Ίδρυμα BHI Agar, προετοιμασία και χρήσεις



Το BHI άγαρ ή άγαρ έγχυσης καρδιάς εγκεφάλου είναι ένα θρεπτικό στερεό μέσο καλλιέργειας. Στα ισπανικά αναφερόμαστε σε αυτό ως άγαρ έγχυσης καρδιάς εγκεφάλου. Πρόκειται για ένα μη-επιλεκτικό μέσο καλλιέργειας, το οποίο σημαίνει ότι όλα τα είδη των Gram θετικά και Gram αρνητικά βακτήρια μπορούν να αναπτυχθούν, καθώς και ορισμένες ζύμες και μούχλες.

Αποτελείται από βοείου Brain Heart Infusion, πεπτικό υδρόλυμα ζωικών ιστών, παγκρεατικό υδρόλυμα καζεΐνης, χλωριούχο νάτριο, γλυκόζη, φωσφορικό δινάτριο και άγαρ.

Πρέπει να σημειωθεί ότι το άγαρ ΒΗΙ είναι ένα από τα πιο συχνά μέσα καλλιέργειας στα βακτηριολογικά εργαστήρια. Μπορεί να χρησιμοποιηθεί χωρίς συμπληρώματα ως κύρια καλλιέργεια, υποκαλλιέργεια αποικιών που λαμβάνονται σε άλλα εκλεκτικά μέσα ή για τη διατήρηση στελεχών στο εργαστήριο.

Από την άλλη πλευρά, είναι ένα ιδανικό μέσο για χρήση ως βάση στην παρασκευή εμπλουτισμένων μέσων, όπως άγαρ αίματος και άγαρ σοκολάτας. Και οι δύο είναι ιδανικές για την απομόνωση των απαιτητικών μικροοργανισμών από τη διατροφική άποψη. Ωστόσο, πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι δεδομένου ότι περιέχει γλυκόζη, δεν είναι επαρκές να παρατηρούνται τα πρότυπα αιμόλυσης.

Παρομοίως, το άγαρ ΒΗΙ μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την παρασκευή ειδικών μέσων για την απομόνωση παθογόνων μικροοργανισμών με δύσκολη ανάπτυξη σε κοινά μέσα, μεταξύ των οποίων: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae και Histoplasma capsulatum.

Με το πρόσθετο αντιβιοτικού το άγαρ ΒΗΙ γίνεται ένα εκλεκτικό μέσο για την απομόνωση των μυκήτων.

Ευρετήριο

  • 1 Ίδρυμα
  • 2 Προετοιμασία
    • 2.1 Σφήνες
    • 2.2 Πλάκες
    • 2.3 Παρασκευή του άγαρ αίματος
  • 3 Χρήσεις
    • 3.1 Χρήση χωρίς συμπληρώματα
    • 3.2 Ως βασικό άγαρ για την παρασκευή άλλων μέσων
  • 4 Έλεγχος ποιότητας
  • 5 Αναφορές

Ίδρυμα

Είναι ένα θρεπτικό μέσο καλλιέργειας για την απομόνωση μετρίως απαιτητικών μικροοργανισμών, που είναι σε θέση να αυξήσει τον εμπλουτισμό του με την προσθήκη αίματος και άλλων συμπληρωμάτων διατροφής.

Είναι ένα μη εκλεκτικό μέσο καλλιέργειας, επομένως επιτρέπει την ανάπτυξη των περισσότερων Gram θετικών και Gram αρνητικών βακτηρίων, καθώς και μερικών μυκήτων. Ωστόσο, μπορεί να γίνει επιλεκτική με την προσθήκη αντιβιοτικών.

Το μέσο περιέχει έγχυση εγκεφάλου και καρδιάς μοσχαριού, υδρολυμένο πεπτίδιο από ζωικούς ιστούς και υδρόλυμα παγκρεατικής καζεΐνης. όλες αυτές οι ενώσεις δρουν ως πηγές βιταμινών, αμινοξέων, αζώτου και άνθρακα.

Η γλυκόζη είναι ένας υδατάνθρακας που παρέχει ενέργεια σε μικροοργανισμούς μόλις το έχουν ζυμώσει. Ενώ το χλωριούχο νάτριο και το φωσφορικό δινάτριο διατηρούν την οσμωτική ισορροπία και παρέχουν ένα ρΗ κοντά στην ουδετερότητα. Τέλος, το άγαρ δίνει τη σταθερή σύσταση στο μέσο.

Προετοιμασία

Ζυγίζονται 52 γραμμάρια του αφυδατωμένου μέσου και διαλύονται σε ένα λίτρο απεσταγμένου νερού. Φέρτε το μίγμα σε μια πηγή θερμότητας μέχρι να βράσει, ανακατεύοντας συχνά κατά τη διάρκεια της διαδικασίας διάλυσης.

Μπορείτε να προετοιμάσετε σφήνες ή πλάκες από άγαρ BHI χωρίς πρόσθετα.

Σφήνες

Για την παρασκευή του παρασκευάσματος σφήνες χρησιμεύουν για να αναπληρώσει το ήμισυ του κάθε σωλήνα, κάλυμμα και τοποθετήθηκε σε αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά, οι αναδυόμενες σε μια βάση κρεβάτι μέχρι στερεού. Στη συνέχεια, αποθηκεύστε το σε ένα ψυγείο μέχρι τη χρήση.

Πλάκες

Το διαλυμένο μίγμα υποβάλλεται σε αυτόκαυστο στους 121 ° C για 15 λεπτά, όταν αφήνεται αφήνεται να ψυχθεί στους 50 ° C και 20 ml του μέσου σερβίρονται σε αποστειρωμένα τρυβλία Petri. Επιτρέπεται να στερεοποιούνται, να αναστρέφονται και να αποθηκεύονται σε ψυγείο μέχρι να χρησιμοποιηθούν. Αφήστε τις πλάκες να πάρουν θερμοκρασία δωματίου πριν από την φύτευση.

Το ρΗ του μέσου θα πρέπει να είναι 7,4 ± 0,2.

Το μη προετοιμασμένο μέσο είναι μπεζ και παρασκευάζεται είναι ανοιχτόχρωμο.

Παρασκευή του άγαρ αίματος

Μετά την αποστείρωση του μέσου, ψύξη σε θερμοκρασία περίπου 45 έως 50 ° C, στη συνέχεια προσθέστε το αίμα (50 ml), αναμείξτε απαλά και χρησιμεύουν για να ομογενοποιηθεί ασηπτικά 20 ml σε κάθε τρυβλίο Petri. Αν οι φυσαλίδες που σχηματίζονται στην πλάκα πρέπει να περάσει γρήγορα καυστήρα φλόγας στις φυσαλίδες για την εξάλειψή τους.

Ομοίως, μπορούν να παρασκευαστούν ειδικά μέσα με την προσθήκη των αντίστοιχων προσθέτων όταν το μίγμα φθάσει σε θερμοκρασία 45 έως 50 ° C.

Το μέσο είναι κόκκινο κεράσι.

Χρησιμοποιεί

Χρήση χωρίς συμπληρώματα

Το άγαρ BHI χωρίς πρόσθετα είναι χρήσιμο ως πρωτογενής καλλιέργεια και για τη φύτευση καθαρών στελεχών μικροοργανισμών που απαιτούν μέτρια ή μέτρια για μεταγενέστερη ταυτοποίηση.

Ως σημαίνει ελαφρύ χρώμα, είναι ιδανικό για να παρακολουθείτε χρωστικές ουσίες και δεν περιέχει παρεμβολή ουσίες μπορεί να εκτελεστεί σε αυτόν κάποιες βιοχημικές εξετάσεις, όπως η οξειδάση και η καταλάση, ή τοποθετήστε άλλες βιοχημικές εξετάσεις από τις αποικίες από αυτό άγαρ.

Ομοίως, οι σφήνες BHI άγαρ χρησιμοποιούνται ευρέως για τη διατήρηση των στελεχών για καθορισμένο χρόνο στο εργαστήριο (bacterioteca).

Οι πλάκες ή σφήνες που φυτεύονται στην επιφάνεια με βακτηριακά στελέχη επωάζονται στους 37 ° C για 24 έως 48 ώρες. Ενώ, στους μύκητες, η θερμοκρασία και ο χρόνος επώασης θα εξαρτώνται από τον τύπο του μύκητα που αναζητείται.

Ως βασικό άγαρ για την παρασκευή άλλων μέσων

Με αυτή τη βάση μπορούν να παρασκευαστούν εμπλουτισμένα και εκλεκτικά μέσα.

Εμπλουτισμένο

Η κύρια λειτουργία του είναι να χρησιμεύσει ως βάση στην παρασκευή του άγαρ αίματος για συνηθισμένη χρήση στα εργαστήρια μικροβιολογίας. Ειδικά, η βάση BHI συμβάλλει στην απομόνωση των στελεχών του Streptococcus sp. Ωστόσο, έχει το μειονέκτημα ότι δεν είναι κατάλληλο για την παρατήρηση των αιμολυτικών σχημάτων επειδή περιέχει γλυκόζη.

Χρησιμοποιείται επίσης στην παρασκευή άγαρ κουνελιού ή αλόγου για την απομόνωση του Haemophilus sp. Για καλύτερα αποτελέσματα μπορείτε να προσθέσετε ένα συμπλήρωμα εμπλουτισμού (IsoVitaleX).

Εάν τα δείγματα προέρχονται από την αναπνευστική οδό προς το άγαρ, μπορεί να προστεθεί βακιτρακίνη για να αναστείλει τη συνοδευτική χλωρίδα και να αυξήσει την πιθανότητα ανάκτησης των στελεχών του Haemophilus sp.

Από την άλλη πλευρά, το άγαρ αίματος (αρνί ή άνθρωπος) μπορεί να παρασκευαστεί με τελουρίτη κυστίνη για απομόνωση Corynebacterium diphtheriae. Παρομοίως, είναι χρήσιμο να παρασκευασθεί άγαρ αίματος κουνελιού, με την προσθήκη κυστίνης και γλυκόζης για την απομόνωση Francisella tularensis.

Η σπορά των πλακών άγαρ αίματος γίνεται με εξάντληση και επωάζεται στους 35-37 ° C για 24-48 ώρες σε μικροαερόφιλα (5-10% CO)2).

Επιλεκτική

Αυτό το μέσο με την προσθήκη αντιβιοτικών μπορεί να αντικαταστήσει το Sabouraud άγαρ για την απομόνωση των μυκήτων.

Ο συνδυασμός του BHI άγαρ με χλωραμφενικόλη - γενταμικίνη ή πενικιλίνη - στρεπτομυκίνη και αίμα αλόγου είναι ιδανικό για την απομόνωση Histoplasma capsulatum.

Ανάλογα με τον απομονωθέντα μικροοργανισμό, συνιστάται επώαση στους 35-37 ° C ή σε θερμοκρασία δωματίου σε αεροβιοσία. Μερικές φορές η επώαση είναι απαραίτητη και στις δύο κλίμακες θερμοκρασίας, χρησιμοποιώντας δύο πλάκες για αυτό.

Ορισμένοι μύκητες όπως Trichophyton mentagrophytes θα πρέπει να επωάζονται σε θερμοκρασία δωματίου για έως και 7 ημέρες.

Έλεγχος ποιότητας

Από κάθε παρασκευασμένη παρτίδα συνιστάται η επώαση 1 πλάκας ή σφήνας στους 37 ° C για 24 ώρες και επαλήθευση ότι δεν υπάρχει ανάπτυξη. Ιδιαίτερα σημαντική κατά την προετοιμασία του άγαρ αίματος, επειδή είναι ένα μολυσμένο μέσο.

Από την άλλη πλευρά, η ποιότητα του μέσου μπορεί να εκτιμηθεί με εμβολιασμό γνωστών ή πιστοποιημένων πρότυπων στελεχών και παρακολούθηση της ανάπτυξής τους.

Με αυτή την έννοια, για να αξιολογηθεί το άγαρ ΒΗΙ χωρίς πρόσθετα, τα στελέχη του Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 ή Candida albicans ATCC 10231. Επωάζονται στους 37 ° C σε αερόβιοση για 24 έως 48 ώρες. Σε όλες τις περιπτώσεις αναμένεται ικανοποιητική ανάπτυξη.

Για την αξιολόγηση των πλακών άγαρ αίματος, τα στελέχη του  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ή Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Τα βακτηριακά στελέχη επωάζονται στους 37 ° C σε μικροαεροφιλικό για 24 ώρες, ενώ ο μύκητας επωάζεται σε θερμοκρασία δωματίου σε υγρό θάλαμο για έως και 7 ημέρες. Σε όλες τις περιπτώσεις αναμένεται ικανοποιητική ανάπτυξη.

Αναφορές

  1. Εργαστήρια Βρετανίας. Brain Heart έγχυσης Άγαρ. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com.
  2. BD Laboratories Έλαιο έγχυσης καρδιάς εγκεφάλου (BHI). 2013. Διατίθεται στη διεύθυνση: bd.com.
  3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Έγκυο έγχυσης καρδιάς εγκεφάλου. 2009.
  4. Neogen εργαστήριο. Έγκυο έγχυσης καρδιάς εγκεφάλου. Διατίθεται στη διεύθυνση: foodsafety.neogen.com
  5. Gil M. Agar αίματος: ίδρυμα, χρήσεις και προετοιμασία. 2018. Διατίθεται στη διεύθυνση: lifeder.com.
  6. Συμμετέχοντες στη Wikipedia. Εγκεφαλική έγχυση εγκεφάλου Wikipedia, Η ελεύθερη εγκυκλοπαίδεια. 19 Σεπτεμβρίου 2018, 03:58 UTC. Διατίθεται στη διεύθυνση: wikipedia.org. Πρόσβαση στις 2 Μαρτίου 2019.
  7. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. (2009). Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Αργεντινή.