Ίδρυμα Half SIM, προετοιμασία και χρήσεις

Το μισή SIM Πρόκειται για ένα ημιστερεό και διαφορικό άγαρ, ειδικά σχεδιασμένο για να βοηθήσει στην ταυτοποίηση ορισμένων βακτηρίων, κυρίως της οικογένειας Enterobacteriaceae. Αποτελείται από τριττεΐνη, πεπτόνη, θειικό σίδηρο, θειικό αμμώνιο, θειοθειικό νάτριο και άγαρ.

Αυτό το μέσο επιτρέπει την εκτέλεση τριών σημαντικών δοκιμών: την παραγωγή υδρόθειου (Η₂S), σχηματισμό ινδολίου και κινητικότητα, εξ ου και το ακρωνύμιο SIM. Λόγω της μεγάλης χρησιμότητάς του, δεν μπορεί να λείπει από ένα εργαστήριο βακτηριολογίας.

Σε αντίθεση με άλλα μέσα, αυτό πρέπει να είναι ημιστερεό, έτσι ώστε να είναι ανιχνεύσιμη η κινητική ικανότητα κάποιων βακτηρίων. Υπό αυτή την έννοια, η δοκιμή αυτή λειτουργεί πολύ καλά για Enterobacteriaceae, αλλά όχι σε Gram-αρνητικά, μη ζυμωτικά βακίλια, όπου προτιμάται η χρήση άλλων μεθόδων, όπως για παράδειγμα η εκκρεμούσα πτώση.

Το μέσο SIM επιτρέπει τη διάκριση ορισμένων συγκεκριμένων ιδιοτήτων που χαρακτηρίζουν ορισμένα βακτήρια σε σχέση με άλλα. Για παράδειγμα Escherichia coli διακρίνεται από το ότι είναι Η₂S (-), ινδόλη (+) και κινητικότητα (+), ενώ Proteus mirabilis είναι H₂S (+), ινδόλη (-), κινητικότητα (+).

Ευρετήριο

• 1 Ίδρυμα
  • 1.1 Πηγή ισχύος
  • 1.2 Παραγωγή υδρόθειου
  • 1.3 Κατασκευή ινδολίου
  • 1.4 Κινητικότητα
• 2 Προετοιμασία
  • 2.1 Half SIM
  • 2.2 Αντιδραστήριο Kovac
  • 2.3 Αντιδραστήριο Erlich
• 3 Χρήσεις
  • 3.1 Σπόροι
• 4 Έλεγχος ποιότητας
• 5 Περιορισμοί
• 6 Αναφορές

Ίδρυμα

Είναι ένα μέσο καλλιέργειας που θεωρείται διαφορικό, επειδή η χρήση του καταφέρνει να κάνει διάκριση μεταξύ μικροοργανισμών ικανών να παράγουν υδρόθειο από εκείνους που δεν το κάνουν. επισημαίνει επίσης εκείνους που σχηματίζουν ινδόλη από την τρυπτοφάνη εκείνων που δεν το σχηματίζουν και τελικά διαφοροποιεί το κινητικό από τα ακίνητα βακτήρια.

Πηγή ενέργειας

Ως οποιοδήποτε μέσο καλλιέργειας, έχει στοιχεία που παρέχουν τα απαραίτητα θρεπτικά συστατικά, έτσι ώστε να αναπτυχθούν μη απαιτητικοί μικροοργανισμοί. Αυτά τα στοιχεία αντιπροσωπεύονται από τις πεπτόνες και την τριτεΐνη.

Η ανάπτυξη του μικροοργανισμού στο περιβάλλον είναι απαραίτητη για να είναι σε θέση να παρατηρήσει την παρουσία ή την απουσία των χαρακτηριστικών που αξιολογούνται από αυτό το μέσο.

Παραγωγή υδρόθειου

Το γράμμα S του ακρωνύμιου SIM αναφέρεται στην παραγωγή υδρόθειου (Η₂S). Τα βακτήρια ικανά να σχηματίζουν υδρόθειο θα πάρουν το θείο του θειοθειικού νατρίου.

Μόλις σχηματιστεί το Η₂S - άχρωμα αέρια - αυτό αντιδρά με το άλας σιδήρου που υπάρχει στο μέσο, ​​σχηματίζοντας σίδηρο σιδήρου, σαφώς ορατό (μαύρο ίζημα). Βακτήρια που δεν σχηματίζουν Η₂S, αφήστε το μέσο του αρχικού χρώματος (μπεζ).

Η παρουσία του μαύρου ιζήματος μπορεί να εμποδίσει την ερμηνεία της κινητικότητας. Ωστόσο, είναι γνωστό ότι η πλειονότητα των εντεροβακτηρίων που παράγουν Η₂S είναι θετική κινητικότητα, όπως Salmonella, Proteus και Citrobacter. Επιπλέον, το μαύρο ίζημα που καλύπτει σχεδόν ολόκληρο το μέσο, ​​υποδηλώνει θετική κινητικότητα.

Εκπαίδευση ινδόλης

Το δεύτερο γράμμα του ακρωνύμιου SIM είναι το "I", το οποίο αντιπροσωπεύει το σχηματισμό ινδόλης.

Με αυτή την έννοια, η τριτεΐνη, εκτός από την ύπαρξη πηγή θρεπτικών ουσιών, εκπληρώνει μια άλλη θεμελιώδη λειτουργία. Αυτή η πεπτόνη είναι πλούσια σε ένα αμινοξύ που ονομάζεται τρυπτοφάνη, επομένως, μπορεί να δείξει τα βακτήρια που παράγουν τρυπτοφανάση.

Αυτό το ένζυμο είναι υπεύθυνο για την αποκοπή του τρυπτοφάνης αμινοξέος, με τον επακόλουθο σχηματισμό ινδόλης (άχρωμη ουσία), πυροσταφυλικού οξέος και αμμωνίου..

Αυτός είναι ο λόγος για τον οποίο, για να αποδειχθεί αυτή η αντίδραση, είναι απαραίτητο να προστεθεί μια αποκαλυπτική ουσία (αντιδραστήριο Ehrlich ή αντιδραστήριο Kovac). Είτε αντιδρά με την ινδόλη, σχηματίζοντας μια ουσία κόκκινου φούξια σε σχήμα δακτυλίου στην επιφάνεια του άγαρ. Εάν εμφανιστεί ο δακτύλιος φούξιας, η δοκιμή ινδόλης ερμηνεύεται ως θετική.

Τα βακτήρια που δεν έχουν αυτό το ένζυμο, δεν θα σχηματίσουν τον δακτύλιο και ερμηνεύονται ως αρνητικό τεστ ινδόλης.

Είναι σημαντικό να επισημανθεί ότι η δοκιμή ινδόλης πρέπει να είναι η τελευταία που πρέπει να ερμηνευθεί, αφού μόλις προστεθεί το αντιδραστήριο, το μέσο γίνεται θολό, καθιστώντας δύσκολη την οπτικοποίηση της κινητικότητας.

Κινητικότητα

Τέλος, το γράμμα "M" της λέξης SIM σημαίνει κινητικότητα. Για να είναι σε θέση να αξιολογήσει την κινητικότητα, αυτό το μέσο είναι στρατηγικά ημιστερεό, επειδή αυτό το χαρακτηριστικό είναι απαραίτητο για να είναι σε θέση να παρατηρήσει εάν υπάρχει ή όχι βακτηριακή κίνηση. Τα βακτήρια που έχουν μαστίγια είναι εκείνα που δίνουν αυτό το θετικό τεστ.

Μια θετική δοκιμή θα είναι εμφανής όταν παρατηρείται θολότητα, τόσο στο αρχικό εμβόλιο όσο και γύρω από αυτό. Ενώ τα μη-κινητά βακτήρια αναπτύσσονται μόνο στην αρχική διαδρομή ενοφθαλμισμού.

Προετοιμασία

Μισή SIM

Ζυγίζονται 30 g του αφυδατωμένου μέσου και διαλύονται σε ένα λίτρο απεσταγμένου νερού. Το μίγμα αφήνεται σε ηρεμία επί 5 λεπτά και στη συνέχεια θερμαίνεται μέχρι βρασμού, αναδεύοντας συχνά μέχρι να διαλυθεί πλήρως..

Διανείμετε το μείγμα στους δοκιμαστικούς σωλήνες με βαμβακερό καπάκι και αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά. Αφαιρέστε τη σχάρα σωλήνα από τον αυτόκαυστο και αφήστε την να στερεοποιηθεί σε όρθια θέση, έτσι ώστε το μέσο να είναι σε σχήμα μπλοκ..

Για αποθήκευση, φυλάσσεται στο ψυγείο μέχρι να χρησιμοποιηθεί. Το παρασκευασμένο μέσο πρέπει να έχει τελικό ρΗ 7,3 ± 0,2.

Τη στιγμή της εμβολιασμού του μέσου, πρέπει να βρίσκεται σε θερμοκρασία δωματίου. Το χρώμα του μέσου είναι μπεζ.

Αντιδραστήριο Kovac

Μετρήστε 150 ml αμυλίου ή ισοαμυλίου ή βουτυλοαλκοόλης. (Χρησιμοποιήστε ένα από τα τρία που αναφέρονται).

Διαλύονται 10 g ρ-διμεθυλαμινοβενζαλδεΰδης. Στη συνέχεια, προσθέστε αργά 50 ml πυκνού υδροχλωρικού οξέος.

Το αντιδραστήριο έτοιμο για χρήση είναι άχρωμο ή ανοικτό κίτρινο. Πρέπει να φυλάσσεται σε φιάλη κεχριμπαριού και να φυλάσσεται σε ψυγείο. Μην το χρησιμοποιείτε αν χρειάζεται σκούρο καφέ χρώμα. που δείχνει ότι είναι κατεστραμμένο. Αυτό το αντιδραστήριο προτιμάται όταν ασχολείται με enterobacteria.

Αντιδραστήριο Erlich

Ζυγίζονται 2 g ρ-διμεθυλαμινοβενζαλδεϋδης και διαλύονται σε 190 ml απόλυτης αιθυλικής αλκοόλης και αναμιγνύονται βραδέως με 40 ml πυκνού υδροχλωρικού οξέος. Φυλάξτε το αντιδραστήριο του Kovac με τον ίδιο τρόπο. Το αντιδραστήριο Ehrlich χρησιμοποιείται περισσότερο για μη ζυμωτικά και αναερόβια βακτήρια.

Χρησιμοποιεί

Το μέσο SIM χρησιμοποιείται ιδιαίτερα στα βακτηριολογικά εργαστήρια. Έχει το πλεονέκτημα ότι στον ίδιο σωλήνα μπορούν να παρατηρηθούν τρία βασικά χαρακτηριστικά στην ταυτοποίηση των Enterobacteriaceae.

Σπαρμένο

Ο σωστός τρόπος σποράς αυτού του μέσου είναι με τη χρήση της βελόνας, με την οποία λαμβάνεται και εισάγεται ένα μέρος της καθαρής αποικίας που πρόκειται να μελετηθεί και τοποθετείται στο κέντρο του μέσου κάθετα. Πρέπει να γίνει μια ενιαία ώθηση. Η διάτρηση δεν πρέπει να φτάσει στο κάτω μέρος του σωλήνα, το σωστό πράγμα είναι να καλύψει μόνο τα δύο τρίτα του βάθους.

Δεν ενδείκνυται η επανάληψη του ενοφθαλμισμού, καθώς αυτό μπορεί να οδηγήσει σε ψευδείς ερμηνείες της θετικής κινητικότητας. Το εμβολιασμένο μέσο επωάζεται σε αερόβιοση στους 37 ° C για 24 ώρες.

Ολοκληρώθηκε ο χρόνος που παρατηρείται αν υπήρχε ή όχι παραγωγή Η₂S και η κινητικότητα διαβάζεται. Τέλος, αποκαλύπτεται η ινδόλη, προσθέτοντας 3 έως 4 σταγόνες του αντιδραστηρίου Ehrlich ή Kovac, αναμιγνύονται απαλά και ερμηνεύονται.

Έλεγχος ποιότητας

Ως έλεγχος στειρότητας, ένας ή δύο σωλήνες επωάζονται χωρίς εμβολιασμό σε φούρνο στους 37 ° C για 24 ώρες. Αναμένεται ότι μετά από αυτό το διάστημα δεν θα υπάρξει αύξηση ή αλλαγή χρώματος.

Ως ποιοτικός έλεγχος μπορούν να χρησιμοποιηθούν πιστοποιημένα γνωστά στελέχη, όπως: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Τα αναμενόμενα αποτελέσματα είναι: Escherichia coli H₂S αρνητικό, ινδόλη και θετική κινητικότητα, Enterobacter aerogenes μόνο θετική κινητικότητα, Salmonella typhimurium H₂S και θετική κινητικότητα, με αρνητική ινδόλη. Proteus vulgaris όλα θετικά, ενώ Klebsiella pneumoniae και Shigella sonnei όλα αρνητικά.

Περιορισμοί

-Μερικά στελέχη του Morganella morganii, μεταξύ άλλων στελεχών μπορεί να παράγει μια καφετή χρωστική ουσία σε αυτό το μέσο λόγω της παραγωγής μελανίνης, αυτό δεν πρέπει να συγχέεται με το ίζημα του σουλφιδίου του σιδήρου. Σε άπειρους επαγγελματίες αυτή η κατάσταση μπορεί να δημιουργήσει ψευδώς θετικά στην ερμηνεία της δοκιμασίας Η₂S.

-Τα αυστηρά αερόβια βακτήρια θα αναπτυχθούν μόνο στην επιφάνεια του σωλήνα, γεγονός που δυσχεραίνει την ερμηνεία της κινητικότητας.

Αναφορές

1. BD Laboratories BBL SIM Medium. 2008. Διαθέσιμο στη διεύθυνση: bd.com
2. Neogen Laboratories SIM Medium. Διατίθεται σε: foodsafety
3. Διακο Φρανσίσκο Σόρια Μελουζίζο. SIM Medium. 2009. Διατίθεται στη διεύθυνση: http://f-soria.es
4. Εργαστήριο Brizuela-Lab SIM Medium. Διατίθεται στη διεύθυνση: .brizuela-lab.com
5. Εργαστήρια Βρετανίας. SIM Medium. 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: studyres.es/doc
6. Koneman Ε, Allen S, Janda W, Schreckenberger Ρ, Winn W. (2004). Μικροβιολογική διάγνωση. 5η έκδοση. Editorial Panamericana S.A. Αργεντινή.