε από την τροποποίηση του Tech agar, που δημιουργήθηκε από τους King, Ward και Raney.

Ο αρχικός τύπος περιείχε άλατα χλωριούχου μαγνησίου, θειικό κάλιο, πέψη με παγκρεατική ζελατίνη και άγαρ-άγαρ. Η τροποποίηση του τύπου συνίστατο στην προσθήκη κετριμιδίου (βρωμιούχο κετυλο τριμεθυλο αμμώνιο) και γλυκερόλης.

Το άγαρ του κετριμιδίου είναι χρήσιμο για τη μικροβιολογική μελέτη των δειγμάτων όπου η παρουσία του Pseudomonas aeruginosa. Πρέπει να σημειωθεί ότι αυτό το βακτήριο έχει μεγάλη σημασία, διότι αν και αποτελεί μέρος της φυσιολογικής μικροβιολογίας του περιβάλλοντος, συχνά συμπεριφέρεται σαν ένα ευκαιριακό παθογόνο..

Ως εκ τούτου, ένα από τα πιο κοινά προβλήματα που προκαλούνται από αυτό το βακτήριο είναι νοσοκομειακές λοιμώξεις, δηλαδή, εκείνοι που συμβαίνουν μέσα στο περιβάλλον του νοσοκομείου, επιτίθενται ασθενείς με κατάθλιψη ανοσοποιητικά συστήματα.

Επιπλέον, λόγω της συγγένειας αυτού του οργανισμού με την υγρασία, ασπράδια πιο ευάλωτες μόλυνση είναι: Αναπνευστικές συσκευές, φάρμακα, νεφελοποιητές, βρύσες, κλιματιστικά, απολυμαντικά, διαλύματα σαπουνιού, ενέσιμα διαλύματα, ανοιχτές πληγές , καθετήρες, καθετήρες ούρων, μεταξύ άλλων.

Με αυτή την έννοια, το άγαρ της κετριμίδης είναι χρήσιμο για την εκτέλεση μικροβιολογικών ελέγχων και καλλιεργειών στα στοιχεία που ονομάστηκαν προηγουμένως.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
  • 1.1 Ερμηνεία
• 2 Προετοιμασία
• 3 Χρήσεις
• 4 Τοποθέτηση
• 5 Περιορισμοί
• 6 Έλεγχος ποιότητας
• 7 Αναφορές

Ίδρυμα

Το άγαρ του κετριμιδίου βασίζεται στην ικανότητα του μέσου να προάγει την ανάπτυξη του Ρ. Aeruginosa, διεγείρουν την παραγωγή των χρωστικών τους και με τη σειρά τους αναστέλλουν την ανάπτυξη άλλων μικροοργανισμών.

Αυτές οι ιδιότητες οφείλονται στη λειτουργία που εκπληρώνει κάθε στοιχείο. Η παρούσα πεπτόνη ζελατίνης χρησιμεύει ως πηγή αζώτου, βιταμινών και μετάλλων. Η γλυκερόλη ή η γλυκερίνη λειτουργεί ως πηγή άνθρακα.

Από την πλευρά της, το κετριμίδιο (βρωμιούχο κετυλ τριμεθυλ αμμώνιο) είναι η ουσία που αναστέλλει την ανάπτυξη άλλων βακτηριδίων Ρ. Aeruginosa, συμπεριλαμβανομένων άλλων ειδών που ανήκουν στο ίδιο γένος.

Η αναστολή συμβαίνει επειδή το τετραμίδιο δρα ως κατιοντικό απορρυπαντικό, αποσταθεροποιώντας τη μεμβράνη πλάσματος των περισσότερων βακτηριδίων, με εξαίρεση την Ρ. Aeruginosa και μερικούς άλλους που καταφέρνουν να επιβιώσουν.

Από την άλλη πλευρά, περιέχει χλωριούχο μαγνήσιο και θειικό κάλιο. Αυτές οι ενώσεις διεγείρουν τη φαινοτυπική έκφραση που σχετίζεται με την ικανότητα του Pseudomonas aeruginosa για την παραγωγή διαφόρων χρωστικών, μεταξύ των οποίων: πυοκυανίνη, πιβερνδίνη, πορουβίνη, πομομελανίνη και φλουορεσκεΐνη. Τέλος, περιέχει άγαρ-άγαρ, το οποίο δίνει σταθερή συνοχή.

Ερμηνεία

Η ερμηνεία της ανάπτυξης που προκύπτει σε αυτό το άγαρ γίνεται με τον ακόλουθο τρόπο:

Παρατηρώντας, λεία, στρογγυλά αποικίες με τακτικές ακμές, που παράγουν μπλε-πράσινο, πράσινο, καφέ ή κοκκινωπό πιγμέντα, περισσότερο φρουτώδη εκπομπής οσμών (αμινοακετοφαινόνη), είναι ένα υποθετικό αποτέλεσμα της παρουσίας αυτού του βακτηρίου στο εν λόγω δείγμα.

Από την άλλη πλευρά, είναι ενδεικτικό Ρ. Aeruginosa την παρατήρηση ενός φωτεινού κιτρινωπού-πράσινου χρωστικού στις αποικίες όταν η πλάκα εκτίθεται σε υπεριώδες φως.

Πρέπει να σημειωθεί ότι κάθε παρατηρούμενο χρώμα οφείλεται στην παραγωγή συγκεκριμένης χρωστικής ουσίας. Το μπλε-πράσινη χρωστική ουσία αντιστοιχεί σε πυοκυανίνης παραγωγής, να pyoverdin πράσινο, κοκκινωπό να piorrubina, καφέ έως πρασινωπό piomelanina και φωτεινό κίτρινο-φθορισμός κάτω από υπεριώδες φως για να φλουορεσκεΐνη.

Προετοιμασία

Ζυγίζονται 43 g του αφυδατωμένου μέσου και διαλύονται σε απεσταγμένο νερό. Προστίθενται 10 ml γλυκερόλης. Πάρτε το μίγμα σε μια πηγή θερμότητας. Αφήνουμε να βράσει για λίγα λεπτά μέχρι την πλήρη διάλυση.

Αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά. Αφήστε να σταθείτε και σερβίρετε σε αποστειρωμένα πιάτα petri όταν η θερμοκρασία είναι περίπου 50 ° C.

Αφήστε να στερεοποιηθεί, να αναστρέψει, να παραγγείλει τα τακάκια και να αποθηκευτεί σε ψυγείο μέχρι τη χρήση. Για την τοποθέτηση πλακών agar cetrimide, πρέπει να αφαιρούνται εκ των προτέρων από το ψυγείο και να αφήνονται να πάρουν θερμοκρασία δωματίου..

Το τελικό ρΗ του μέσου θα πρέπει να είναι 7,2 ± 0,2.

Το χρώμα του αφυδατωμένου μέσου είναι μπεζ και το παρασκεύασμα είναι αδιαφανές λευκό.

Χρησιμοποιεί

Το άγαρ της κετριμίδης μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη φύτευση όλων των τύπων δειγμάτων στα οποία η παρουσία του Pseudomonas aeruginosa. Ως εκ τούτου, είναι χρήσιμο σε όλους τους τομείς της μικροβιολογίας (περιβαλλοντική, βιομηχανική, κλινική, νερό και τρόφιμα).

Είναι πολύ σημαντικό να αναλύσουμε περιβάλλοντα νοσοκομείο και είναι σε θέση να προβαίνει σε διορθωτικές μεσολάβηση, δεδομένου ότι αυτό μικροοργανισμός φτάνει ασθενείς με εξοπλισμό, φάρμακα, οι λύσεις και τα μολυσμένα εισροές που χρησιμοποιούνται από τον ασθενή.

Με αυτόν τον τρόπο, ο μικροοργανισμός μπορεί να μολύνει την κατώτερη αναπνευστική οδό, την ουροποιητική οδό και τις πληγές των ανοσοκατεσταλμένων ασθενών.

Μπορούν επίσης να γίνουν μετρήσεις αποικιών Ρ. Aeruginosa σε μικροβιακές δοκιμές ορίου.

Σπαρμένο

Το άγαρ Cetrimide μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως πρωτογενής καλλιέργεια. Η πλάκα εμβολιάζεται σε μία από τις άκρες της και από εκεί κατανέμεται με εξάντληση στο υπόλοιπο της πλάκας. Δείγματα υγρών μπορούν να σπαρθούν στην επιφάνεια με σπάτουλα drigalski.

Οι πλάκες επωάζονται σε αερόβιοση στους 37 ° C για 24 ώρες επώασης.

Περιορισμοί

-Ένα μικρό ποσοστό των στελεχών του  Pseudomonas aeruginosa δεν παράγουν πυροκυανίνη, έτσι μπορείτε να ερμηνεύσετε ένα ψεύτικο αρνητικό.

-Ορισμένα είδη Pseudomonas κλινικής σημασίας παρεμποδίζονται σε αυτό το μέσο.

-Παρά την παρατήρηση των χαρακτηριστικών που περιγράφονται για το Pseudomonas aeruginosa, πρέπει να επιβεβαιωθούν με πρόσθετες δοκιμές ταυτοποίησης. Μια δοκιμή που δεν πρέπει να λείπει είναι η δοκιμή οξειδάσης, πρέπει να είναι θετική.

-Ορισμένα enterobacteria μπορούν να αναπτυχθούν σε αυτό το μέσο και να αναπτύξουν μια κίτρινη χρωστική ουσία, αλλά διαφέρουν από Pseudomonas aeruginosa στην οποία όταν υποβάλλεται η πλάκα σε υπεριώδες φως δεν υπάρχει φθορισμός.

-Serratia marcescens καταφέρνει να αναπτύξει και παράγει μια ροζ χρωστική ουσία.

-Εάν οι πλάκες που έχουν σπαρθεί με άγαρ cetrimide εκτίθενται για ένα χρόνο σε θερμοκρασία δωματίου, τα στελέχη του Ρ. Aeruginosa μπορεί να χάσουν τον φθορισμό που παρατηρείται κάτω από το υπεριώδες φως, ωστόσο η ιδιότητα ανακτάται αν επανεμβολιασθεί στους 37 ° C.

Έλεγχος ποιότητας

Για να δοκιμαστεί η σωστή λειτουργία του agar cetrimide, μπορούν να χρησιμοποιηθούν στελέχη ελέγχου, όπως: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 και Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Τα αναμενόμενα αποτελέσματα είναι:

• Για να Ρ. Aeruginosa καλή ανάπτυξη, με μπλε-πρασινωπή χρωστική ουσία και θετική φλουορεσκεΐνη.
• S. maltophilia και S. aureus θα αναστέλλεται εν μέρει ή πλήρως.
• Αυτό αναμένεται Escherichia coli να ανασταλεί πλήρως.

Αναφορές

1. Callicó Α, Β Cedre, Sifontes S, Torres V, Pino Και Callis Α, Esnard S. Ο φαινοτυπικός χαρακτηρισμός και ορολογικών κλινικές απομονώσεις του Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
2. Εργαστήρια Conda Pronadisa. Βάση άγαρ κετριμιδίου. 2014. Διατίθεται στη διεύθυνση: condalab.com
3. Εργαστήρια Βρετανίας. Cetrimida άγαρ. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com
4. BD Laboratories BD Pseudosel άγαρ (Cetrimide άγαρ). 2013. Διατίθεται στη διεύθυνση: bd.com
5. Francisco Soria Melguizo Laboratory, C.A. Cetrimide άγαρ. 2009. Διατίθεται στη διεύθυνση: http://f-soria.es