Baird Parker Agar ίδρυμα, προετοιμασία και χρήση

Το Baird Parker άγαρ είναι ένα στερεό, εκλεκτικό και διαφορικό μέσο καλλιέργειας. Δημιουργήθηκε το 1962 για την ανίχνευση και τη θετική κατά του κοαγκουλάση μέτρηση Staphylococcus (Staphylococcus aureus).

Αποτελείται παγκρέατος υδρόλυμα καζεΐνης, εκχύλισμα κρέατος, εκχύλισμα ζύμης, χλωριούχο λίθιο, γλυκίνη, πυροσταφυλικό νάτριο, τελλουρικού καλίου, άγαρ και γαλάκτωμα κρόκου αυγού.

Το άγαρ Baird Parker βασίζεται στην ικανότητα του S. aureus της μείωσης της τελλουρίτης και της παραγωγής λεκιθινάσης. Και οι δύο ιδιότητες δημιουργούν μια αποικία με ειδικά χαρακτηριστικά για αυτό το είδος. Επομένως, προσφέρει μεγάλη αποτελεσματικότητα στην ανίχνευση αυτού του μικροοργανισμού.

Οι τυπικές αποικίες του S. aureus είναι μαύρα ή σκούρα γκρίζα, με άχρωμα περιγράμματα και σαφές φωτοστέφανο που τα περιβάλλει, διαφοροποιώντας τους από τους υπόλοιπους μικροοργανισμούς. Αυτός ο παθογόνος παράγοντας μπορεί να βρεθεί σε κλινικά δείγματα, νερά, καλλυντικά και ωμά ή μαγειρεμένα τρόφιμα.

Η διάγνωση ή ανίχνευση είναι κρίσιμη, λόγω της ποικιλίας των παθολογιών που παράγονται ως τροφική δηλητηρίαση, ζεματισθεί σύνδρομο του δέρματος, το σύνδρομο τοξικού σοκ, αποστήματα, μηνιγγίτιδα, σηψαιμία, ενδοκαρδίτιδα, μεταξύ άλλων.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
  • 1.1 Διατροφική ισχύς
  • 1.2 Επιλεκτική
  • 1.3 Διαφορικό
• 2 Προετοιμασία
  • 2.1 Γαλάκτωμα κρόκου αυγού
  • 2.2 Τελουρίτη καλίου σε 1% β / ο
  • 2.3 Παρασκευή του μέσου καλλιέργειας
• 3 Χρήση
  • 3.1 Κλινικά δείγματα
  • 3.2 δείγματα τροφίμων
  • 3.3 Δείγματα νερού
• 4 Έλεγχος ποιότητας
• 5 Συστάσεις
• 6 Αναφορές

Ίδρυμα

Θρεπτική δύναμη

Η παγκρεατική υδρόλυμα καζεΐνης, εκχύλισμα κρέατος και εκχύλισμα ζύμης είναι πηγές θρεπτικών συστατικών, βιταμινών και ανόργανων στοιχείων που απαιτούνται για τη συνολική ανάπτυξη μικροβίων, ενώ πυροσταφυλικό και γλυκίνη οι ενώσεις που προωθούν ειδικές αναπτύξεως Staphylococcus aureus.

Επιλεκτική

Το άγαρ Baird Parker είναι επιλεκτικό επειδή περιέχει ουσίες που εμποδίζουν την ανάπτυξη της συνοδευτικής χλωρίδας, προωθώντας παράλληλα την ανάπτυξη S. aureus. Οι ανασταλτικές ενώσεις είναι το χλωριούχο λίθιο και το τελλουρικό κάλιο.

Διαφορικό

Αυτό σημαίνει ότι επιτρέπει τη διαφοροποίηση του S. aureus του υπόλοιπου αρνητικού στην κοαγκουλάση Staphylococci. S. aureus έχει την ικανότητα να μειώνει το τελουρίτη σε ελεύθερο μαύρο μεταλλικό τελλούριο, σχηματίζοντας μαύρες ή σκούρες γκρίζες αποικίες.

Ομοίως, ο κρόκος αυγού παρέχει τα υποστρώματα για να αποδείξει την παρουσία του ενζύμου λεκιθινάση και λιπάση. S. aureus είναι θετική λεκιθινάση και ως εκ τούτου θα παρατηρηθεί μια καθαρή αλογόνου γύρω από την αποικία, υποδεικνύοντας ότι η λεκιθίνη υδρολύθηκε.

Υπό αυτή την έννοια, η εμφάνιση σε αυτό το άγαρ μαύρων ή σκούρων γκρίζων αποικιών φωτεινών με ελαφρύ φωτοστέφανο υποδεικνύει παρουσία S. aureus. 

Εάν σχηματιστεί ζώνη καθίζησης, είναι ενδεικτικό ότι υπάρχει δραστικότητα λιπάσης. Μερικά στελέχη του S. aureus είναι θετική λιπάση και άλλα αρνητικά.

Σε περίπτωση που το S. aureus Εάν η λιπάση είναι θετική, θα παρατηρηθεί μια αδιαφανής ζώνη γύρω από τη μαύρη ή σκούρα γκρίζα αποικία, και στη συνέχεια το διαυγές φωτοστέφανο λόγω της δράσης της λεκιθινάσης..

Αποικίες άλλων βακτηριδίων S. aureus που είναι σε θέση να αναπτυχθούν σε αυτό το μέσο θα αναπτύξουν άχρωμες ή καφέ αποικίες, χωρίς φωτοστέφανο.

Άτυπες μαύρες αποικίες μπορούν επίσης να παρατηρηθούν με ή χωρίς άχρωμο περίγραμμα, αλλά χωρίς καθαρό φωτοστέφανο. Αυτές οι αποικίες δεν πρέπει να λαμβάνονται υπόψη, δεν αντιστοιχούν S. aureus.

Προετοιμασία

Γαλάκτωμα κρόκου αυγού

Πάρτε ένα φρέσκο ​​αυγό κοτόπουλου, το πλένετε καλά και το τοποθετείτε 2 έως 3 ώρες σε 70% αλκοόλ. Στη συνέχεια, το αυγό ανοίγει ασηπτικά και το λευκό αυγό διαχωρίζεται προσεκτικά από τον κρόκο. Στη συνέχεια λαμβάνονται 50 ml κρόκου και αναμιγνύονται με 50 ml αποστειρωμένου φυσιολογικού διαλύματος.

Τελουρίτη καλίου σε 1% β / ο

Ορισμένες εμπορικές κατοικίες πωλούν 1% κελλουρίτη καλίου έτοιμες για χρήση. Προστίθεται στο μέσο πριν στερεοποιηθεί το μέσο.

Για την παρασκευή αυτού του διαλύματος στο εργαστήριο ζυγίζεται 1,0 g τερρυρίτη καλίου και διαλύεται σε ένα μέρος νερού. Στη συνέχεια η ποσότητα του νερού συμπληρώνεται στα 100 ml. Το διάλυμα πρέπει να αποστειρωθεί με τη μέθοδο φιλτραρίσματος.

Παρασκευή του μέσου καλλιέργειας

Ζυγίζονται 60 g του αφυδατωμένου μέσου και διαλύονται σε 940 ml απεσταγμένου νερού. Αφήστε το μείγμα σε ηρεμία για περίπου 5 έως 10 λεπτά.

Εφαρμόστε θερμότητα αναδεύοντας συχνά το μέσο για να βελτιώσετε τη διαδικασία διάλυσης. Αφήνουμε να βράσει για ένα λεπτό. Αποστειρώστε στο αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά.

Αφήνουμε να σταματήσουμε μέχρις ότου φθάσει σε θερμοκρασία 45 ° C και προσθέτουμε 50 ml του γαλακτώματος του κρόκου αυγού και 10 ml τελλουρικού 1%. Αναμείξτε καλά και σερβίρετε 15 έως 20 ml σε αποστειρωμένα πιάτα Petri.

Αφήστε να στερεοποιηθεί, να παραγγείλετε ανεστραμμένα σε πλάκες και να φυλάξετε σε ψυγείο μέχρι τη χρήση.

Το τελικό ρΗ του παρασκευασθέντος μέσου θα πρέπει να είναι 6,8 ± 0,2.

Πριν από τη φύτευση ενός δείγματος, περιμένετε έως ότου η πλάκα λάβει τη θερμοκρασία περιβάλλοντος. Σπάζετε τις πλάκες με ραβδώσεις ή με σπορά στην επιφάνεια με σπάτουλα Drigalski.

Το χρώμα του αφυδατωμένου μέσου είναι ανοικτό μαύρισμα και το χρώμα του παρασκευασμένου μέσου είναι ελαφρώς κεχριμπαρένιο.

Χρήση

Κλινικά δείγματα

Τα κλινικά δείγματα ενοφθαλμίζονται απ 'ευθείας εκφορτίζοντας ένα μέρος του υλικού στο ένα άκρο της πλάκας και από εκεί φτάνουν με εξάντληση. Επωάστε για 24 έως 48 ώρες στους 35-37 ° C.

Δείγματα τροφίμων

Ζυγίζονται 10 g του δείγματος τροφίμων και ομογενοποιούνται σε 90 ml 0,1% πεπονιούχο νερό, παρασκευάζονται αραιώσεις από εκεί, εάν είναι απαραίτητο. Εμβολιάστε τις πλάκες εις τριπλούν με 0,3 ml από τα παρασκευασθέντα διαλύματα και σπάζετε στην επιφάνεια με σπάτουλα Drigalski. Επωάστε για 24 έως 48 ώρες στους 35-37 ° C.

Αυτή η μεθοδολογία επιτρέπει την καταμέτρηση των τυπικών αποικιών που λαμβάνονται και είναι ιδανική όταν η παρουσία του S. aureus πάνω από 10 CFU ανά g / ml δείγματος.

Αν υποψιάζεστε ότι το ποσό των S. aureus είναι μικρή ή υπάρχει πολύ συνοδεύουν χλωρίδα, προτείνεται να εμπλουτίσει το δείγμα σε ζωμό σόγιας τρυπτικάσης με 10% NaCl και 1% πυροσταφυλικό νάτριο. Αυτό θα ευνοήσει την ανάπτυξη του S. aureus και θα εμποδίσουν την ανάπτυξη της συνοδευτικής χλωρίδας. Σωλήνες που είναι θολό θα τοποθετηθούν στο άγαρ Baird Parker.

Δείγματα νερού

Σε ένα σύστημα διήθησης κενού και αποστειρώθηκε 100 ml νερού διηθείται υπό μελέτη, και στη συνέχεια η μικροπορώδης μεμβράνη των 0,4 microns αφαιρείται με αποστειρωμένη λαβίδα και τοποθετούνται σε ένα πιάτο Baird Parker. Επωάστε για 24 έως 48 ώρες στους 35-37 ° C. Αυτή η τεχνική επιτρέπει την καταμέτρηση των τυπικών αποικιών του S. aureus.

Έλεγχος ποιότητας

Για να αξιολογηθεί η ποιότητα του άγαρ Baird Parker, μπορούν να χρησιμοποιηθούν γνωστά στελέχη, όπως Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ή Proteus mirabilis ATCC 43071.

Στην περίπτωση των στελεχών του S. aureus ATCC είναι γνωστό ότι μειώνει τελλουρικού και είναι λιπάση και θετική lecitinasa. Ως εκ τούτου πρέπει να υπάρχει μια ικανοποιητική ανάπτυξη και να αναπτυχθούν κυρτές αποικίες με μαύρο κέντρο και άχρωμο άκρη με ένα αδιαφανές αλογόνο και ενός άλλου σαφή εξόχως απόκεντρες αλο.

Από την άλλη πλευρά, S. epidermidis η κακή ανάπτυξη αναμένεται σε αυτό το μέσο, ​​με γκρίζες-καστανές έως μαύρες αποικίες, χωρίς σαφές φωτοστέφανο.

Για να Ε. Coli και P. mirabilis αναμένεται να ανασταλεί εν όλω ή εν μέρει. Σε περίπτωση ανάπτυξης, οι καφέ αποικίες θα αναπτυχθούν χωρίς αδιαφανή ζώνη, ούτε καθαρό φωτοστέφανο.

Συστάσεις

-Το μέσο δεν πρέπει να θερμαίνεται μετά την προσθήκη του τελλουρίτη και του κρόκου.

-Η παρασκευή του γαλακτώματος του κρόκου αυγού και η προσθήκη του στο μέσο είναι ένα πολύ ευάλωτο στάδιο μόλυνσης. Πρέπει να ληφθεί μεγάλη προσοχή.

-Εάν υπάρχει παρουσία τυπικών αποικιών S. aureus πρέπει να επιβεβαιωθεί με την τοποθέτηση μιας δοκιμασίας κοαγκουλάσης στο εν λόγω στέλεχος.

-Εάν υπάρχουν αμφίβολα αποτελέσματα με την πήξη, πρέπει να τοποθετηθούν άλλες δοκιμές επιβεβαίωσης.

-Προσέξτε να μην συγχέουμε την παρουσία τυπικών αποικιών S. aureus με τις άτυπες αποικίες μαύρου χρώματος.

Αναφορές

1. Συμμετέχοντες στη Wikipedia. Αγάρ Baird-Parker. Wikipedia, Η ελεύθερη εγκυκλοπαίδεια. 15 Μαρτίου 2017, 19:36 UTC. Διατίθεται στη διεύθυνση: wikipedia.org/ Πρόσβαση στις 18 Φεβρουαρίου 2019.
2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006. Διαθέσιμο στη διεύθυνση: bd.com
3. Εργαστήρια Βρετανίας. Βάση βάσης Baird Parker. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Agar Baird Parker. Διατίθεται στη διεύθυνση: http://f-soria.es/Inform
5. Εργαστήρια Βρετανίας. Τελουρίτη καλίου. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín Μ, Oyarzo C, Escudero Ο, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Carrying Staphylococcus aureus εντεροτοξικογόνο τύπου Α, σε ρινοφαρυγγικά επιχρίσματα σε χειριστές τροφίμων. Rev Med Χιλή 2017; 145: 1559-1564
7. Βενεζουέλας Standard Covenin 1292-89. (1989). Φαγητό Απομόνωση και απαρίθμηση Staphylococcus aureus. Διατίθεται σε:sencamer.gob.ve