Peptone νερό ίδρυμα, προετοιμασία και χρήσεις

Το peptonada νερό είναι ένα μη επιλεκτικό υγρό μέσο εμπλουτισμού, το οποίο χρησιμοποιείται κυρίως ως αραιωτικό για δείγματα τροφίμων ή άλλα υλικά. Αυτό σημαίνει ότι από χημική άποψη είναι πολύ απλή, περιέχει πεπτόνη από κρέας, χλωριούχο νάτριο και νερό.

Έχει μια ορισμένη θρεπτική αξία, επιτρέποντας τον εμπλουτισμό του δείγματος. Εάν υπάρχουν βακτηρίδια που έχουν υποστεί βλάβη, αυτό σημαίνει ότι έχει τη δύναμη να αποκαταστήσει τη βιωσιμότητα. Είναι ιδιαίτερα χρήσιμο για την ανάκτηση βακτηρίων που ανήκουν στην οικογένεια Enterobacteriaceae.

Στην περίπτωση της ανάκτησης Salmonellas, συνιστάται η χρήση της παραλλαγμένης υδατικής παραλλαγής πετονάδας. Αυτό χρησιμεύει ως μέσο προ-εμπλουτισμού του δείγματος, στην περίπτωση αυτή περιέχει άλλα στοιχεία όπως φωσφορικό δινάτριο και φωσφορικό κάλιο.

Κανονικά το νερό πεπτανάδας παρασκευάζεται σε ουδέτερο ρΗ, ωστόσο υπάρχουν και άλλες παραλλαγές όπου είναι απαραίτητο το ρΗ να είναι 8,5 ± 0,2 (αλκαλικό), επειδή τα βακτήρια που απομονώνονται είναι αλκαλόφιλα, όπως για παράδειγμα Vibrio cholerae.

Από την άλλη πλευρά, αυτό το μέσο μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως μέσο βάσης για δοκιμές ζύμωσης υδατανθράκων.

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
• 2 Προετοιμασία
  • 2.1 Προετοιμασία στο σπίτι (μη εμπορική)
  • 2.2 Παρασκευή με χρήση εμπορικού μέσου
  • 2.3 Προετοιμασία για δοκιμές ζύμωσης
  • 2.4 Άλλες παραλλαγές του νερού peptonada
• 3 Χρήση
  • 3.1 Δείγματα κοπράνων
  • 3.2 δείγματα τροφίμων
• 4 Έλεγχος ποιότητας
• 5 Περιορισμοί
• 6 Αναφορές

Ίδρυμα

Οι πεπτόνες παρέχουν τα θρεπτικά συστατικά που απαιτούνται για την ανάπτυξη βακτηρίων, ιδιαίτερα τα άζωτο και τα αμινοξέα βραχείας αλυσίδας, ενώ το χλωριούχο νάτριο διατηρεί την οσμωτική ισορροπία.

Επιπλέον, το μέσο επιτρέπει τη διασπορά, ομογενοποίηση και επισκευή βακτηριακών κυττάρων που έχουν υποστεί βλάβη από βιομηχανικές διεργασίες..

Ως αραιωτικό είναι ιδανικό, αντικαθιστώντας αποτελεσματικά το φυσιολογικό διάλυμα (SSF) ή το φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα (PBS).

Η βακτηριακή ανάπτυξη είναι εμφανής παρατηρώντας την θολερότητα αυτής.

Προετοιμασία

Σπιτική παρασκευή (μη εμπορική)

Ζυγίζονται 1 g πεπτόνης και 8,5 g χλωριούχου νατρίου, διαλύονται σε 1 λίτρο απεσταγμένου νερού. Το pH πρέπει να ρυθμιστεί στο 7,0. Για αυτό μπορείτε να χρησιμοποιήσετε χλωριούχο νάτριο 1Ν.

Παρασκευή με εμπορικό μέσο

Ζυγίζονται 15 gr του αφυδατωμένου μέσου και διαλύονται σε ένα λίτρο απεσταγμένου νερού. Ομογενοποιήστε το μείγμα. Εάν είναι απαραίτητο, το μείγμα βράζεται για 1 λεπτό για να βοηθηθεί η ολική διάλυση. Σερβίρονται σε φιαλίδια των 100 ml ή σε σωλήνες των 10 ml, ανάλογα με τις ανάγκες. Αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά.

Ψύξτε και χρησιμοποιήστε ή αποθηκεύστε στο ψυγείο. Το τελικό ρΗ του μέσου είναι 7,2 ± 0,2.

Το χρώμα του αφυδατωμένου μέσου είναι ανοιχτό μπεζ και παρασκευάζεται είναι ελαφρώς κεχριμπαρένιο.

Προετοιμασία για δοκιμές ζύμωσης

Στην προηγούμενη παρασκευή - πριν από την αποστείρωση - ο υδατάνθρακας θα πρέπει να προστεθεί σε μια τελική συγκέντρωση 1%, συν τον δείκτη Andrade (όξινο φούξιν) ή με φαινόλη κόκκινο (0,018 g / L). Ένα κουδουνάκι Durham για την παρατήρηση του σχηματισμού αερίου πρέπει να τοποθετηθεί στους σωλήνες.

Άλλες παραλλαγές νερού πετονάδας

-Peptone νερό ρυθμισμένο ή ρυθμισμένο

Περιέχει ένζυμο υδρολύματος καζεΐνης, χλωριούχο νάτριο, δισόξινο φωσφορικό κάλιο και δωδεκαϋδρικό όξινο φωσφορικό νάτριο. Το τελικό ρΗ είναι 7,0 ± 0,2.

Για την παρασκευή του, ζυγίζονται 20 g του αφυδατωμένου μέσου και διαλύονται σε 1 λίτρο απεσταγμένου νερού. Αφήστε να σταματήσετε για περίπου 5 λεπτά περίπου. Θερμάνετε για 1 λεπτό μέχρι να διαλυθεί πλήρως.

Ρίξτε σε κατάλληλα μπουκάλια ανάλογα με τις ανάγκες. Αποστειρώστε χρησιμοποιώντας το αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά.

-Αλκαλικό πετονιούχο νερό

Ζυγίζονται 25 g του αφυδατωμένου μέσου και διαλύονται σε 1 λίτρο νερού. Συνεχίστε όπως περιγράφεται παραπάνω. Το ρΗ κυμαίνεται από 8,3 έως 8,7.

Χρήση

Το ενοφθάλμισμα γίνεται με τοποθέτηση του δείγματος απευθείας.

Χρησιμοποιείται για την αραίωση των δειγμάτων, ειδικά όταν υπάρχει υποψία ότι ενδέχεται να έχουν υποστεί βλάβες στα βακτήρια. Συνήθως οι αραιώσεις είναι 1:10 και 1: 100.

Επωάστε για 24 ώρες σε αερόβιοση στους 35-37 ° C.

Δείγματα κοπράνων

Για δείγματα κοπράνων που αναζητούν σαλμονέλα, συνιστάται η χρήση ρυθμισμένου ή ρυθμισμένου νερού ως μέσου προ εμπλουτισμού..

Για να γίνει αυτό, προχωρήστε ως εξής:

Εάν το σκαμνί σχηματίζεται, πάρτε 1 g δείγματος. Εάν είναι υγρές, πάρτε 1 ml κοπράνων και αναρτήστε σε ένα σωληνάριο με 10 ml ρυθμισμένου πεπονιού νερού. Στην περίπτωση των επιχρισμάτων από το ορθό, εκκενώνετε το υλικό που περιέχεται στο στυλεό μέσα στο σωλήνα με ρυθμισμένο πεπτονωμένο νερό.

Σε όλες τις περιπτώσεις, αναμείξτε και ομογενοποιήστε πολύ καλά το δείγμα.

Επωάστε στους 37 ° C για 18 έως 24 ώρες. Στη συνέχεια, υπο-καλλιεργούνται σε ζωμό εμπλουτισμού, όπως ο ζωμός κυστίνης σεληνίτη ή ο τετραθειονικός ζωμός στους 37 ° C για 18-24 ώρες. Τέλος, καλλιεργούνται σε εκλεκτικά μέσα για Salmonella, όπως SS άγαρ, XLD άγαρ, Hektoen άγαρ, μεταξύ άλλων.

Δείγματα τροφίμων

Το ύδωρ πεπτόνης χρησιμοποιείται ως μέσο εμπλουτισμού ή ως απλό αραιωτικό, αλλά εάν αναζητούνται είδη σαλμονέλας, χρησιμοποιείται ως μέσο προ εμπλουτισμού, όπως ήδη περιγράφηκε..

Σε τρόφιμα προχωρήστε ως εξής:

Για τα στερεά τρόφιμα ζυγίζονται 25 gr του δείγματος και για τα υγρά τρόφιμα μετρούνται 25 ml από αυτό. Τοποθετείται το εν λόγω τμήμα σε φιάλες που περιέχουν 225 ml πεπονιούχου νερού. Αναμείξτε και ομογενοποιήστε το δείγμα.

Εάν υπάρχει υποψία ότι το μικροβιακό φορτίο είναι υψηλά, μπορούν να γίνουν σειριακές αραιώσεις ή δεκαδικά ψηφία για να διευκολυνθεί η καταμέτρηση μονάδων σχηματισμού αποικιών (CFU).

Ο αριθμός των αραιώσεων θα εξαρτηθεί από τον τύπο του δείγματος και την αναλυτική εμπειρία.

Αν αντίθετα υπάρχει υποψία ότι το μικροβιακό φορτίο είναι πολύ χαμηλό, δεν είναι απαραίτητο να κάνετε αραιώσεις. Στη συνέχεια, υποκαλλιεργήστε σε εκλεκτικά μέσα.

Στην περίπτωση των τροφίμων από τη θάλασσα, όπως τα θαλασσινά, τα ψάρια, μεταξύ άλλων, σε αναζήτηση Vibrio cholerae ή άλλα είδη Vibrio, πρέπει να χρησιμοποιείται νερό πεπτόνης ρυθμισμένο σε ρΗ 8,5 (αλκαλικό πεπτονιούχο νερό).

Έλεγχος ποιότητας

Από κάθε παρτίδα που παρασκευάζεται, ένας ή δύο σωλήνες θα πρέπει να επωάζονται χωρίς ενοφθαλμισμό για 24 ώρες σε αερόβιοση στους 37 ° C. Στο τέλος του χρόνου, δεν πρέπει να παρατηρείται θολότητα ή αλλαγή χρώματος.

Επίσης, μπορούν να χρησιμοποιηθούν καλά γνωστά στελέχη ελέγχου για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητάς τους:

Για το σκοπό αυτό, μπορούν να χρησιμοποιηθούν τα ακόλουθα βακτηριακά στελέχη: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Σε όλες τις περιπτώσεις αναμένεται ικανοποιητική ανάπτυξη μικροβίων, η οποία παρατηρείται με θολερότητα του μέσου.

Περιορισμοί

-Το αφυδατωμένο μέσο είναι πολύ υγροσκοπικό, οπότε πρέπει να διατηρείται μακριά από την υγρασία.

-Το μέσο δεν πρέπει να χρησιμοποιείται εάν παρατηρηθεί κάποιος τύπος φθοράς.

-Το αφυδατωμένο μέσο καλλιέργειας πρέπει να φυλάσσεται μεταξύ 10 - 35 ° C

-Το παρασκευασμένο μέσο πρέπει να διατηρείται σε ψυγείο (2-8 ° C).

Αναφορές

1. Camacho Α, Giles Μ, Ortegón Α, Palao Μ, Serrano Β και Velázquez Ο. Τεχνικές για τη μικροβιολογική ανάλυση τροφίμων. 2009, 2nd ed. Τμήμα Χημείας, UNAM. Μεξικό Έκδοση για διαχειριστή εγχειριδίων και εγγράφων (AMyD) της Σχολής Χημείας, UNAM 1. Διατίθεται στη διεύθυνση: http://depa.fquim.unam.mx
2. Εργαστήρια Βρετανίας. Ρυθμισμένο νερό peptonada. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Νερό πεπτόνης. Διατίθεται στη διεύθυνση: foodsafety.neogen.com
4. Εργαστήρια Βρετανίας. Νερό πεπτόνης. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com
5. Merck Laboratories Ρυθμισμένο νερό πεπτόνης. Διατίθεται στο: merckmillipore.com
6. Εργαστήρια Conda Pronadisa. Αλκαλικό πετονιούχο νερό. Διατίθεται στη διεύθυνση: condalab.com
7. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. (2009). Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Αργεντινή.