MIO μεσαία θεμέλια, προετοιμασία και χρήσεις



Το μισό MIO είναι μια βιοχημική δοκιμασία που χρησιμοποιείται για να βοηθήσει στην ταυτοποίηση ειδών βακτηρίων που ανήκουν στην οικογένεια Enterobacteriaceae. Είναι αρκετά θρεπτικό και αποτελείται από γλυκόζη, εκχύλισμα ζυμομυκήτων, πεπτόνη, τριτεΐνη, υδροχλωρική L-ορνιθίνη, μωβ βρωμοκρεσόλη και άγαρ.

Η σημασία του αρκτικόλεξου (MIO) περιγράφει καθεμία από τις παραμέτρους που μπορούν να παρατηρηθούν σε αυτό το μέσο. κινητικότητα, ινδόλη και ορνιθίνη. Η κινητικότητα είναι η ικανότητα του μικροοργανισμού να μετακινείται από την παρουσία μαστιγίων. Προκειμένου να παρατηρηθεί αυτή η ιδιότητα, η σύσταση του μέσου πρέπει να είναι ημιστερεή, οπότε το παρασκεύασμα έχει μικρότερη ποσότητα άγαρ..

Παραγωγή ινδόλης μαρτυρά την παρουσία του ενζύμου tryptophanase δρουν στο αμινοξύ τρυπτοφάνη, που απαιτούν τη χρήση ενός αντιδραστηρίου ανάπτυξης με την παραγωγή ορατή ινδόλη.

Τέλος, η ορνιθίνη καθορίζει εάν το βακτήριο είναι ικανό να αποκαρβοξυλιώσει το αμινοξύ, δηλαδή εάν έχει το ένζυμο ή την αποκαρβοξυλάση της.

Ευρετήριο

  • 1 Ίδρυμα
    • 1.1 Πεπτόνη, εκχύλισμα ζύμης και τρίθεν
    • 1.2 Κινητικότητα
    • 1.3 Γλυκόζη
    • 1.4 L-Ορνιθίνη
    • 1,5 δείκτης pH
  • 2 Τεχνική σποράς και ανάπτυξης
  • 3 Προετοιμασία
    • 3.1 MIO Medium
    • 3.2 Αντιδραστήριο Kovacs (κατασκευαστής δοκιμής ινδόλης)
  • 4 Χρήση
  • 5 Έλεγχος ποιότητας
  • 6 Αναφορές

Ίδρυμα

Πεπτόνη, εκχύλισμα ζυμομύκητα και τρίθεν

Αυτά τα στοιχεία συμβάλλουν στη θρεπτική δύναμη αυτού του μέσου. Χρησιμεύουν ως πηγή θρεπτικών συστατικών και απαραίτητα αμινοξέα για βακτηριακή ανάπτυξη.

Επιπλέον, το triptein είναι μια πηγή τρυπτοφάνης για να αποδείξει την παρουσία του ενζύμου τρυπτοφανάση, η οποία υποβαθμίζει την τρυπτοφάνη με μια αναγωγική απελευθέρωση που απελευθερώνει ινδόλη, πυροσταφυλικό οξύ, αμμωνία και ενέργεια.

Η ινδόλη είναι άχρωμη, οπότε η παρουσία της αποκαλύπτεται προσθέτοντας πέντε σταγόνες αντιδραστηρίου Ehrlich ή Kovacs, αμφότερα με ρ-διμεθυλαμινοβενζαλδεϋδη.

Η αλδεϋδική ομάδα αυτής της ένωσης αντιδρά με ινδόλη, δημιουργώντας ένα ερυθρό φούξια σε σχήμα δακτυλίου στην επιφάνεια άγαρ.

Κάθε ίχνος χρώματος πρέπει να θεωρείται ως θετική απόδειξη. Η δοκιμή πρέπει να διαβαστεί αμέσως, διότι μετά από λίγο το χρώμα υποβαθμίζεται.

Από την άλλη πλευρά, η δοκιμή αυτή θα πρέπει να αποκαλυφθεί μετά την καταγραφή των αποτελεσμάτων της κινητικότητας και της αποκαρβοξυλίωσης της ορνιθίνης..

Ερμηνεία

Θετική δοκιμή: σχηματισμό ενός ερυθρού δακτυλίου φούξια κατά την προσθήκη σταγόνων αντιδραστηρίου Kovacs.

Αρνητική δοκιμή: δεν υπάρχει σχηματισμός δακτυλίων.

Κινητικότητα

Η ικανότητα των βακτηρίων να κινηθούν θα αποδειχθεί εάν παρατηρηθεί θολό μέσο ή εάν υπάρχει μια παχιά γραμμή ανάπτυξης που επεκτείνεται γύρω από τον αρχικό εμβολιασμό.

Μια αρνητική δοκιμασία κινητικότητας θα αποδειχθεί με την παρατήρηση μιας λεπτής γραμμής ανάπτυξης, και όλα γύρω θα είναι χωρίς ανάπτυξη.

Είναι σημαντικό να διαβάζεται η κινητικότητα πριν αποκαλυφθεί η ινδόλη, δεδομένου ότι η προσθήκη του αντιδραστηρίου ανακάμπτει ολόκληρο το μέσο.

Στα κινητά αλλά αργά αναπτυσσόμενα βακτήρια είναι δύσκολο να αποδειχθεί η κινητικότητά τους με αυτό το μέσο. Σε αυτή την περίπτωση συνιστάται η χρήση άλλων δοκιμών ή μεθόδων, όπως το μέσο κινητικότητας ή η μέθοδος πτώσης σταγόνων.

Γλυκόζη

Η γλυκόζη είναι ο ζυμώμενος υδατάνθρακας ο οποίος εκτός από την παροχή ενέργειας οξύνει το μέσο, ​​απαραίτητη προϋπόθεση για την αποκαρβοξυλίωση του ορνιθίνης αμινοξέων.

Η ζύμωση της γλυκόζης πρέπει πάντα να πραγματοποιείται, με βάση την αρχή ότι όλα τα βακτηρίδια που ανήκουν στην οικογένεια Enterobacteriaceae ζυμώνουν τη γλυκόζη.

L-Ορνιθίνη

Εάν το βακτήριο παράγει το ένζυμο αποκαρβοξυλάση ορνιθίνης, μπορεί να δράσει μόλις το μέσο έχει οξυνιστεί με τη ζύμωση της γλυκόζης.

Το ένζυμο αποκαρβοξυλάση ορνιθίνης δρα στην καρβοξυλική ομάδα του αμινοξέος παράγοντας μια αμίνη που ονομάζεται καφεσίνη η οποία αλκαλικοποιεί το θρεπτικό μέσο ξανά.

Η δοκιμή αυτή θα πρέπει να διαβάζεται μετά από 24 ώρες επώασης, διότι αν προσπαθήσετε να διαβάσετε πριν μπορέσετε να παρερμηνεύσετε τη δοκιμή με ένα ψευδώς αρνητικό.

Πρέπει να θυμόμαστε ότι η πρώτη αντίδραση που συμβαίνει είναι η ζύμωση της γλυκόζης, έτσι ώστε το μέσο να γίνει κίτρινο σε αρχική φάση (πρώτες 10 έως 12 ώρες). Εάν στη συνέχεια λάβει χώρα η αποκαρβοξυλίωση της ορνιθίνης, το μέσο θα γίνει μοβ.

Είναι σημαντικό να ερμηνευθεί η δοκιμή αποκαρβοξυλικής ορνιθίνης πριν αποκαλυφθεί η ινδόλη, δεδομένου ότι η προσθήκη αντιδραστηρίου Kovacs τροποποιεί το χρώμα του μέσου.

Ερμηνεία

Αρνητική δοκιμή: μεσαίο κίτρινο ή με κίτρινο φόντο.

Θετική δοκιμή: εντελώς μοβ.

PH δείκτη

Σε αυτή την περίπτωση χρησιμοποιείται μωβ βρωμοκρεσόλης. ο υπεύθυνος για την αποκάλυψη όταν υπάρχει αλλαγή στο pH στη μέση. Όταν οξεοποιηθεί, ο δείκτης γίνεται κίτρινος και όταν το αλκαλοποιημένο μετατρέπεται σε μοβ.

Τεχνική σποράς και ανάπτυξης

Για να φυτέψετε το μέσο MIO, χρησιμοποιείται ένας ίσιος βρόχος ή βελόνα και μαζί του συλλέγεται ένα τμήμα της αποικίας που πρόκειται να μελετηθεί..

Μια βαθιά παρακέντηση γίνεται στο μέσο MIO σε ευθεία γραμμή. Δεν είναι σκόπιμο να πραγματοποιηθεί διπλή παρακέντηση, καθώς μπορεί να δώσει μια εικόνα ψευδούς κινητικότητας αν οι διατρήσεις δεν εκτελούνται στον ίδιο τόπο.

Επωάστε για 24 έως 48 ώρες στους 37 ° C σε αερόβιο. Παρατηρήστε τα αποτελέσματα με αυτή τη σειρά: κινητικότητα, αποκαρβοξυλίωση ορνιθίνης και τέλος αποκαλύψτε την ινδόλη.

Καλό θα είναι να απομακρυνθεί ασηπτικά 2 ml μέσου, τη μεταφορά της σε ένα αποστειρωμένο σωλήνα και να εκτελέσει εκεί το τεστ ινδόλης, έτσι ώστε αν δίνει αρνητικό μπορεί να επωαστεί το υπόλοιπο του αρχικού σωλήνα για 24 ώρες, και πάλι για να αποκαλύψει ινδόλη.

Η ανάπτυξη ινδόλης διεξάγεται με τον ακόλουθο τρόπο: 3 έως 5 σταγόνες του αντιδραστηρίου Kovacs προστίθενται στο μέσο ΜΙΟ και αναδεύονται έντονα. Παρατηρείται ότι εμφανίζεται κόκκινο δακτύλιο φούξιας ή όχι.

Προετοιμασία

Μισό MIO

Ζυγίζονται 31 gr του μέσου MIO και διαλύονται σε ένα λίτρο απεσταγμένου νερού.

Θερμάνετε μέχρις ότου το μείγμα βράσει για ένα λεπτό, αναδεύοντας συχνά μέχρι να διαλυθεί πλήρως το άγαρ. Διανείμετε 4 ml του μέσου σε δοκιμαστικούς σωλήνες 13/100 με βαμβάκι.

Αποστειρώστε σε αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά. Αφαιρέστε το από το αυτόκλειστο και αφήστε το να στέκεται ευθεία σε μια σχάρα, με τέτοιο τρόπο ώστε να σχηματίζεται ένα ημι-στερεό μπλοκ.

Φυλάσσετε σε ψυγείο 2-8 ° C. Αφήστε να κρυώσει πριν φτιάξετε το βακτηριακό στέλεχος.

Το χρώμα του αφυδατωμένου μέσου είναι μπεζ και αυτό του μέσου παρασκευάζεται ελαφρώς πορφυρό οπαλίσκο.

Το τελικό ρΗ του παρασκευασθέντος μέσου είναι 6,5 ± 0,2

Το μέσο γίνεται κίτρινο με όξινο pH και είναι πορφυρό σε αλκαλικό pH.

Αντιδραστήριο Kovacs (κατασκευαστής δοκιμής ινδόλης)

Το αντιδραστήριο αυτό παρασκευάζεται ως εξής:

Λαμβάνονται 150 ml αμυλίου, ισοαμυλίου ή βουτυλο αλκοόλης (οποιοδήποτε από τα τρία). Σε αυτό διαλύονται 10 g ρ-διμεθυλαμινοβενζαλδεΰδης. Ακολούθως προστίθενται βραδέως 50 ml πυκνού υδροχλωρικού οξέος.

Το παρασκευασμένο αντιδραστήριο είναι άχρωμο ή ανοικτό κίτρινο. Πρέπει να φυλάσσεται σε φιάλη κεχριμπαριού και να φυλάσσεται σε ψυγείο. Ένα σκούρο καφέ χρώμα δείχνει την φθορά του.

αντιδραστήριο Kovacs μπορεί επίσης να αντικατασταθεί από το αντιδραστήριο Ehrlich. Ο τελευταίος, όντας πιο ευαίσθητη, προτιμάται για να αποκαλύψει την ινδόλη σε βακτήρια που παράγουν μικρές ποσότητες, όπως σε μερικές μη-ζυμωτικά Gram αρνητικών βακίλλων και ορισμένων αναερόβια.

Χρήση

Αυτό το μέσο είναι μια δοκιμή που συμπληρώνει μια σειρά βιοχημικών εξετάσεων για την ταυτοποίηση των βακτηριδίων που ανήκουν στην οικογένεια Enterobacteriaceae.

Τα δεδομένα απο-καρβοξυλίωσης της ορνιθίνης χρησιμεύουν για τη διαφοροποίηση Shigella sonnei, που δίνει θετική, του Shigella boydii, Shigella flexneri και S. dysenterieae, που δίνουν αρνητικά.

Διακρίνει επίσης το γένος Klebsiella, το οποίο δίνει αρνητικό, το γένος Enterobacter, όπου τα περισσότερα από τα είδη του είναι θετικά.

Έλεγχος ποιότητας

Κάθε φορά που παρασκευάζεται μια παρτίδα μέσου MIO, μπορεί να γίνει μια δοκιμή ελέγχου. Για το σκοπό αυτό χρησιμοποιούνται γνωστά ή πιστοποιημένα στελέχη για την παρακολούθηση της συμπεριφοράς του μέσου.

Τα στελέχη που μπορούν να χρησιμοποιηθούν είναι Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes και Proteus mirabilis.

Τα αναμενόμενα αποτελέσματα είναι Ε. Coli και Μ. Morganii. Dan M: +, Ι: + και Ο: +.

Klebsiella pneumoniae δίνει όλα τα αρνητικά (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis και Enterobacter aerogenes dan Μ: + Ι: - και Ο: +.

Αναφορές

  1. Mac Faddin Ι. (2003). Βιοχημικές δοκιμές για την ταυτοποίηση βακτηρίων κλινικής σημασίας. 3η έκδοση. Συντάκτης Panamericana. Μπουένος Άιρες Αργεντινή.
  2. Forbes Β, Sahm D, Weissfeld Α. (2009). Μικροβιολογική διάγνωση της Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Αργεντινή.
  3. Koneman Ε, Allen S, Janda W, Schreckenberger Ρ, Winn W. (2004). Μικροβιολογική διάγνωση. 5η έκδοση. Editorial Panamericana S.A. Αργεντινή.
  4. Εργαστήρια Βρετανίας. MIO Medio 2015. Διατίθεται στη διεύθυνση: britanialab.com
  5. BD Laboratories Μονάδα BBL κινητικότητας Ινδόλη Ορνιθίνη (MIO) Medium. 2007. Διαθέσιμο στη διεύθυνση: bd.com
  6. Valtek Laboratories Μέσο Μ.Ι.Ο. Κινητικότητα, Ινδόλη, Ορνιθίνη. 2010. Διαθέσιμο στη διεύθυνση: andinamedica.com